HPLC法测定蒙药材金露梅中没食子酸含量

2024-04-14郭凤英闫凤杰关金凤莫日根高娃于海云

中国民族民间医药·下半月 2024年1期

郭凤英闫凤杰关金凤莫日根高娃于海云

【摘要】目的：建立高效液相法测定金露梅中没食子酸含量。方法：采用Kromasil 100-5-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，以甲醇-0.1 %磷酸（10∶90）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长273 nm，柱温30 ℃，进样量为10 μL。结果：没食子酸在3.44～137.52 μg/mL范围内线性关系良好，相关系数r=1.000；平均回收率为99.4 %（RSD %=1.588 %）；6批不同产地金露梅中没食子酸含量在3.156～11.537 mg/g之间。结论：所建立的高效液相法稳定可靠，可用于金露梅中没食子酸的含量测定。

【关键词】蒙药材；金露梅；没食子酸；高效液相；含量测定

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2024）02-0024-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.02.zgmzmjyyzz202402006

Determination of Gallic Acid in Mongolian Medicine Potentilla Fruticosa by HPLC

GUO Fengying YAN Fengjie GUAN Jinfeng Morigengaowa YU Haiyun

Tongliao Market Testing and Inspection Center，Tongliao 028000，China

Abstract：Objective To establish an high performance liquid chromatography method for determination of gallic acid in Mongolian medicine potentilla fruticosa.Methods The test was performed in Kromasil 100-5-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）under the elution of methanol-0.1 % phosphoric acid（10∶90）.The flow rate was 1.0 ml/min and the wavelength was set as 273 nm.The column temperature was 30 ℃ and the injection volume was 10 μL.Result The liner ranges of gallic acid fell into 3.44-137.52 μg/mL（r=1.000）.The average recovery of gallic acid was 99.4 %（RSD=1.588 %）.The determination of galllic acid in potentilla fruticosa from 6 places of origin fell into 3.156-11.537 mg/g.Conclusion The established method is simple，stable and reliable.It can be used for determination of gallic acid in Mongolian medicine potentilla fruticosa.

Keywords：Mongolian Medicine;Potentilla Fruticosa;Gallic Acid;HPLC;Contention Determination

金露梅（Potentilla fruticosa L.）又名“金老梅”“药王茶”等，为蔷薇科委陵菜属落叶灌木，株高0.5～2 m，多分枝，羽状复叶，花瓣黄色［1］。全株可入药，具有清暑热、益脑清心、健胃消食及预防心脑血管疾病等药用功效［2］。没食子酸为金露梅中活性成分之一［3］，具有抗炎、抗菌、抗病毒和抗肿瘤等多种生物活性［4-11］。目前未见对金露梅中没食子酸含量测定的研究。本文以不同產地来源的金露梅为试验药材，建立其活性成分没食子酸的高效液相含量测定方法，同时比较了不同产地的含量差异，为金露梅在临床上的应用提供科学依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 SHIMADZU LC-2030C 3D Plus 高效液相色谱仪（二极管阵列检测器，LabSolution 工作站）；Kromasil 100-5-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；MS105DU型电子天平；DZKW-S-6数显恒温水浴锅。

1.2 材料没食子酸对照品（批号：110831-201906，含量91.5 %，中国食品药品检定研究院）；水为高纯水；甲醇为色谱纯，盐酸及磷酸均为优级纯。6批药材均为自采，经鉴定，均为金露梅（Potentilla fruticosa L.）。样品来源见表1。

2 方法与结果

《中华人民共和国药典》［12］所载药材余甘子、五倍子、委陵菜和地榆与金露梅含有相同的药效成分——没食子酸，故本研究以其含量测定项下的色谱条件作为参考，经反复对比试验，从理论塔板数，分离效果，拖尾因子及出锋时间等方面进行考察，最终采用以下色谱条件进行试验。

2.1 色谱条件 Kromasil 100-5-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；流动相为甲醇-0.1 %磷酸（10∶90）；流速为1.0 mL/min；检测波长273 nm；柱温30 ℃；进样量为10 μL；记录时间为20 min；理论板数按没食子酸计算，不低于5000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品储备液的制备精密称取没食子酸对照品（含量91.5%）0.01252 g，置10 mL量瓶中，加50 %甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为1.146 mg/mL的没食子酸对照品储备液。

2.2.2 供试品溶液的制备精密称取金露梅供试品粉末（过四号筛）0.1 g，置250 mL锥形瓶中，精密加入4 mol/L盐酸溶液25 mL，称定重量，于水浴上加热回流60 min，冷却，称定重量，用4 moL/L盐酸补足减失重量，摇匀，滤过，续滤液过0.45 μm滤膜，即得。

2.3 线性关系考察分别精密量取“2.2.1”项下的没食子酸对照品储备液30 μL、50 μL、100 μL、150 μL、300 μL、400 μL、500 μL、600 μL、1200 μL，置10 mL量瓶中，用4 mol/L盐酸稀释至刻度，摇匀，即得实际含没食子酸分别为3.44 μg/mL、5.73 μg/mL、11.46 μg/mL、17.19 μg/mL、34.38 μg/mL、45.84 μg/mL、57.30 μg/mL、68.78 μg/mL、137.52 μg/mL系列浓度的对照品溶液。精密量取上述系列溶液10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。以对照品浓度（μg/mL）为横坐标X，以对照品峰面积为纵坐标Y，做线性回归方程，得到Y=24561X-41022，r=1.000。表明没食子酸在3.44～137.52 μg/mL范围内呈良好的线性关系。如图1所示。

2.4 精密度试验精密称取内蒙古阿尔山Sample-2样品0.1013 g，按“2.2.2”项下的方法制成精密度试验溶液，精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，重复进样6次，测得峰面积的平均值为883641，RSD %为0.241 %，表明该方法的精密度良好。见表2。

2.5 稳定性试验精密称取内蒙古阿尔山Sample-2样品0.1016 g，按“2.2.2”项下的方法制成稳定性试验溶液，精密吸取10 μL，分别于0 h、3 h、6 h、9 h、12 h、24 h注入液相色谱仪，测定峰面积。结果显示24 h内峰面积RSD %为0.348 %，表明该方法提取的样品溶液在24 h内的稳定性良好。见表3。

2.6 重复性试验取约0.1 g内蒙古阿尔山Sample-2样品6份，精密称定，按“2.2.2”项下的方法制成重复性试验溶液，精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。依据2.3项中的线性回归方程计算6份样品中没食子酸含量，结果显示6份样品中没食子酸平均含量为9.261 mg/g，含量RSD %为0.675 %，表明该方法的重复性良好。见表4。

2.7 加标回收率试验取已知含量内蒙古阿尔山Sample-2样品（平均含量9.261 mg/g）6份，各约0.05 g，精密称定，置250 mL锥形瓶中，分别精密加入没食子酸对照品储备液0.4 ml，按2.2.2项下的方法，制成加标回收溶液，精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。计算回收率，结果见表5，加标回收率平均值为99.4 %，RSD %为1.588 %。

2.8 不同产地样品含量测定取表1中6批产地药材，按照2.2.2项下的方法，制成6批供试品溶液，精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，按外标法计算每批样品中没食子酸含量，结果见表6。从表中数据可以看出，6批产地的金露梅中，没食子酸含量在3.156～11.537 mg/g之间，差异明显。其中图里河产地的含量约是蛮汉山产地的4倍。造成含量差别大的原因可能是生长环境不同，光照、土壤、水源及温湿度等条件的差异，影响了金露梅植株的生长和代谢过程。

3 讨论

参照《中华人民共和国药典》2020年版一部“余甘子、五倍子、委陵菜和地榆”等药材含量测定项下没食子酸的测定方法［9］，以甲醇-0.1%磷酸（10∶90）为流动相，检测波长273 nm，此条件下没食子酸检测灵敏度高，其它组分对目标峰无干扰，保留时间适宜，理论塔板数较高。

药材粉末以4 moL/L盐酸为提取溶剂，采用加热回流方式提取，为保证没食子酸提取完全，考察了回流30 min、60 min和120 min的提取含量，结果在回流60 min时含量已达到最高，故提取时间定为60 min。

含量测定结果显示：6批产地金露梅中没食子酸含量差异明显，在3.156～11.537 mg/g之间。内蒙古图里河产地的金露梅中没食子酸含量最高，在金露梅选购和临床选用上可作为首选参考因素。

通过精密度、稳定性、重复性和加标回收率试验，结果表明该方法简便易行，准确可靠，可作为金露梅中没食子酸含量测定的方法。

参考文献

［1］

中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志［M］.北京：科学出版社，1993：240.

［2］劉伟.金露梅属2种植物的主要有效成分与生态因子的相关性研究［D］.咸阳：西北农林科技大学，2012.

［3］孙玉侠.金露梅化学成分及生物活性的研究［D］.西宁：青海师范大学，2017.

［4］陈志龙，黄运茂王一冰，等.没食子酸的生物学特性及其在畜禽生产中的应用进展［J］.饲料工程，2022，43（8）：59-64.

［5］张小莉.没食子中没食子酸提取及抑菌效力比较［J］.海峡药学，2021，33（2）：76-78.