南鹤虱水提物及乙醇提取物对小鼠皮肤刺激性的初步研究

赵思烨 叶明星 陈山珊 丘志龙 苟文韬 颜伟泓 张伟云

【摘 要】 目的：研究南鹤虱的水提物和乙醇提取物对皮肤产生刺激性反应，以评价其安全性。方法：参考国家食品药品监督管理总局发布的《中华人民共和国国家标准化妆品安全性评价程序和方法》，通过皮肤刺激性实验，分析南鹤虱的水提物及乙醇提取物皮肤应用的安全性，为南鹤虱的开发利用提供理论依据。结果：一次给药皮肤刺激性实验中，小鼠的皮肤反应刺激强度得分均小于0.5分；连续多次给药皮肤刺激性实验中，小鼠的皮肤反应刺激强度得分均为0分，表明南鹤虱的水提物和乙醇提取物对小鼠的正常皮肤及划伤皮肤均无刺激性。结论：南鹤虱的水提物和乙醇提取物对小鼠的正常皮肤及划伤皮肤均无刺激性，为今后开发南鹤虱护肤的相关产品提供一定的参考价值。

【关键词】 南鹤虱；水提物；乙醇提取物；皮肤刺激性

【中图分类号】R285.5   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2024）02-0014-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.02.zgmzmjyyzz202402004

Preliminary Research on the Effect of Aqueous Extract and Alcohol

Extract of Daucus carota L．on the Skin of Mice

ZHAO Siye1 YE Mingxing1 CHEN Shanshan1 QIU Zhilong1 GOU Wentao1 YAN Weihong1 ZHANG Weiyun1，2*

1.Department of Pharmacy，Xiamen Medical College/Xiamen Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Bio-engineering，

Xiamen 361023，China;

2.College of Pharmacy，Fujian Medical University，Fuzhou 350122，China

Abstract：Objective To study whether the aqueous extract and alcohol extract of Daucus carota L.induced irritating reactions to the skin to evaluate its safety.Methods Referring to the “Safety Evaluation Procedures and Methods of National Standards for Cosmetics of the Peoples Republic of China” issued by the State Food and Drug Administration，the safety of aqueous extract and ethanol extract skin application of Daucus carota L.was analyzed through skin irritation experiments，which provided a theoretical basis for the development and utilization of Daucus carota L.Results In one administered skin irritation experiment，the skin response stimulation intensity score of mice was less than 0.5 points，and in the continuous skin irritation experiment，the skin response stimulation intensity score of mice was 0，indicating that the aqueous extract and alcohol extract of Daucus carota L.had no irritation to normal skin and scratched skin of mice.Conclusion The aqueous extract and alcohol extract of Daucus carota L.had no irritation to normal skin and scratched skin of mice，which providedcertain reference value for the development of skin care products of Daucus carota L.in the future.

Keywords：Daucus carota L.;Aqueous Extract;Alcohol Extract;Skin Irritation

南鹤虱又称窃衣子、野萝卜子，是伞形科植物野胡萝卜（Daucus carota L.）的干燥成熟果实，在我国主要分布于江苏、湖北、陕西、河南等省［1］。南鹤虱性平，味苦，微毒性；其归脾、胃经；具有杀虫消积功效［2］，用于蛔虫、蛲虫、绦虫病等体内虫积病症的治疗［3］。《新修本草》中记载该药“主蛔、晓虫，为散”；《开宝本草》中记载该药 “虫心痛，以淡醋和半匕服”，功效皆为杀虫［4］。

南鹤虱的化学成分主要有挥发油、萜类、黄酮、甾体类等［5-9］。研究［10］表明，南鹤虱的挥发性成分对蚊幼虫具有很好的杀灭作用；南鹤虱的甲醇提取物、戊烷提取物有一定的抑菌、抗肿瘤作用［11-12］；南鹤虱中还存在具有改善认知功能障碍［13］、修复肝脏损伤［14］等作用的成分。目前已有学者尝试将南鹤虱用于治疗皮肤病［15］，且在现代研究中乙醇和水为最常用的提取溶剂［16］，水是强极性溶剂，南鹤虱中的亲水性成分都能被水溶出，乙醇是最常用的亲水性有机溶剂，乙醇的溶解范围广，故本实验采用水、乙醇分别对南鹤虱进行提取，为进一步验证其皮肤用药的安全性，故開展皮肤刺激性实验，皮肤刺激性实验能够反映受试物对皮肤是否存在刺激性，可用于初步评价受试物作用于皮肤的安全性。

实验以南鹤虱的水提物和乙醇提取物作为研究对象，分别对小鼠正常皮肤及划伤皮肤涂抹给药，通过观察小鼠的皮肤情况和计算皮肤刺激积分的平均分值，从而评价南鹤虱皮肤用药的安全性，为后续进一步研发南鹤虱的护肤产品提供一定的理论依据。

1 实验材料

1.1 实验药材 实验所用南鹤虱采自中国河南省，由厦门医学院药学系中药学专业的向云亚老师鉴定其为伞形科植物野胡萝卜（Daucus carota L.）的干熟成熟果实。

1.2 实验动物 健康SPF级ICR小鼠36只，雌雄各半，体重20～25 g，浙江省实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK（浙）2019-0002，合格证编号：20210506Abzz0100000542（雌）、20210506Abzz0100000316（雄）。

1.3 仪器 脱毛膏（广州诺菲化妆品有限公司）、EYEL4旋转蒸发仪（上海爱朗仪器公司）。

2 实验方法

2.1 提取物的制备

2.1.1 南鹤虱水提物的制备 取河南产南鹤虱药材500 g，分为5份，每份分别与1000 mL的蒸馏水共同加入2000 mL圆底烧瓶中，浸泡1 h，电热套设定温度为150 ℃，将药材加热煎煮至沸腾，共煎3次，每次1 h，停止加热，将3次滤液合并。重复上述实验操作4次，合并滤液，浓缩，得到南鹤虱水提物（3.3 g生药/mL），置于4 ℃冰箱暂存备用。

2.1.2 南鹤虱乙醇提取物的制备 取河南产南鹤虱药材500 g，分为5份，每份分别与1000 mL的75%乙醇溶液共同加入2000 mL圆底烧瓶中，电热套设定温度为85 ℃，回流提取3次，每次1 h，将三次滤液合并，重复上述实验操作4次，合并滤液，浓缩，得到南鹤虱乙醇提取物（3 g生药/mL），置于4 ℃冰箱暂存备用。

2.2 一次给药皮肤刺激性实验 取SPF级ICR小鼠18只，雌雄各半，随机分为3组：空白对照组、一次给药水提物组和一次给药醇提物组，每组6只。随机分组后，使用脱毛膏去除小鼠背部脊柱两侧的毛发，脱毛范围为2 cm×3 cm，将小鼠右侧皮膚划伤为 “=”字形，以皮肤渗血为度［17］，分为左侧的正常皮肤区与右侧的划伤皮肤区。空白对照组两侧皮肤均涂纯水，水提物组、醇提物组于皮肤两侧分别涂抹南鹤虱水提物、乙醇提取物，涂抹面积均为2 cm×3 cm。给药后用纱布覆盖两侧的脱毛区域并用无刺激的医用胶布进行固定，24 h后拆除［18］，用蒸馏水清洗净小鼠两侧皮肤，在清洗后的1 h、24 h、48 h、72 h时刻分别观察涂抹部位是否出现红斑、水肿等现象，按皮肤刺激反应积分以及皮肤刺激强度评分标准进行评价。

2.3 连续多次给药皮肤刺激性实验 实验方法与一次给药皮肤刺激性实验相同，空白对照组每日于皮肤两侧涂抹纯水1次，涂抹面积为2 cm×3 cm，连续涂抹7 d；水提物组、醇提物组每日于皮肤两侧分别涂抹南鹤虱水提物、乙醇提取物1次，涂抹面积为2 cm×3 cm，连续涂抹、观察7 d；7 d后三组小鼠用蒸馏水擦洗净两侧皮肤后再观察7 d。每次在相同的时间内观察，连续观察14 d，按皮肤刺激反应积分以及皮肤刺激强度评分标准进行评价。

2.4 皮肤刺激评价标准 皮肤刺激反应的表现主要是观察皮肤是否有红斑，水肿的现象［19］。参考国家食品药品监督管理总局发布的《中华人民共和国国家标准化妆品安全性评价程序和方法》对皮肤红斑、水肿的现象进行分类，每一类对应一种积分［20］，见表1。皮肤刺激强度的评价：每只动物的平均分值=（红斑总分+水肿总分）/ 动物数量，得出的分值即为相应的皮肤刺激强度［20］，见表2。

2.5 统计学分析 对每天的小鼠皮肤反应积分采用SPSS26.0统计软件进行数据处理（水提物组、醇提物组分别与空白对照组比较），计量资料以“均数加减标准差”（x±s）表示，P＜0.05表示具有统计学差异。

3 结果

3.1 一次给药皮肤刺激性实验 一次给药后，经观察发现各组小鼠行为、活动均无异常，无死亡现象。空白对照组小鼠在各时刻两侧皮肤均正常，无红斑、水肿现象。一次给药水提物组中，在1 h时刻有小鼠左侧皮肤出现中度红斑，右侧皮肤出现中度水肿现象，在24 h、48 h、72 h时刻皮肤红斑、水肿现象逐渐消退，其余小鼠各时刻两侧皮肤均无红斑、水肿现象。一次给药醇提物组中，在24 h时刻有小鼠右侧皮肤出现轻度红斑现象，在48 h、72 h时刻皮肤红斑现象逐渐消退，其余小鼠各时刻两侧皮肤均无红斑、水肿现象。统计分析结果显示，与空白对照组相比较，南鹤虱水提物组、醇提物组两侧皮肤的皮肤反应积分均无显著性差异。各组皮肤反应积分值见表3，皮肤刺激强度评价见表4，小鼠皮肤反应代表性照片如图1。

3.2 连续多次给药皮肤刺激性实验 多次给药后，经观察发现各组小鼠行为、活动均无异常，无死亡现象。空白对照组、多次给药水提物组及醇提物组小鼠两侧皮肤均正常，无红斑、水肿现象。各组小鼠的皮肤反应刺激强度得分均为0分，表明在连续多次给药实验中，南鹤虱的水提物及乙醇提取物对小鼠的正常皮肤和划伤皮肤均无刺激性。统计分析结果显示，与空白对照组相比较，南鹤虱水提物组、醇提物组两侧皮肤的皮肤反应积分均无显著性差异。

4 讨论

皮肤刺激性实验是指皮肤接触受试物后产生的局部可逆性损伤，包括一次给药皮肤刺激性实验和多次给药皮肤刺激性实验［20］，其典型表现是出现红斑或水肿现象。一次给药皮肤刺激性实验能够直接反映受试物对皮肤的刺激程度，多次给药皮肤刺激性实验则能够反映受试物对皮肤的刺激性以及受试物对皮肤长期的慢性积累刺激性［21］。

本实验参考国家食品药品监督管理总局发布的《中华人民共和国国家标准化妆品安全性评价程序和方法》，对南鹤虱的水提物及乙醇提取物作用皮肤的安全性进行研究。实验结果表明，一次给药皮肤刺激性实验中，南鹤虱水提物组、醇提物组各有1只小鼠皮肤出现红斑、水肿现象，其余小鼠皮肤均正常，按照皮肤刺激评价标准计算，小鼠的皮肤反应刺激强度得分均小于0.5分，以表4评价皮肤刺激强度，表明南鹤虱的水提物及乙醇提取物对小鼠正常皮肤和划伤皮肤均无明显刺激性。在连续多次给药皮肤刺激性实验中，各组小鼠均没有产生明显的刺激反应，小鼠皮肤均无红斑、水肿现象，小鼠正常皮肤及划伤皮肤的皮肤反应平均积分值均为0分，表明南鹤虱的水提物及乙醇提取物对小鼠正常皮肤和划伤皮肤均无刺激性。

综上所述，南鹤虱的水提物及乙醇提取物对正常皮肤和划伤皮肤的刺激性小，为前期课题组开展南鹤虱提取物驱蚊、护肤的相关研究提供了实验参考，也为探讨南鹤虱更广泛的用途提供一定的理论依据。但本实验仅在一种实验动物上进行研究，实验结果具有局限性，仍需在多种实验动物上进行研究相互验证，以获取更加准确的结果。

参考文献

［1］

崔春雨，肖丽，杨宇婷，等.南鹤虱化学成分和药理活性研究进展［J］.辽宁化工，2020，49（6）：651-654.

［2］陈山珊，李羿武， 张鸿燕， 等.南鹤虱水提物急性毒性实验初探［J］.中国民族民间医药，2023，32（19）：8-11.

［3］苏桂云，黄硕.止血杀虫的南鹤虱［J］.首都食品与医药， 2017， 24（9）： 54.

［4］孫伩功.中草药新用［J］.河南赤脚医生，1978（6）：57-58.

［5］秦巧慧，彭映辉，何建国，等.野胡萝卜果实精油对蚊幼虫的毒杀活性［J］.中国生物防治学报，2011，27（3）：418-422.

［6］党俊伟，张彩云，赵继飚，等.野胡萝卜净油化学成分的研究［J］.安徽农学通报，2009，15（10）：222-239.

［7］刘娜.南鹤虱倍半萜成分的提取、纯化和鉴定及其抗氧化活性研究［D］.济南：山东中医药大学，2016.

［8］付红伟，易涛，张琳，等.南鹤虱果实中愈创木烷型倍半萜和其他化学成分的研究［C］//中国药学会.2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集，2010.

［9］刘贵园，温楠，张茂生，等.南鹤虱中愈创木烷型倍半萜类化学成分研究［J］.药学学报，2017，52（7）：1146-1149.

［10］MUTURIEPHANTUS J，DOLL K，RAMIREZ J L，et al.Bioactivity of Wild Carrot （Daucus carota，Apiaceae） Essential Oil Against Mosquito Larvae［J］.Journal of medical entomology，2018，56（3）： 784-789.

［11］TALEB R I，SHEBABY W，GEHA M，et al.In vivo immunomodulatory effect of wild carrot oil and its fractions［J］.Planta Medica，2015，81（16）：PM_67.

［12］WASSIM N S，MOHAMAD A M，PETRA B，et al.Wild carrot pentane-based fractions suppress proliferation of human HaCaT keratinocytes and protect against chemically-induced skin cancer［J］.BMC Complementary and Alternative Medicine，2017，45（1）：149-150.

［13］俞发荣.野胡萝卜改善认知功能障碍作用的药理学证据［J］.国外医药植物药分册，2007，22（5）： 216-218.

［14］SHEBABY W，EI-SIBAI M，MROUEH M，et al.Hepatoprotective activity of the wild carrot chloroform-based fraction against CCl4-induced liver toxicity in mice［J］.Planta Medica， 2014，80（16）：206.

［15］李娅，郭静.艾儒棣教授治疗皮肤病常用药对［J］.亚太传统医药，2022，18（2）：155-157.

［16］韩江云，王春龙，李建平，等.4种提取方法对清咽润喉复方有效成分含量及抗炎镇痛作用的影响［J］.中成药，2023，45（2）：549-553.

［17］蔡燕萍， 赵思烨， 颜伟泓，等.丁香挥发油对小鼠皮肤影响的初步研究［J］.中国民族民间医药， 2023， 32（17）： 23-27.

［18］王瑶，杨春艳，胡祥宇，等.五倍子乳膏皮肤局部用药的安全性研究［J］.西南军医，2017，19（6）：528-532.

［19］王榆薇，黄河儒，王宽诚，等.香榧精油的安全性研［J］.现代盐化工，2022，49（4）：16-17.

［20］方晓彤，杨虹，王宇，等.百香果水提物皮肤应用安全性评价［J］.现代食品，2022，28（12）：180-183.

［21］张琪薇，陈争光，万力生.小儿推拿退热乳的皮肤刺激性及过敏性实验研究［J］.时珍国医国药，2020，31（4）：1004-1006.

（收稿日期：2023-05-05 编辑：刘斌）