探讨荧光定量PCR 法与免疫胶体金法用于骨质疏松症手术住院患者感染监控的诊断价值

吴敏芳，董明治，杨越，张艳，陈启

曲靖市第一人民医院检验中心，云南曲靖 655099

住院患者感染是医疗机构中一项严重的医疗安全问题，不仅给患者带来痛苦，还增加了医疗成本和治疗难度[1]。随着抗生素耐药性的增加和新兴感染病原体的出现，感染控制变得更加复杂和紧迫。因此，建立有效的感染监控与预防体系对于保障患者安全和提高医疗质量至关重要。荧光定量聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）法作为感染疾病诊断的关键手段之一，具有高度的敏感性和特异性，能够快速准确地检测病原体，指导临床医生及早制订合理的治疗方案[2]。在过去的几十年中，随着检验技术的不断发展，荧光定量PCR 法检验已经成为感染控制和预防中不可或缺的工具[3]。基于此，本研究选取2020 年3 月—2023年4 月曲靖市第一人民医院收治的180 例骨质疏松症进行手术治疗疑似住院感染患者为研究对象，探讨荧光定量PCR 法检验的临床应用效果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院收治的180 例骨质疏松症进行手术治疗疑似住院感染患者作为研究对象，所有患者均先后接受荧光定量PCR 法与免疫胶体金法检测。其中男98 例，女82 例；年龄21～71 岁，平均（42.83±5.79）岁。本研究经医院医学伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：年龄≥18 岁；愿意参与本研究并签署知情同意书；精神意识状态正常；无血液系统疾病；无严重免疫系统疾病或免疫抑制症状。

排除标准：其他明确感染病因的患者，如外伤感染、手术感染等；在研究期间已接受抗生素治疗的患者；患有严重肝肾功能损害或其他重要器官功能障碍的患者。

1.3 方法

荧光定量PCR 法检测仪器为ABI 公司的7500型荧光定量PCR 仪，具体检测步骤如下：收集样本使用特定的核酸提取试剂盒从样本中提取出核酸，将提取出的RNA 通过反转录酶的作用转化为cDNA。根据目标基因序列，设计特异性引物，将引物、dNTPs、MgCl2、荧光染料、Taq 酶等按照一定比例加入到PCR 反应液中，将配置好的PCR 反应液加入到PCR 仪中，按照设定的程序进行扩增反应。根据Ct 值和标准曲线，判断样本中是否存在目标基因，并计算出其含量。免疫胶体金法具体检测步骤如下：将一定浓度的氯金酸溶液与还原剂（如柠檬酸三钠）混合，加热搅拌，将待标记的抗原或抗体与胶体金溶液混合形成复合物。将标记好的复合物用洗涤液洗涤数次，去除未结合的胶体金颗粒和多余的抗原或抗体。将洗涤后的复合物与相应的抗体或抗原反应，形成抗原抗体复合物。用肉眼或光学显微镜观察溶液的颜色变化，判断待测样本中是否存在目标抗原或抗体。细菌培养法检测步骤如下：采集样本进行稀释、离心以及加入抑菌剂等处理，并接种到适宜的培养基上。将接种好的培养基放入培养箱中进行培养。观察培养基上细菌的生长情况和形态特征，如菌落大小、形状、颜色等，判断目标细菌的种类。

1.4 观察指标

①统计比较两种检验方法的阳性检出率。②比较两种检验方法的诊断效能，包括准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值等项目。具体计算方法如下：准确度=（真阳性例数+真阴性例数）/总例数×100%；灵敏度=真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）×100%；特异度=真阴性例数/（真阴性例数+假阳性例数）×100%；阳性预测值=真阳性例数/（真阳性例数+假阳性例数）×100%；阴性预测值=真阴性例数/（真阴性例数+假阴性例数）×100%[4]。

1.5 统计方法

采用SPSS 20.0 统计学软件分析数据，诊断效能诊断结果为计数资料，以例数（n）和率（%）表示，行χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种诊断方法检验结果比较

细菌培养法检验结果显示阳性37 例，荧光定量PCR 法结果显示阳性35 例，免疫胶体金法结果显示阳性26 例。见表1。

2.2 两种诊断方法的诊断效能比较

荧光定量PCR 法的检验准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均明显高于免疫胶体金法检验，差异有统计学意义（P均＜0.05）。见表2。

表2 两种诊断方法的诊断效能比较（%）

3 讨论

住院患者感染是医疗机构面临的严重挑战之一。随着医疗技术的进步和患者病情的复杂化，住院患者感染的发生率逐渐上升，给患者的康复和治疗带来了重大障碍[5]。感染不仅导致骨质疏松症进行手术治疗患者身体状况的进一步恶化，还会延长患者住院时间和增加医疗费用。抗生素的广泛使用导致细菌产生耐药性，使得原本可治愈的感染病变为难治性疾病，严重影响患者的治疗效果和生存率[6]。面对这一严峻的形势，建立科学的感染监控与预防体系显得尤为重要。

荧光定量PCR 法检验可以快速确定感染的病原体、判定其对抗生素的敏感性，从而进行个体化治疗[7-8]。本研究结果显示，细菌培养法检验结果显示阳性37 例，荧光定量PCR 法结果显示阳性35 例，免疫胶体金法结果显示阳性26 例，这说明荧光定量PCR 法检验可提高病原菌检出率。曲奎尧等[9]研究结果显示，免疫胶体金法的MP检测阳性率为46.3%，明显低于荧光定量PCR法检验的阳性率（73.9%）（P＜0.05）。荧光定量PCR法的检验准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均明显高于免疫胶体金法检验（P均＜0.05），提示荧光定量PCR 法检验具有良好的检验效能，在感染监控中对于早期发现感染、及时采取干预措施具有重要意义。刘小琳等[10]研究结果显示，荧光定量PCR 法诊断CT 感染的灵敏度、阴性预测值、准确度、Kappa值分别为96.47%、60.00%、96.11%、0.700，均显著高于免疫胶体金法的85.56%、27.27%、88.89%、0.323（P均＜0.05），与本研究结果具有较高一致性。荧光定量PCR 法提高病原菌检出率及检验效能的原因主要有以下几点：①荧光定量PCR 法可以检测到非常低浓度的病原体，因此，可以更早地发现感染，及时进行干预和治疗[11-12]；②荧光定量PCR 法的特异度也比免疫胶体金法更高。荧光定量PCR 法可以特异性地扩增目标病原体的核酸序列，减少非特异性扩增和交叉反应的可能性[13]；③荧光定量PCR 法可以进行定量检测，通过测定荧光信号的强度和变化，可以计算出起始模板的数量，从而了解感染的严重程度和治疗效果[14-15]。

综上所述，荧光定量PCR 法检验在骨质疏松症进行手术治疗住院患者感染监控中具有显著的临床效果。通过快速准确地检测病原体和合理选择抗生素，有助于降低传播风险。