2022年达州市家畜O型口蹄疫免疫抗体监测与分析

张 蕾,欧云文,刘俐君,赵小波,唐慧伦,杨 青,李 成,高 嵩,李清竹

(1.达州市动物疫病预防控制中心,四川达州 635000;2.开江县动物疫病预防控制中心,四川达州 636250;3.中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃兰州 730046)

口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病,被世界动物卫生组织(World organization for animal health,WOAH)列为必须报告的法定动物疫病之一,是我国一类动物疫病[1-4]。该疫病无明显季节性,猪、牛、羊均为易感动物,主要临床症状为鼻腔、口腔、嘴唇、蹄部和乳房皮肤出现水泡,继而发生溃烂[5-6]。FMDV为无囊膜小RNA病毒,有A、O、C、Asia1、SAT1、SAT2和SAT3共7个血清型,不同血清型间无交叉保护[1]。目前,非洲地区呈多种血清型混合流行,亚洲、欧洲地区主要流行O型,O型和A型为我国FMD主要流行亚型,其中O型FMD对我国养殖业威胁最大[4,7-12]。据统计,2022年全球共发生FMD疫情664起,造成9万余头牛、羊感染,其中O型464起,包括欧洲1起、非洲51起、亚洲412起,蒙古、俄罗斯、哈萨克斯坦、印度尼西亚等周边国家均有报告,我国广西梧州市某屠宰场亦发生1起O型FMD疫情。鉴于周边国家(地区)持续暴发FMD疫情,境外输入和国内扩散风险极大,我国FMD防控形势依旧复杂严峻。

达州地处川渝陕结合部,是我国生猪产能调控大市。FMD尚无针对性的治疗药物,主要防控策略为强制性免疫和扑杀阳性动物。2022年达州市O型FMD疫苗共免疫猪599.27万头,牛117.6万头,羊158.06万只。为评估达州市家畜O型FMD免疫效果,及时发现薄弱环节,调整防控策略,消除疫情隐患。本文随机采集了辖区内180个场点(规模场、散养户和屠宰场)的2 879份家畜血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行免疫抗体检测,并对检测结果进行分析,为达州市O型FMD的科学防控提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 血清样本 2022年采自达州市7个县(市、区)和2个市级直管开发区180个场/点(包括规模场、散养户和屠宰场)的2 879份家畜血清,其中猪血清1 848份,牛血清501份,羊血清530份,每个场根据存栏情况分别采集血清样品10～20份,每个散养户采集血清样品1～5份。按照无菌要求,静脉采血2～3 mL,2 500 r/min离心分离血清,置-20℃冷冻保存待检。

1.1.2 主要试剂 口蹄疫病毒O型竞争ELISA抗体检测试剂盒,兰州兽研生物科技有限公司产品,置4℃冷藏保存备用。

1.1.3 主要仪器设备 全自动洗板机(405 LSRS),美国BioTek公司产品;酶标仪(Multiskan FC),美国Thermo Fisher公司产品;离心机(5430R)和各种量程移液器,德国Eppendorf 公司产品;生化培养箱(SPX-100B-Z),上海博迅实业有限公司医疗设备厂产品。

1.2 方法

1.2.1 抗体检测 待检血清样品和检测试剂盒室温平衡30 min后,按照口蹄疫病毒O型竞争ELISA抗体检测试剂盒操作说明书检测待检血清样品。

1.2.2 结果判定 按照口蹄疫病毒O型竞争ELISA抗体检测试剂盒结果判定说明判定结果。若某场(点)样品阳性率≥70%,则判定该场(点)为FMD免疫抗体阳性场(点)。

2 结果

2.1 不同种类家畜O型FMD免疫抗体检测结果

2022年全市家畜O型FMD免疫抗体共监测场(点)180个,阳性场(点)160个,场(点)阳性率为88.89%,其中猪、牛、羊分别监测场(点)116个、33个和31个,场(点)阳性率分别为90.52%、93.94%和77.42%;共监测血清样品2 879份,阳性样品2 556份,样品阳性率为88.78%,其中猪、牛、羊分别监测样品1 848份、501份和530份,样品阳性率分别为89.77%、93.41%和80.94%(表1),均达到农业农村部规定标准(即群体免疫抗体阳性率≥70%)。通过独立样本t检验,牛的场(点)阳性率和样品阳性率均显著高于羊(P<0.05)。

表1 不同种类家畜O型FMD免疫抗体检测结果

2.2 不同场/点O型FMD免疫抗体检测结果

规模场(存栏量≥500头)、适度规模场(存栏量<500头)、散养户和屠宰场的场(点)阳性率分别为100%、89.32%、84.09%和83.33%,样品阳性率分别为96.19%、88.17%、82.61%和86.25%,均达到农业农村部规定标准(表2)。通过独立样本t检验,规模场(存栏量≥500头)的场(点)阳性率和样品阳性率均极显著高于散养户(P<0.001)。

表2 不同场点O型FMD免疫抗体检测结果

2.3 不同区域O型FMD免疫抗体检测结果

全市7个县(市、区)和2个市级直管开发区家畜O型FMD免疫抗体场(点)阳性率、样品阳性率均达到农业农村部规定标准,其中通川区最高,场(点)阳性率和样品阳性率分别为100%和96.36%。渠县最低,场(点)阳性率和样品阳性率分别为73.08%和75.17%,通川区、达川区、万源市、宣汉县的场(点)阳性率和样品阳性率均高于90%(表3)。

2.4 不同季节O型FMD免疫抗体检测结果

全年四个季节家畜O型FMD免疫抗体场(点)阳性率、样品阳性率均超过农业农村部规定标准,其中夏季场(点)阳性率最高(92.31%),春季最低(86.27%),通过独立样本t检验,差异显著(P<0.05);冬季样品阳性率最高(90.76%),春季最低(86.27%)(表4),通过独立样本t检验,差异显著(P<0.05)。

表4 不同季节O型FMD免疫抗体检测结果

2.5 不同生长阶段O型FMD免疫抗体检测结果

3种不同生长阶段的家畜O型FMD免疫抗体场(点)阳性率、样品阳性率均超过农业农村部规定标准,其中种畜场(点)阳性率和样品阳性率最高,分别为96.72 %和92.62 %;保育畜场(点)阳性率和样品阳性率最低,分别为72.22 %和84.41 %(图1)。通过独立样本t检验,差异显著(P<0.05)。

*P<0.05

3 讨论

疫苗免疫与抗体监测是动物疫病防控与净化的重要技术手段[1,13]。ELISA技术作为重要的血清学诊断方法,可用于大量临床样品的检测。在动物疫病监测过程中常通过商品化ELISA抗体检测试剂盒分析评估疫苗免疫效果,为及时调整免疫程序等防控策略提供数据支撑[14]。FMD为我国强制性免疫的动物疫病之一,其中O型FMD为我国及周边区域流行血清型。因此,监测与分析易感家养动物(猪、牛、羊)群体O型FMD免疫抗体水平,评估疫苗免疫效果,在FMD防控与净化过程中发挥着不可或缺的作用。

本研究结果显示,O型FMD免疫抗体场(点)阳性率为88.89%,样品阳性率为88.78%,均超过了国家规定的标准,表明2022年达州市已建立较好的家畜O型FMD免疫保护屏障。在不同种类家畜方面,场(点)阳性率和样品阳性率从高至低依次为牛、猪、羊,其中牛的场(点)阳性率和样品阳性率均显著高于羊。在不同类型场点方面,屠宰环节的场(点)阳性率显著低于养殖环节。规模场(存栏量≥500头)阳性率、样品阳性率均高于适度规模场(存栏量﹤500头)与散养户。

养殖场应该结合本地防疫政策、疫病流行规律和养殖规模等科学制定合理的免疫程序,乡镇畜牧兽医站需配备完善的冷链设施设备,避免因运输和贮存条件不适,影响疫苗质量。动物疫病预防控制机构要加大FMD监测力度,提高监测频次,扩大监测范围,尤其是要对散养户和羊进行重点监测,全面掌握免疫情况和流行趋势,对不合格场点要及时补免,消除免疫空白,提高动物群体抗感染能力。不同区域分析发现,无论是免疫抗体场(点)阳性率还是样品阳性率,通川区均最高,是因为该区域为市级党政机关所在地,养殖审批、防疫落实、日常监管等方面均较其他区域更加严格,行业主管部门要求更高,人员和经费保障更有力。通川区、万源市、宣汉县和达川区的该两项指标均优于开江县、高新区、东部经开区、大竹县和渠县,应与各地区对家畜疫苗免疫重视程度,防控措施落实力度,防疫员免疫技术水平,采样时机,牲畜自身健康状况以及地理环境等因素有关。各地政府要高度重视动物防疫工作,认真贯彻落实国家FMD防控要求,做实各项防控措施,落实经费保障,加大宣传力度,尤其是散养户的动物防疫方面的宣传教育,强化考核与监督。同时加强基层兽医队伍建设,聘用一批责任心强、业务水平高而且热爱畜牧兽医工作的防疫员,定期开展培训,加强工作指导,实行绩效管理,提高工作效能。不同季节分析发现,春季(3-5月)、秋季(9-11月)的免疫抗体场(点)阳性率和样品阳性率均较低,夏季(6-8月)和冬季(12-次年2月)均较高,这与各地春、秋季重大动物疫病强制免疫工作进度密切有关。达州市每年3月和9月份启动春秋防工作,基层部门陆续开展强免疫苗免疫,在5月和11月份左右基本完成免疫工作,而部分动物群体才产生免疫抗体或抗体水平尚未达到峰值。因此,血清样品免疫抗体阳性率则可能较低。与之相比,每年6月和10月份(即春、秋防结束后)各地均会根据免疫抗体监测情况开展一次补免工作,即在春、秋防较高免疫抗体水平基础上进行加强免疫,进而产生更高的免疫抗体水平,甚至达到抗体峰值。不同生长阶段分析发现,种畜场(点)免疫抗体阳性率和样品阳性率均最高,保育畜场(点)均最低,这与种畜饲养周期长、疫苗免疫频次多,保育畜出生时间短、疫苗接种时间短且次数少,母源抗体的干扰等因素有关[22]。

综上所述,虽然2022年达州市O型FMD免疫抗体整体水平达到国家标准,建立了有效的免疫保护屏障,但仍然有部分地区和场点免疫效果较差,仍存在发生疫情的潜在风险。因此,持续强化O型FMD免疫抗体监测,及时补免,确保不发生家畜FMD疫情。