氟雷拉纳咀嚼片原料与辅料相容性研究

张欣欣,白玉婷,史梦艳,翟斌涛,张继瑜,李 冰

(中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 农村农业部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室,甘肃兰州 730050)

氟雷拉纳(fluralaner),4-[5-(3,5-二氯苯基)-4,5-二氢-5-(三氟甲基)-3-异唑基]-2-甲基-N-[2-氧代-2-[(2,2,2-三氟乙基)氨基]乙基]苯甲酰胺[1],为异噁唑啉类化合物,可抑制无脊椎动物神经系统中的谷氨酸和γ-氨基丁酸门控氯离子通道发挥杀虫作用,主要用于治疗犬、猫体外寄生虫(蜱、跳蚤等)[2-6]。药物组成包括活性物质和辅料,可影响药物的稳定性、溶解性和生物利用度,继而阻碍药物开发利用[7]。所以,在辅料组成设计中要考虑活性成分的配比禁忌等因素[8-10]。制剂处方工艺研发前,必须对原辅料的相容性进行考察。本研究通过影响因素试验,用高效液相色谱对氟雷拉纳与不同辅料的配伍进行相容性评价,为氟雷拉纳咀嚼片处方设计提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂 氟雷拉纳原料药,常州亚邦齐晖医药化工有限公司产品;猪肝粉3号、猪肝粉2号、猪肝粉1号,陕西新天域生物科技有限公司产品;硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、玉米淀粉、聚乙二醇3350(PEG3350)、蔗糖、大豆油、甘油、阿斯巴甜,陕西圣药医药科技有限公司产品;苯甲酸钠、山梨酸钾、甘露醇、乳糖、羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠、微粉硅胶、对羟基苯甲酸丙酯钠、丙二醇、硝酸钾、氯化钠,国药集团化学试剂有限公司产品;明胶、泊洛沙姆188,上海麦克林生化科技有限公司产品;乙腈,国药集团化学试剂有限公司产品;乙腈、磷酸(色谱级),赛默飞世尔科技有限公司产品。

1.1.2 主要仪器 ME-403型电子天平,梅特勒-托利多仪器有限公司产品;Agilent-LC 1290高效液相色谱仪,安捷伦科技有限公司产品;UPT-II-40L优普超纯水制造系统,上海优普实业有限公司产品;KQ-600DE数控超声清洗器,昆山市超声仪器有限公司产品;WD-A药品稳定性检查仪,天津药典标准仪器厂生产。

1.2 方法

1.2.1 辅料相容性样品的制备 本试验口服固体制剂,选辅料用量较大填充剂、黏合剂、矫味剂等,用氟雷拉纳∶辅料=1∶5比例混合,用量较小润滑剂、防腐剂等,用氟雷拉纳∶辅料=20∶1比例混合(表1)。

表1 原辅料相容性处方设计

1.2.2 影响因素试验 按照稳定性影响因素试验方法,分别将装有样品的玻璃培养皿放在强光(4500±500)lx、高温(60℃)、高湿(RH 92%±5%)及高湿(RH 75%±5%)的条件下放置10 d,以原料药和辅料分别做平行对照试验,用高效液相色谱法检查其含量和有关物质放置前后有无变化,同时观察样品性状变化。

1.2.3 色谱条件 色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶(Inertsil ODS-3,4.6 mm×250 mm,5 μm);以1 mL/L磷酸水-1 mL/L磷酸乙腈为流动相;流速1.2 mL/min;检测波长210 nm;柱温40℃;进样量10 μL;梯度洗脱∶初始比例为VA∶VB=40∶60,持续2 min,经13 min比例变化为VA∶VB=15∶85,持续时间15 min。

1.2.4 溶液配制 供试品溶液:精密称量样品适量(含氟雷拉纳17.5 mg)与50 mL容量瓶中,用乙腈稀释定容至刻度即可。对照溶液:精密量取1 mL有关物质供试品溶液与10 mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度,作为供试品溶液1,精密量取供试品溶液11 mL于10 mL容量瓶中,定容,作为对照溶液。

2 结果

根据文献[11]中兽用化学药物稳定性研究技术指导原则,供试品的“显著变化”为含量测定中发生5%的变化,所以含量测定合格范围为(100±5)%。根据文献[11]中兽用化学药物杂质研究技术指导原则,原料药杂质质控限度为0.5%。表2为0 d原辅料相容性试验测试结果,混合原料药与猪肝粉的样品外观为棕褐色粉末,与明胶的样品外观为淡黄色粉末,其余样品均为白色粉末或乳白色液体。0 d泊洛沙姆188和明胶与原料药混合时含量低于95%。表明原料药氟雷拉纳与泊洛沙姆188和明胶不能进行配伍。

表2 0 d原辅料相容性试验测试结果

2.1 高温试验结果

符合含量合格范围(100±5)%与供试品溶液中杂质含量小于规定的辅料有PEG3350、泊洛沙姆188、玉米淀粉、明胶、羧甲基纤维素钠、甘油、猪肝粉1号、猪肝粉3号、大豆油、十二烷基硫酸钠、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨酸钾、苯甲酸钠、对羟基苯甲酸丙酯钠、硬脂酸镁、阿斯巴甜和微粉硅胶,含量与0 d相比差异不显著,杂质含量增加,其中氟雷拉纳与大豆油混合样品性状发生轻微颜色的变化(表3)。

表3 高温10 d原辅料相容性测试结果

2.2 光照试验结果

符合含量测定合格范围(100%±5%)与供试品溶液中杂质含量小于规定的辅料有PEG3350、泊洛沙姆188、玉米淀粉、明胶、羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠、甘油、丙二醇、猪肝粉1号、猪肝粉2号、猪肝粉3号、大豆油、十二烷基硫酸钠、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨酸钾、苯甲酸钠、对羟基苯甲酸丙酯钠、硬脂酸镁、阿斯巴甜和微粉硅胶,含量与第0 d相比差异不显著,辅料杂质均有所增加,样品性状均无变化(表4)。

表4 光照10 d原辅料相容性测试结果

2.3 高湿试验结果

符合含量合格范围(100%±5%)、吸湿性小于5%与供试品溶液中杂质含量小于规定的辅料有PEG3350、玉米淀粉、大豆油、十二烷基硫酸钠、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨酸钾、苯甲酸钠、对羟基苯甲酸丙酯钠、硬脂酸镁、阿斯巴甜和微粉硅胶。其中氟雷拉纳与明胶、羧甲基纤维素钠、玉米淀粉、交联羧甲基纤维素钠、PEG3350、蔗糖、猪肝粉1号、猪肝粉2号、猪肝粉3号、泊洛沙姆188、丙二醇和甘油的混合样品吸湿性大于5%,混合样品粉末有结块现象(表5)。

表5 高湿(92%±5%)10 d原辅料相容性测试结果

符合含量测定合格范围(100%±5%)、吸湿性小于5%与供试品溶液中杂质含量小于规定的辅料有PEG3350、泊洛沙姆188、玉米淀粉、丙二醇、大豆油、十二烷基硫酸钠、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨酸钾、苯甲酸钠、对羟基苯甲酸丙酯钠、硬脂酸镁、阿斯巴甜和微粉硅胶。其中氟雷拉纳与明胶、羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠、猪肝粉1号、猪肝粉2号、猪肝粉3号、丙二醇和甘油的混合样品吸湿性大于5%,且混合样品粉末样出现结块现象(表6)。

表6 高湿(72%±5%)10 d原辅料相容性测试结果

3 讨论

氟雷拉纳分子结构中的异恶唑环呈弱碱性,在强酸环境中会存在开环现象;结构中酰胺键是一种带负电的官能团,呈中性。从检测数据上看,第0天以明胶和泊洛沙姆188位辅料的样品原料药氟雷拉纳的含量低于95%,泊洛沙姆188有助溶作用,有水分存在时助溶了氟雷拉纳,可能发生水解反应,降低了药物的生物利用度[12]。氟雷拉纳在样品在60℃高温、4500 lx光照、92%高湿和75%高湿条件下,有关物质杂质含量均较0 d条件下有所增加,主要原因是氟雷拉纳中异恶唑环具有弱碱性,由于N-O键较弱,有发生光解或者热分解的可能性。60℃高温条件下,猪肝粉2号、交联羧甲基纤维素钠和丙二醇为辅料的样品中氟雷拉纳的含量低于95%,猪肝粉2号可能存在重金属,在无水环境下可以作为Lewis酸,可以吸附药物,如果结合紧密或很难解吸则会降低药物的生物利用度[11]。交联羧甲基纤维素钠,潜在可反应的杂质为一氯乙酸、亚硝酸钠、硝酸钠,由于静电作用吸附弱碱性药物,残留的一氯乙酸会发生SN2亲核反应,氟雷拉纳的分子结构中有异恶唑环,为弱碱性键,具有与一氯乙酸发生反应的可能性[13-15]。相对湿度92%条件下,明胶、羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠、猪肝粉1号、猪肝粉2号、猪肝粉3号、泊洛沙姆188、丙二醇和甘油为辅料样品中的氟雷拉纳的含量低于95%。相对湿度75%条件下,明胶、羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠、猪肝粉2号、猪肝粉3号、甘油为辅料样品中的氟雷拉纳含量低于95%,主要原因分析如下:辅料在高湿条件下具有一定的吸湿性,导致氟雷拉纳在相应的样品重量下含量降低,而单独的氟雷拉纳对照样品吸湿性为0,氟雷拉纳含量及有关物质变化较小。在光照条件下,原辅料相容性样品性状均无变化,在高温条件下,大豆油与原料药氟雷拉纳混合物颜色轻微变化,但在高湿条件下,性状变化较大,主要为原料药氟雷拉纳与辅料混合粉末结块现象,试验结果表明氟雷拉纳咀嚼片应在干燥常温的条件下保存。