阿司匹林丁香酚酯咀嚼片的稳定性试验

白莉霞,刘希望,杨亚军,李世宏,秦 哲,葛闻博,许 笑,李剑勇

(中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所,农业农村部兽用药物创制重点实验室,甘肃省新兽药工程重点实验室,甘肃兰州 730050)

阿司匹林丁香酚酯(aspirin eugenol ester,AEE)是利用药物结构拼合原理研制的一种新型非甾体抗炎药物,由阿司匹林的羧基与丁香酚的羟基结合而成[1-2]。在保持前体药物药理活性的基础上减轻了阿司匹林对胃肠道的刺激及丁香酚的易氧化与毒性等问题[3],使药理活性增强,不良反应降低。多项研究已证实AEE具有解热抗炎[4-5]、降血脂[6]、预防血栓[7-8]、抗氧化[9-10]等作用。为使其更好地应用于临床,研制了AEE咀嚼片,拟用于宠物血栓的防治。咀嚼片与普通片剂相比具有经嚼碎后直接吞咽、无需用水送服、可随时随地服用、促进药物在体内的溶解与吸收减轻胃肠道负担等[11-12]。将AEE制成咀嚼片,克服了传统片剂适口性差的问题,可使宠物充分咀嚼药物,保证AEE被较好吸收,发挥良好药效[13]。但咀嚼片湿法制粒压片中压力较小,容易导致片剂稳定性降低。因此,考察AEE咀嚼片的稳定性在其质量控制研究中十分关键。本研究参照文献[14]的相关规定,依据文献[15]兽用化学药物稳定性技术指导要求,研究影响因素试验、加速试验及长期试验等对AEE咀嚼片稳定性的影响,为制剂的包装、贮藏条件、有效期的确定提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂 阿司匹林丁香酚酯对照品(含量99.6%,批号20190701)、杂质A对照品(含量99.5%,批号20190701)、阿司匹林丁香酚酯原料药(含量100.1%,批号69119004),中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所兽药研究室研制;阿司匹林对照品、丁香酚对照品、水杨酸对照品,中国食品药品检定研究院产品;AEE咀嚼片(批号20200501,20200502,20200503),四川恒通动物制药有限公司制备;色谱纯磷酸(批号STBG5058V),Sigma公司产品;色谱纯甲醇和色谱纯乙腈,赛默飞世尔科技有限公司产品。

1.1.2 主要仪器 Agilent LC1290高效液相色谱仪、Agilent Cary100 紫外-可见分光光度计,美国安捷伦科技有限公司产品;电热鼓风干燥箱,上海恒一科学仪器有限公司产品;KQ-600DE数控超声清洗机,昆山市超声仪器有限公司产品;YP-GSD150综合药品稳定性试验箱,上海苏盈试验仪器有限公司产品;WD-A药物稳定性检查仪,天津药典标准仪器厂产品;CS-2B脆碎度测试仪,天津创兴电子设备制造有限公司产品;BT25S型电子分析天平和SQP型电子天平,赛多利斯科学仪器有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 影响因素试验 将AEE咀嚼片(批号20200501)分别在高温(60℃)、高湿(25℃、RH 90%±5%、强光照射(4500±500)lx条件下放置10 d,第0、5、10天时按照质量标准所建立的方法测定咀嚼片的外观性状、重量差异、脆碎度、含量、有关物质和溶出度,考察影响AEE咀嚼片稳定性的因素。

1.2.2 加速试验 将3批AEE咀嚼片(批号20200501、20200502、20200503)模拟上市包装(宠物用热带型泡罩铝及铝箔包装),置于综合药品稳定性试验箱40℃±2℃、RH75%±5%条件下,放置6个月,分别于第0、1、2、3、6个月末取样,检测咀嚼片的外观形状、重量差异、脆碎度、含量、有关物质和溶出度。

1.2.3 长期试验 将3批AEE咀嚼片(批号20200501、20200502、20200503)模拟上市包装(宠物用热带型泡罩铝及铝箔包装),置于25℃±2℃、RH 60%±10%条件下进行试验,分别于第0、3、6、9、12、18、24个月末取样,检测咀嚼片外观性状、重量差异、脆碎度、含量、有关物质和溶出度。

1.2.4 考察项目 对AEE咀嚼片的外观性状、重量差异、脆碎度、溶出度、含量及有关物质进行检查。①外观性状。取AEE咀嚼片置光照良好的白色背景下,目测观察产品颜色,应为白色片。②重量差异。依据《中国兽药典》2020版0101片剂项下规定,取3批AEE咀嚼片各20片,精密称定总重量,求得平均片重后,再分别精密称定每片的重量,每片重量与平均片重相比较,超出重量差异限度的不得多于2片,并不得有1片超出限度1倍,限度规定为±5%。③脆碎度检查。依据文献[14]片剂脆碎度检查法,片重为0.65 g或以下者取若干片,使其总重约为6.5 g。用吹风机吹去片剂脱落的粉末,精密称重,置片剂脆碎度检查仪的圆筒中,25 r/min转动100次。取出,同法除去粉末,精密称重,减失重量不得过1%,且不得检出断裂、龟裂及粉碎的片。④溶出度测定。按照文献[14]附录溶出度测定(桨法),以1%十二烷基硫酸钠溶液为溶出介质,体积900 mL,转速为75 r/min,依法操作。在60 min时,取溶液10 mL,滤过,取续滤液3倍稀释后,于紫外可见分光光度计279 nm波长下测定。⑤含量测定。色谱条件为:Hypersil ODS(4.6 mm×150 mm,5 μm)色谱柱;甲醇∶水(V∶V= 77∶23)流动相;279 nm检测波长;35℃柱温;0.9 mL/min流速,进样10 μL。⑥有关物质测定。色谱条件为:Phenomenex luna C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;0.5%磷酸水溶液(流动相A)与乙腈(流动相B);35℃柱温;279 nm检测波长;1.0 mL/min流速;进样10 μL(表1)。

表1 梯度洗脱程序

2 结果

2.1 影响因素试验结果

AEE咀嚼片在高温、高湿、强光条件下的各项指标均符合质量标准(图1),在不同条件下外观性状几乎不变,均为白色片。AEE含量均在标示量90%～110%之间(表2),杂质A含量均为0.13%,60 min时溶出度均大于限度要求70%,重量差异变化均在±5%之内,脆碎度减失重量均小于1%,且无断裂、龟裂及粉碎片。表明AEE咀嚼片在高温、高湿及强光条件下稳定性良好。

图1 AEE咀嚼片影响因素试验的外观性状

表2 AEE咀嚼片(批号20200501)影响因素试验结果

2.2 加速试验结果

加速条件下AEE咀嚼片的各项检测指标均符合质量标准,外观形状均为白色片(图2)。AEE含量均在标示量90%～110%之间,无明显变化,杂质A含量均为0.13%;60 min时溶出度均大于限度要求70%;重量差异变化均在±5%之内;脆碎度减失重量均小于1%,且无断裂、龟裂及粉碎片。说明AEE咀嚼片在加速条件下稳定(表3～表5)。

图2 AEE咀嚼片(批号20200501)加速试验的外观性状

表3 AEE咀嚼片(批号20200501)加速试验结果

表4 AEE咀嚼片(批号20200502)加速试验结果

表5 AEE咀嚼片(批号20200503)加速试验结果

2.3 长期性试验结果

AEE咀嚼片的含量随着时间的延长呈下降趋势,但均在标示量90%～110%之内(表6～表8),杂质A含量均在0.5%以内,溶出度自12月起有一定程度降低,但仍大于限度要求70%,重量差异变化均在±5%之内,脆碎度稍有所上升,但减失重量小于1%,且无断裂、龟裂及粉碎片;外观性状无变化,均为白色片(图3)。AEE咀嚼片的各项检测指标均符合质量标准有关规定,表明咀嚼片放置24个月内稳定性良好。

图3 AEE咀嚼片(批号20200502)长期试验的外观性状

表6 AEE咀嚼片(批号20200501)长期试验结果

表7 AEE咀嚼片(批号20200502)长期试验结果

表8 AEE咀嚼片(批号20200503)长期试验结果

3 讨论

本研究旨在考察AEE咀嚼片在不同极端环境条件下的稳定性,为咀嚼片有效期的计算提供理论支撑。本研究对1批次AEE咀嚼片中试产品进行影响因素试验,对3批次中试产品进行加速试验及长期试验。在高温、高湿与强光条件下,AEE咀嚼片的含量、有关物质均没有明显改变,表明AEE的化学稳定性良好;溶出度、重量差异与脆碎度均符合质量标准,表明AEE咀嚼片的贮存稳定性良好。在加速条件下,AEE咀嚼片的各项指标均无明显变化,产品较稳定。在长期贮存条件下,AEE咀嚼片的含量随着时间的延长稍有所降低,但仍在标示量限度之内;有关物质没有明显差异;溶出度随时间逐渐降低,脆碎度有所上升,可能由于片剂水分减少,硬度降低,粘结力不强所致;重量差异均符合标准。表明AEE咀嚼片制备工艺稳定可行,所选用的包装合适,在极端环境条件下产品质量较为稳定。但仍然建议制剂包装应密闭,宜置于干燥阴凉处存放。