老年人自身免疫性肝病自身抗体谱的检测及临床特征

洪海龙 占启川

自身免疫性肝病（autoimmune liver disease，AILD）是免疫性疾病，具有复杂的发病机制，具体机制尚不明确[1-3]。通常认为，抗原激活是AILD 发病的主要影响因素，病毒感染等因素是AILD 的常见诱因[4-6]。麻疹、乙肝病毒等感染肝组织，激活肝细胞膜表层人白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA），进而加速自身B 细胞抗体释放，导致肝脏组织受损和肝功能损伤，严重时诱发肝硬化甚至肝功能衰竭，对患者生命健康造成严重威胁。上述病原体均具有特异性自身抗体，滴度较高，基于此原理对AILD 患者进行自身抗体谱检测，以期准确诊断、鉴别疾病[7]。本文选取福建医科大学附属第一医院泉港总医院2020 年7 月—2023 年6 月接诊的AILD 老年患者90 例，说明自身抗体谱检测方法，分析检测结果，总结AILD 临床特征。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取福建医科大学附属第一医院泉港总医院2020 年7 月—2023 年6 月90 例老年AILD 患者。纳入标准：（1）符合《自身免疫性肝病基础与临床》[8]中AILD 的诊断标准；（2）资料完整；（3）年龄≥60 岁；（4）沟通能力良好。排除标准：（1）合并酒精性肝硬化；（2）合并肝部肿瘤；（3）合并血液系统疾病；（4）合并传染病。根据病情分为A 组、B 组、C 组，各30 例。A 组为自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis，AIH），男15 例，女15 例；年龄65～83 岁，平均（76.23±5.29）岁。B 组为原发性胆汁性肝病（primary biliary liver disease，PBC），男16 例，女14 例；年 龄65～82 岁，平均（76.21±5.32）岁。C 组为原发性硬化胆管病（primary sclerosing cholangitis，PSC），男14 例，女16 例；年龄66～84 岁，平均（76.19±5.30）岁。3组一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），有可比性。本研究取得患者家属同意，获得医院伦理委员会批准。

1.2 方法

（1）采集3 mL 晨间空腹静脉血，真空采集管保存血液样本。以3 000 r/min 转速离心处理血样10 min，取血清，专业冰箱冷藏备用，冷藏温度为-20 ℃。（2）间接免疫荧光法检测：间接免疫荧光法检测血清抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）、抗线粒体抗体（anti-mitochondrial antibody，AMA）、抗平滑肌抗体（anti-smooth muscle antibody，SMA）。（3）抗原检测：采用人喉表皮样癌细胞（HEp-2）基质、大鼠胃基质冰冻生物薄片进行抗原检测。1 ∶100 比例配比待检血清，温浴处理基质30 min，洗涤基质，置入有异硫氰酸荧光素标记的羊抗人IgG，等待30 min，然后洗片、封片。使用荧光显微镜观察待检样本。ANA、AMA 阳性标准为组织、细胞可见特异性黄绿色荧光。（4）免疫印迹法检测：采用免疫印迹法测定抗可溶性肝抗原/肝胰抗原（soluble liver antigen/liver pancreas，SLA/LP）、抗肝肾微粒体（liver-kidney microsomal，LKM）抗体Ⅰ型。使用硝酸纤维薄膜层包被处理基因重组表达抗LKM 抗体Ⅰ型、SLM/LP 抗原，分别包被相对分子质量不同的5 种AMA-M2 亚型抗原。1 ∶50 配比处理待检血清，取30 μL 使用1.5 mL 稀释液稀释处理，然后观察膜反应变化。在常规温度下振荡孵育持续l h，洗膜后滴入抗人IgG（有酶标记），常温下振荡孵育1 h。然后洗膜处理，滴入酶标记抗人IgG，常温水平幻蝶宫1 h，达到要求后，使用5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐（5-Bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate，BCIP）/四唑硝基蓝（nitrotetrazolium blue chloride，NBT）显色处理10 min。利用蒸馏水终止反应。对比标准对照条带图，判断SLA/LP、抗LKM 抗体Ⅰ型阳性结果，特定区域条带着色、颜色清晰视为阳性。

1.3 观察指标

（1）AMA、ANA 阳性率：比较3 组AMA（≥1 ∶5为阳性）和ANA（≥1 ∶80 为阳性）阳性率。（2）SLA/LP 抗LKM 抗体Ⅰ型、SMA 滴度检测：比较3 组SLA/LP 阳性率（采用免疫印迹法检测时，对照条带图显示清晰的紫色为阳性）、抗LKM 抗体Ⅰ型阳性率（采用免疫印迹法检测时，对照条带图显示清晰的紫色为阳性）、SMA 滴度阳性率（滴度≥1 ∶320）。（3）并发症发生率：统计肝硬化、消化性溃疡、胆囊结石伴慢性胆囊炎、高血压、贫血、慢性乙型肝炎、干燥综合征、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等并发症发生率。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 3 组血清AMA、ANA 阳性率比较

B 组AMA 阳性率高于A 组、C 组，差异有统计学意义（P＜0.05）；A 组ANA 阳性率高于B 组、C 组，差异有统计学意义（P＜0.05）；B 组与C 组ANA 阳性率、A 组与C组AMA 阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 A 组、B 组、C 组血清AMA、ANA 阳性率比较[例（%）]

2.2 3 组血清SLA/LP、抗LKM 抗体Ⅰ型、SMA 滴度阳性率比较

A 组SLA/LP 阳性率高于B 组、C 组，差异有统计学意义（P＜0.05）；A 组抗LKM 抗体Ⅰ型阳性率高于B 组、C 组，差异有统计学意义（P＜0.05）；A 组SMA 滴度阳性高于B 组、C 组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 A 组、B 组、C 组血清SLA/LP、抗LKM 抗体Ⅰ型、SMA 滴度阳性率比较[例（%）]

2.3 3 组并发症发生率比较

肝硬化发生率B 组＞A 组＞C 组，差异有统计学意义（P＜0.05）；A 组胆囊结石伴慢性胆囊发生率低于C组、B 组，差异有统计学意义（P＜0.05）；3 组高血压、消化性溃疡、贫血、慢性乙型肝炎、干燥综合征、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎发生率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

表3 A 组、B 组、C 组并发症发生率比较[例（%）]

3 讨论

AILD 即肝脏组织受到免疫功能异常、免疫应答等自身免疫系统攻击影响发生病变，通常起病隐匿而且无典型症状。从组织病理学、免疫学角度分析，可将AILD 分为AIH、PBC、PSC 等疾病类型[9]。准确检测AILD，科学疾病分型，对于临床精准治疗具有重要意义[10]。自身抗体谱检测是现代比较先进、可靠的检测方法[11]。通过综合检测和免疫分析，可有效确诊上述疾病，指导医师科学治疗[12]。

本研究体现了《自身免疫性肝病基础与临床》[8]的临床参考或执行标准。本研究中，B 组AMA 阳性率高于A 组、C 组，差异有统计学意义（P＜0.05）；A 组ANA 阳性率高于B 组、C 组，差异有统计学意义（P＜0.05）；A 组SLA/LP、抗LKM 抗体Ⅰ型阳性率高于其他类型AILD 患者，此外，A 组SMA 滴度阳性率高于B 组、C 组，差异有统计学意义（P＜0.05）。

自身抗体谱检测可用于早期诊断AILD[13]。血清AMA可特异性识别PBC，SLA/LP 在AIH 检测中具有较高敏感度[14-15]。不同类型AILD 患者血清ANA 指标存在一定差异，对AIH 具有显著影响[16]。AIH 患者ANA 阳性率显著升高[17]。PBC 患者、PSC 患者ANA 水平出现一定程度变化[18]。正常情况下，针对健康体检者进行血清ANA 检测时，结果应呈现为阴性[19]。自身抗体谱检测中，ANA 具有高敏感性，是现代筛查AILD 的重要手段，被视为AILD 标志物[20]。PBC患者常见AMA 激活。AMA 检测常见AMA-M2 阳性，是PBC 血清特征性自身抗体。PBC 患者常见血清AMA 检测阳性结果。在PBC 筛查中，血清AMA 可作为诊断敏感性指标。PSC 为AILD 高发性病型，自身抗体谱检测显示，部分PSC患者出现ANA 阳性结果，而PSC 患者血清AMA 通常为阴性结果。SMA 滴度≥1 ∶320、SLA/LP、抗LKM 抗体Ⅰ型1 值、P1值为A 组、B 组比较，χ22 值、P2值为A 组、C 组比较，χ23 值、P3值为B 组、C 组比较。1 值、P1值为A 组、B 组比较，χ22 值、P2值为A 组、C 组比较，χ23 值、P3值为B 组、C 组比较。

注：χ21 值、P1值为A 组、B 组比较，χ22 值、P2值为A 组、C 组比较，χ23 值、P3值为B 组、C 组比较。检测等显示，PSC 患者通常为阴性结果。PSC 鉴别与诊断是AILD 诊断难点，应结合既往肝病史，分析影像学检查结果，实施综合诊断以降低PSC 误诊风险。并发症方面，AILD 患者因为存在免疫系统疾病和肝损伤，常合并多种疾病，其中，B 组患者合并肝硬化风险较高，C 组合并胆囊结石伴慢性胆囊发生率高。

综上所述，采用自身抗体谱检测法对于老年AILD 诊断具有积极意义。在临床疾病诊断中，应采用多种自身抗体检测方法，实施自身抗体谱检测，予以针对性治疗干预。此外，应加强对老年AILD 患者的并发症防控，实施综合治疗，促进患者预后。