lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3表达在非小细胞肺癌患者中的临床意义

徐凯伦, 邹芳, 孙雪婷, 马方旭, 张志华, 王布

1.河北北方学院附属第一医院,河北张家口075000;2.河北省胸科医院,河北石家庄050041

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者医院确诊时多处于中晚期,此时多以化疗为主要治疗手段,但治疗效果不理想,预后较差[1]。有研究显示,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)可通过与miRNA(miR)结合参与细胞增殖、分化、凋亡等许多重要的调控过程[2-3]。既往有研究报道,miR-210在NSCLC组织和NSCLC患者血清中表达上调,推测血清miR-210水平变化可作为诊断早期NSCLC的参考指标[4]。但lncRNA-miR210HG作为miR-210的转录前体,鲜少有研究报道其与NSCLC之间的关系。既往有研究显示,SH3BGRL3在多种肿瘤组织中高表达[5-6],关于SH3BGRL3在NSCLC中发挥作用的机制鲜有报道。因此,本研究分析NSCLC患者癌组织lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3表达水平及其临床意义,为寻找NSCLC潜在的有效生物标志物提供参考。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取本院2018年9月—2019年9月病理确诊的76例NSCLC患者,其中男性50例,女性26例,年龄(53.41±5.48)岁。纳入标准:符合NSCLC诊断标准[4];首次确诊;均行腹腔镜根治术;均获得患者及家属知情同意。排除标准:存在心、肺、肾等器官功能障碍;合并其他恶性肿瘤;其他肿瘤发生肺转移;既往接受治疗;复发性NSCLC。剔除标准:中途失访者;临床资料不完整者。本研究经本院医学伦理委员会批准。搜集患者临床资料,包括年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移、分化程度等。

1.2 实时荧光定量PCR检测lncRNA-miR210HG和SH3BGRL3 mRNA表达水平

所有患者术中取癌组织及距癌组织边缘至少2 cm癌旁正常组织,匀浆,采用TRIzol法提取组织总RNA,反转录获得cDNA,进行荧光定量PCR扩增。设置反应条件:95 ℃ 5 min;95 ℃ 10 s,60 ℃ 30 s,共40个循环。引物序列lncRNA-miR210HG上游:5′-CTGCTGTGGAACTGGATGTTTTC-3′,下游:5′-GTGGCCAGAGTGCTTCAGATC-3′;SH3BGRL3上游:5′-CTATGCTGTTGGCACGACA-3′,下游:5′-TCCTGAGGTGACTGTGAACC-3′;β-actin上游:5′-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3′,下游:5′-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3′。采用2-ΔΔCT法计算lncRNA-miR210HG和SH3BGRL3 mRNA表达水平。

参考文献[7]对患者进行分组,将SH3BGRL3 mRNA表达水平≥0.72者纳入阳性组,<0.72者纳入阴性组;lncRNA-miR210HG mRNA表达水平≥1.61者纳入阳性组,<1.61者纳入阴性组。

1.3 随访

通过门诊复查、电话、电子邮件等多种形式对术后患者进行3年随访,入组患者均获得有效随访。随访起始时间为手术日,随访终点为患者死亡或随访结束,每3个月进行1次随访。随访截止时间为2022年9月。比较各组患者生存情况。

1.4 统计学处理

2 结 果

2.1 癌组织和癌旁组织中lncRNA-miR210HG和SH3BGRL3 mRNA表达水平的比较

NSCLC癌组织中lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3表达水平均高于癌旁组织(P<0.05;表1)。

表1 癌组织和癌旁组织中lncRNA-miR210HG和SH3BGRL3表达水平的比较

2.2 不同lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3表达患者临床病理特征的比较

lncRNA-miR210HG阳性表达者Ⅲ期占比、淋巴结转移占比高于阴性表达者;SH3BGRL3阳性表达者Ⅲ期占比、淋巴结转移占比、低中分化占比高于阴性表达者(P<0.05;表2)。

表2 不同lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3表达患者临床病理特征的比较 例(%)

2.3 不同lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3表达水平患者生存情况的比较

lncRNA-miR210HG阳性组总生存率低于阴性组(52.38%比73.53%;P<0.05),SH3BGRL3阳性组总生存率低于阴性组(45.83%比71.43%,P<0.05;图1)。

图1 不同lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3表达水平患者生存情况的比较a为P<0.05,与lncRNA-miR210HG阴性组比较;b为P<0.05,与SH3BGRL3阴性组比较。

3 讨 论

非小细胞肺癌包括鳞癌、腺癌、大细胞癌,属于肺癌亚型,其占比在肺癌中最高,且预后较差,手术切除是治疗早期NSCLC的金标准,但仍有部分患者出现术后复发。因此,探寻潜在的生物指标有利于临床早期诊断NSCLC和制定有效治疗方案。

近年来越来越多研究显示,lncRNA可在转录后调节基因表达,在肿瘤发生中起到重要作用,进而影响恶性肿瘤的发展进程[8-9]。miR210HG可以通过lncRNA-miRNA-mRNA调控网络调节机体多种生理过程,参与肿瘤的发展进程。有研究显示,lncRNA-miR210HG的3′-UTR区可与miRNA210靶向结合,参与NSCLC发生发展过程[10]。目前癌症中SH3BGRL3基因分析的研究并不多,有研究显示,MNX1-AS1可能通过miR-744-5p/SH3BGRL3轴促进喉癌发展进程[11];SH3BGRL1基因可促进宫颈癌细胞增殖和迁移,参与肿瘤的发展过程[12]。本研究发现,NSCLC癌组织中lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3表达水平均高于癌旁组织;有研究显示,miR210HG在NSCLC组织和细胞中过表达[13],与本研究结果基本类似。因此推测,lncRNA-miR210HG和SH3BGRL3可能参与NSCLC恶性发展过程。

本研究发现,lncRNA-miR210HG阳性表达者III期占比、淋巴结转移占比高于阴性表达者;SH3BGRL3阳性表达者III期占比、淋巴结转移占比、低中分化占比高于阴性表达者。有研究显示,NSCLC癌组织中SH3BGRL3表达上调,且其差异表达与临床病理特征密切有关,同时也是NSCLC患者预后的危险因素[14],这与本研究结果部分类似。但本研究中尚未发现SH3BGRL3差异表达与肿瘤大小以及浸润深度存在关联,可能与本文纳入样本量有关,需要扩大样本量进一步分析验证。本研究结果显示,不同lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3表达水平NSCLC患者TNM分期、淋巴结转移和分化程度不同,分析其原因可能是lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3异常高表达与NSCLC肿瘤细胞的恶性生物学行为有关。

此外,本研究发现,lncRNA-miR210HG阳性组总生存率和SH3BGRL3阳性组总生存率均低于阴性组,提示lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3差异表达可能预测NSCLC患者预后,有待进一步进行研究。

综上所述,lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3在NSCLC癌组织中高表达,不同表达水平NSCLC患者TNM分期、淋巴结转移、分化程度、预后不良不同,lncRNA-miR210HG和SH3BGRL3有希望成为NSCLC的潜在标志物。本文纳入样本量较少,且患者来源单一,可能存在一定偏移,需进一步扩大样本量和来源,分析lncRNA-miR210HG、SH3BGRL3与NSCLC患者临床特征和预后的关系。