环氧化酶-2及12-脂氧化酶在宫颈病变进展中的临床意义

屈海蓉,张心愿,王国平,包生武,张洪炜

宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤,也是威胁女性生命健康的重要因素。在宫颈癌的治疗中,早期诊断及治疗可以明显改善患者的预后[1]。宫颈癌的发生以及进展指的是宫颈上皮内瘤样病变发展至宫颈癌的过程,其中高危型人乳头状瘤病毒(HPV)感染是导致疾病进展的重要因素,但随着对宫颈癌的深入研究,人们发现宫颈癌的发生与发展是多种因素共同作用的结果[2-3]。环氧化酶-2(COX-2)参与了前列腺素的合成,在前列腺素合成前期COX-2起到酶调节作用,随着该分子标志物浓度的上升,可能会对机体的炎症反应有刺激效果,进而对肿瘤细胞的增殖起到诱发作用[4-5]。12-脂氧化酶(12-LOX)属于非血红素铁蛋白,在相关研究中显示,12-LOX在乳腺癌、胃癌以及肺癌患者中均呈现上升趋势,参与患者肿瘤纤维化、血管生成等病程[6]。由此得知,在炎症以及肿瘤的发生、增殖过程中,COX-2、12-LOX指标的变化对疾病进展可起到指示作用,尤其是在疾病的诊断以及分子靶向治疗方面具有重要意义[7]。本文研究了COX-2、12-LOX指标变化在宫颈病变进展中的意义,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2010—2020年于银川市妇幼保健院妇科门诊行宫颈癌筛查结果异常,并进行电子阴道镜检查宫颈活检的200例女性患者作为研究对象,根据病理诊断结果将其分为宫颈癌组46例、宫颈高级别病变组(HSIL)54例、宫颈低级别病变组(LSIL)57例、慢性炎症组43例。其中宫颈癌组年龄40～65岁,平均年龄(46.97±10.61)岁;HSIL组年龄34～62岁,平均年龄(45.33±11.48)岁;LSIL组年龄34～59岁,平均年龄(42.22±11.23)岁;慢性炎症组34～60岁,平均年龄(39.46±10.04)岁。4组患者的一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。

1.1.1 纳入标准 年龄在34～65岁的范围内,且存在性生活史;在宫颈癌筛查前未进行任何治疗。

1.1.2 排除标准 伴有阴道炎、盆腔炎患者;合并心、肝、肾功能障碍或血液系统疾病患者;妊娠期以及哺乳期妇女。

1.2 实验技术与流程

1.2.1 免疫组化染色 获取4组患者的宫颈组织,使用10%中性甲醛固定石蜡包埋,4 μM连续切片。COX-2鼠抗人单克隆抗体(武汉爱博泰克生物有限公司,A12796-50 μL,工作浓度1∶200)与12-LOX兔多克隆抗体(武汉爱博泰克生物有限公司,A14703-50 μL,工作浓度1∶200)采用Envision二步法,桥联亲和素-标记生物素法(BAB)显色,使用磷酸缓冲盐溶液(PBS)替代第一抗体为阴性对照,使用已知阳性切片为阳性对照,根据Envisionya说明书(罗氏 Bench Mark GX)进行操作。

1.2.2 结果判读 切片在无污染背景下,抗体正常着色部分出现棕黄色或棕褐色,颗粒为阳性细胞。COX-2着色在胞浆,随机抽取10个高倍视野,视野计数100个细胞,阳性细胞百分率>5%为阳性。12-LOX着色在细胞膜和细胞质中进行,根据着色强度以及阳性细胞百分比进行结果判读。

1.2.3 染色强度判定 低倍镜下观察,细胞未着色为0分,浅黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分。无阳性细胞为0分,(0,25%]为1分,(25%,50%]为2分,(50%,75%]为3分,(75%,100%]为4分。两者乘积为总积分,总积分0分为(-),总积分1～8分为(+),总积分8～12分为(++)。总积分0为阴性,总积分为1～12分为阳性。

1.3 统计学方法 采用SPSS 21.0统计软件,计数资料采用χ2检验,以%表示,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈病变与慢性宫颈炎患者宫颈组织COX-2、12-LOX表达阳性率比较 宫颈病变组宫颈组织中的COX-2、12-LOX表达阳性率高于慢性宫颈炎组(P<0.05),见表1。

表1 宫颈病变与慢性宫颈炎患者宫颈组织COX-2、12-LOX表达阳性率比较[n(%)]

2.2 各组患者宫颈组织中COX-2、12-LOX表达阳性率比较 COX-2、12-LOX表达阳性率由低到高分别为慢性宫颈炎组、LSIL组、HSIL组、宫颈癌组。COX-2、12-LOX根据疾病的进展呈现逐渐上升的趋势,各组比较差异有统计学意义(P<0.05),见表2。

表2 各组患者宫颈组织中COX-2、12-LOX表达阳性率比较[n(%)]

2.3 宫颈癌、HSIL患者的宫颈组织中COX-2、12-LOX表达阳性率比较 宫颈癌组患者的阳性率高于HSIL组(P<0.05),见表3。

表3 宫颈癌、HSIL患者的宫颈组织中COX-2、12-LOX表达阳性率比较[n(%)]

3 讨论

宫颈癌作为影响女性生命健康的恶性肿瘤之一,近年来疾病的发生率逐步增长,并且呈现年轻化趋势[8]。恶性肿瘤的发生以及发展是一个相对漫长的过程[9]。目前对于宫颈疾病的检测主要包括HPV检测和液基细胞学检查(TCT),但对于宫颈病变患者治疗后的预后预测指标目前尚欠缺。花生四烯酸(AA)即5,8,11,14-二十碳烯酸,它是人体中最重要的一种多不饱和脂肪酸(PUPA),是人体必需的脂肪酸之一,主要通过环氧合酶、脂氧合酶和细胞色素3个途径代谢[10],在LOX(脂氧化酶)途径下转化为前列腺素和血栓素,在COX(环氧化酶)途径下转化为过氧化氢二十碳四烯酸、白三烯、轻化二十碳四烯酸和脂氧素。大量研究表明[11],AA的COX代谢途径和LOX代谢途径与肿瘤的发生、发展密切相关。但目前对于COX-2、12-LOX的表达与宫颈病变进展的相关性研究相对较少。

COX-2属于COX的异构体,作为一种诱导型酶能够促进前列腺素以及各类炎症物质的形成,在正常情况下,细胞中的COX-2以不表达或低表达为主,当细胞承受内外多种刺激后,会促进COX-2的表达[12]。早期COX-2被发现在组织损伤中的内皮细胞、巨噬细胞以及成纤维细胞中,在肿瘤坏死因子、白介素等炎性物质中都会改变COX-2的表达情况[13]。本研究结果显示,COX-2在宫颈病变的发生以及发展中,HSIL组和宫颈癌组患者的阳性率分别为75.92%、91.30%,LSIL组和慢性宫颈炎组患者的阳性率为24.56%和23.25%,由此说明COX-2随着宫颈病变的进展呈现高表达情况,与许丽娜等人的研究结论相同[14]。

12-LOX属于花生四烯酸和其他不饱和脂肪酸代谢的关键酶,其能介导分子氧进入底物并在碳十二的位置产生羟基,并形成具有生物活性的代谢产物,对细胞的信号传导、结构改变以及代谢造成影响。在相关研究中,12-LOX在多种肿瘤的发生以及发展中呈现异常表达,和肿瘤的发展具有密切联系[15]。本研究结果显示,12-LOX在癌变组的阳性率为93.47%和75.43%,证明12-LOX随着宫颈病变的发生与发展呈现高表达。

综上所述,在宫颈病变的发展中,COX-2、12-LOX均会发生表达水平的变化,所以COX-2、12-LOX在宫颈病变中的诊断以及鉴别中具有一定的应用价值。