HMGB1、MYCN在儿童神经母细胞瘤组织中的表达及其意义

侯栋亮 张 飞 韦 源

作者单位：450018 郑州大学附属儿童医院,河南省儿童医院,郑州儿童医院

神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)较为常见,好发于身体多个部位交感神经组织,发病群体以5岁以下儿童为主,可诱发腹胀、腹痛、呼吸困难、骨痛等一系列症状,若不及时治疗,可威胁患儿生命[1-2]。临床对于儿童NB多以早确诊、早治疗为原则,尽早开展以手术为主的综合治疗方案,能够阻止肿瘤细胞扩散或转移,以缓解临床症状,促使患儿获得良好预后[3-4]。NB早期症状不典型,且恶性程度高,易发生转移,临床治疗难度大,远期预后不理想。高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)是一种高度保守的核蛋白,临床近年来发现其在多种恶性肿瘤中均存在异常表达,或可加速肿瘤的发生及发展[5]。骨髓细胞瘤病毒相关基因(myeloclaoma virus-related genes,MYCN)属于MYC原癌基因家族成员,最初是从NB肿瘤细胞内分离而出,可能与肿瘤生长、增殖、转化等相关[6]。鉴于此,本研究分析HMGB1、MYCN在儿童NB组织中的表达及其意义,旨在为临床完善儿童NB治疗方案提供指导。报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2019年1月至2022年1月我院收治的75例NB患儿临床资料,其中男性35例,女性40例;年龄1个月～10岁,平均年龄(3.89±1.45)岁;体质量5.5～38 kg,平均体质量(18.96±6.15)kg;肿瘤部位:60例肾上腺,15例其他。纳入标准:均经手术病理明确诊断;临床资料完整。排除标准:合并其他恶性肿瘤;肝肾衰竭;术前接受放化疗;存在严重先天性疾病。

1.2 方法

手术中采集所有患儿病理标本及癌旁组织标本,术后及时送至病理科检验,并开展免疫组织化学法检测HMGB1、MYCN在病理标本及癌旁组织标本中的表达情况。HMGB1表达:先以10%甲醛溶液固定标本48 h,石蜡包埋切片、灭活处理,之后以微波抗原修复,加入兔抗人HMGB1抗体,在4 ℃环境内孵育过夜,之后室温孵育40 min,以PBS溶液冲洗;滴入二氨基联苯胺显色液,之后进行复染、脱水及封片等一系列处理。结果判断:依据染色强度及阳性细胞比判断,其中染色强度分为0、1、2、3分,对应无色、淡黄色、棕色、棕褐色;阳性细胞比:<5%为0分,≥5%且<20%为1分,≥20%且<50%为2分,≥50%为3分;其中0～1分为阴性,反之为阳性。MYCN表达:先以10%甲醛溶液固定标本48 h,石蜡包埋切片、灭活处理,常规脱蜡后用枸橼酸钠抗原修复液稀释为工作液,煮沸处理,切片置于耐热染色架上在工作液内高压加热,之后以PBS溶液冲洗5 min,反复3次,以3% H2O2室温下避光孵育15 min,之后滴加兔抗人多克隆抗体MYCN,室温下静置15 min,之后依次滴加封闭用山羊血清工作液,不洗,15 min后,生物素标记山羊抗兔工作液,间隔15 min,去除PBS溶液后,进行显色处理,自来冲洗后苏木精复染,之后脱水及封片等。结果判断:依据染色强度及阳性细胞比判断,其中染色强度分为0、1、2、3分,对应无色、淡黄色、棕色、棕褐色;阳性细胞比:0分为阳性细胞无,≤10%为1分,>10%～50%为2分,>50%～75%为3分,≥75%为4分;综合两者评分,其中0～2分为阴性,反之为阳性。

1.3 观察指标

(1)HMGB1、MYCN表达情况:比较HMGB1、MYCN在肿瘤组织及癌旁组织中的表达水平。(2)HMGB1表达与病理特征间的关系:分析不同HMGB1表达NB患儿年龄、性别、体质量、肿瘤部位、肿瘤转移、肿瘤分期、分化程度等病理特征间差异。(3)MYCN表达与病理特征间关系:分析不同MYCN表达NB患儿年龄、性别、体质量、肿瘤部位、肿瘤转移、INSS分期、分化程度等病理特征间差异。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 HMGB1、MYCN表达情况

肿瘤组织HMGB1阳性表达率、MYCN阳性表达率均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 2组HMGB1、MYCN表达情况对比(例,%)

2.2 HMGB1、MYCN表达与病理特征间关系

HMGB1、MYCN阳性组肿瘤转移率、肿瘤分期Ⅲ期率、低分化率高于HMGB1、MYCN阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 HMGB1、MYCN表达与病理特征间关系(例,%)

3 讨论

NB病因复杂,临床认为该病始于成神经细胞,这种细胞为胎儿发育过程中产生的一类未成熟神经细胞,在胎儿发育成熟过程中,该细胞最终可转变为神经细胞、纤维等[7-8]。多数胎儿在出生后成神经细胞均会成熟,发育为神经细胞,但仍有部分胎儿体内存在少量未成熟的成神经细胞,该类细胞可发生一定突变,难以正常成熟,反而不断生长分裂,从而进展为肿瘤[9-10]。NB病情较为复杂,发展相对较快,较多患儿确诊时已伴有肿瘤转移或扩散情况,临床治疗难度加大。手术为主的综合治疗方案为当前治疗NB患儿的重要方式,尽早切除病灶可阻止肿瘤持续进展,降低转移等风险,从而延长生存时间[11]。但NB整体恶性程度偏高,术后仍有部分远期预后欠佳,故如何进一步改善NB患儿预后成为临床重点关注。

肿瘤的浸润、生长及转移是一个复杂的过程,若能寻找到肿瘤进展过程中的相关分子机制,则有助于临床评估肿瘤生长、浸润及转移情况,为临床早期治疗提供方向,以进一步提高恶性肿瘤治疗效果。HMGB1则为核内蛋白,能够参与细胞核内多种生物学功能,如参与DNA的复制、重组、转录及修复等。HMGB1亦属于结构蛋白,能够起到协助基因转录、稳定细胞核等多种作用。本研究结果显示,肿瘤组织HMGB1阳性表达率高于癌旁组织,HMGB1阳性组肿瘤转移率、肿瘤分期Ⅲ期率、低分化率高于HMGB1阴性组;提示HMGB1在儿童NB中表达水平较高,且高表达患儿肿瘤分期高、分化程度低,并存在较高的转移风险。其原因为HMGB1表达水平较高时,能够结合相关受体,诱导金属蛋白酶类物质释放,促使细胞外基质降解,从而促进肿瘤生长、浸润及扩散[12-13]。HMGB1还能够活化调节性T细胞,使得Th2细胞出现极化,促使肿瘤细胞逃脱免疫监控,故HMGB1阳性表达患儿肿瘤增殖速度快,更易出现肿瘤转移。本研究结果显示,肿瘤组织MYCN阳性表达高于癌旁组织,MYCN阳性组肿瘤转移率、肿瘤分期Ⅲ期率、低分化率高于MYCN阴性组,提示MYCN在儿童NB患儿中表达水平较高,并可影响肿瘤分期及转移。其原因为MYCN为MYC家族重要成员,编码为具有基本螺旋-环-螺旋结构域的蛋白质,主要位于细胞核内,其基因扩增与肿瘤生长、扩散等存在密切关系,尤其在NB中存在明显异常表达。当MYCN高表达时,其可通过调控蛋白在肿瘤增殖中起到重要作用,促使肿瘤细胞无法正常凋亡,增强肿瘤生长、侵袭能力,故MYCN阳性患儿普遍肿瘤分期高、分化程度低,且肿瘤转移风险高[14-15]。因此,临床可将HMGB1、MYCN作为评估肿瘤生长、转移等情况的重要参考指标,并可为临床完善早期治疗方案提供指导。

综上所述,HMGB1、MYCN在儿童NB组织中表达水平较高,且阳性表达患儿肿瘤分期高、分化程度低,更易伴有肿瘤转移,可为临床诊疗提供重要参考。