甲状腺癌组织中TIPE2、LASP1蛋白表达与其临床病理特征及预后的相关性分析

张 瑜 马征泽 王 曼 阎 芳 周晓燕 刘双双

作者单位：450000 郑州大学第一附属医院

甲状腺癌主要起源于甲状腺滤泡上皮,早期无明显症状,多因无痛性颈部肿瘤而就诊,当肿瘤体积不断增大后,可对周围组织造成压迫,诱发呼吸困难、声嘶、吞咽困难等症状,若不及时治疗,还可发生远处转移,威胁生命安全[1-2]。手术为治疗甲状腺癌主要方式,依据患者病情制定适宜手术方案,能够充分切除肿瘤组织,避免肿瘤持续浸润或转移,以延长患者生存时间[3-4]。但长期随访发现,仍有部分患者术后出现复发转移情况,导致预后欠佳。若能尽早寻找到能够对甲状腺癌患者预后起到一定预测作用的生物学指标,则有助于进一步完善治疗方案。人肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)则是近年来新发现的免疫负调控分子,在多种恶性肿瘤组织内均存在分布及表达,被临床认为是一种潜在抑癌基因,或可阻止肿瘤发生[5]。LIM和SH3结构域蛋白1(LASP1)属于特异性黏着斑蛋白,临床认为其与肿瘤的侵袭、转移存在密切关系[6]。但关于TIPE2、LASP1在甲状腺癌中的表达相关报道较少,还有待进一步研究。鉴于此,本研究旨在分析甲状腺癌组织内TIPE2、LASP1蛋白表达与临床病理特征及预后的相关性。报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2017年1月至2019年5月我院收治的81例甲状腺癌患者的临床资料。其中男性32例,女性49例;年龄35～67岁,平均年龄(51.36±7.19)岁;体质量指数18.5～27.4 kg/m2,平均体质量指数(23.53±1.68)kg/m2;肿瘤位置:49例单侧,32例双侧;肿瘤分期:Ⅰ～Ⅱ期47例,Ⅲ～Ⅳ期34例;淋巴结转移:50例转移,31例无转移。纳入标准:经病理活检或手术病理证实;精神状态正常;临床资料完整。排除标准:凝血功能障碍;中途随访失联;术前接受放化疗;合并其他恶性肿瘤;存有肝肾衰竭。

1.2 方法

所有患者均依据肿瘤分期、发病部位等制定适宜的手术计划,术中切除病理标本后,再切除距离肿瘤2 cm以上的正常组织作为癌旁标本,术后及时送检。TIPE2表达:采用免疫组化SP染色法检测,先将石蜡切片进行脱蜡、水化等处理,以3% H2O2封闭内源性过氧化物酶,之后PBS冲洗5 min,滴加正常山羊血清,以37 ℃封闭处理15 min,再以滤纸吸取血清,直接加入一抗再以37 ℃孵育2 h,再滴加生物素化的二抗,以37 ℃孵育40 min;PBS冲洗5 min,DAB显色处理,苏木精复染,中性树胶封片。显微镜下选取5个视野观察,每个视野计数细胞200个,按着色强度、阳性细胞比判断阳性表达情况,着色强度为0～3分,阳性细胞比为0～4分,两项积分相乘,得分>3分为阳性,反之为阴性。LASP1表达:采用免疫组化法检测,石蜡切片,每个组织切6片,以60 ℃烘干处理2 h,经二甲苯脱蜡处理,采用梯度乙醇处理,分别为75%、85%、95%及无水乙醇,再行抗原修复,其中3片加入兔抗人LASP1抗体为一抗,置于4 ℃内冰箱过夜,经PBS冲洗3次,滴加羊抗兔二抗,以37 ℃孵育20 min,之后DAB显色及苏木精复染,以中性树胶封片。显微镜下每张切片任意选取3个高倍视野,按着色强度及阳性细胞比判断阳性表达情况,着色强度0～3分,阳性细胞比0～4分,依据两者乘积划分等级,>3分为阳性,反之为阴性。所有患者均接受长期随访,随访内容为复发转移情况,出现复发转移即为预后不良,随访方式为电话随访或门诊复查随访,随访时间为3年或患者死亡。

1.3 观察指标

(1)比较肿瘤标本及癌旁标本内TIPE2、LASP1表达情况。(2)比较不同TIPE2表达与年龄、性别、肿瘤分期、肿瘤位置、淋巴结转移、肿瘤直径等临床病理特征的关系。(3)比较不同LASP1表达与年龄、性别、肿瘤分期、肿瘤位置、淋巴结转移、病灶数、肿瘤直径等临床病理特征的关系。(4)比较不同TIPE2、LASP1表达患者预后的差异。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 TIPE2、LASP1表达情况

肿瘤标本内TIPE2阳性表达率低于癌旁标本,LASP1阳性表达率高于癌旁标本,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组TIPE2、LASP1表达情况对比(例,%)

2.2 TIPE2表达与其临床病理特征相关性

TIPE2表达阳性组Ⅰ～Ⅱ期、淋巴结无转移、肿瘤直径<2 cm占比高于阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 TIPE2表达与其临床病理特征的相关性/例

2.3 LASP1表达与其临床病理特征相关性

LASP1表达阳性组Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移、肿瘤直径≥2 cm占比高于阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 LASP1表达与其临床病理特征相关性/例

2.4 TIPE2、LASP1表达与患者预后的关系

随访3年,81例患者共31例出现复发转移,预后不良发生率为38.27%(31/81);TIPE2表达阳性组预后不良率为17.24%(5/29),低于阴性组的50.00%(26/52),差异有统计学意义(χ2=8.457,P=0.004);LASP1表达阳性组预后不良率为45.00%(27/60),高于阴性阻的19.05%(4/21),差异有统计学意义(χ2=4.435,P=0.035)。

3 讨论

甲状腺癌病因复杂,临床认为癌基因、多肽生长因子在疾病发展中具有重要作用,该类因素持续作用于甲状腺滤泡细胞,可促使甲状腺发生恶性变化,形成肿瘤组织[7-8]。同时,电离辐射、碘摄入也与甲状腺癌发病关系密切,长期受辐射照射可促使甲状腺细胞核变形,影响甲状腺素正常合成,增加癌变风险,碘缺乏也会促使甲状腺素合成减少,并引起促甲状腺激素异常升高,导致甲状腺滤泡肥大增生,久之则可诱发甲状腺癌[9-10]。手术是临床治疗甲状腺癌的首选方式,多数患者术后预后良好,可提高长期生存率,但仍有部分患者术后易出现复发转移等不良事件,导致预后不良[11]。

TIPE2最早在自身免疫性疾病中检出,在天然及获得性免疫系统中能够发挥重要作用。而随着临床深入研究发现,TIPE2在多种肿瘤组织内也存在分布及表达,能够对肿瘤细胞的分化成熟进行调控,从而抑制肿瘤细胞过度增殖,以稳定肿瘤细胞周期,降低G1/S期细胞比例,并能够阻碍上皮细胞调控异常所致的DNA持续扩增,进而阻止恶性肿瘤的发生及发展[12-13]。同时,TIPE2属于抗炎因子,能够抑制炎症反应在肿瘤细胞增殖过程中发挥作用,故TIPE2被临床视为潜在的抑癌基。本研究结果显示,肿瘤标本内TIPE2阳性表达率低于癌旁标本,TIPE2表达阳性组Ⅰ～Ⅱ期、淋巴结无转移、肿瘤直径<2 cm占比高于阴性组。提示TIPE2在肿瘤标本内阳性表达率低,且阳性表达患者普遍肿瘤分期低、肿瘤直径小、无淋巴结转移。其原因为当患者机体内缺乏TIPE2,则难以通过抗炎、细胞调控等多种途径抑制肿瘤增殖,故肿瘤发展更为迅速,肿瘤病情更为严重。LASP1则属于肌动蛋白结合蛋白,能够在调控细胞运动及伪足延伸中起到重要作用,最初发现于乳腺癌中,当LASP1表达水平较高时,可能作为转移相关蛋白参与肿瘤发展,并能够在细胞骨架形成中起到一定作用,有助于增强肿瘤转移及侵袭能力[14-15]。本研究结果显示,肿瘤标本内LASP1阳性表达率高于癌旁标本,LASP1表达阳性组Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移、肿瘤直径≥2 cm占比高于阴性组。提示LASP1在肿瘤标本内具有较高阳性表达率,且阳性表达组肿瘤分期更高,肿瘤直径大及淋巴结转移风险更大。其原因为当LASP1过表达时,可为肿瘤细胞的增殖及转移创造良好条件,从而促使肿瘤生长、转移。本研究结果显示,随访3年,81例患者共31例出现复发转移,预后不良发生率为38.27%(31/81);TIPE2阳性组预后不良率低于阴性组,LASP1表达阳性组预后不良率高于阴性组。提示TIPE2低表达、LASP1高表达患者预后欠佳,可作为早期评估预后的重要参考指标。

综上所述,TIPE2、LASP1蛋白表达在甲状腺癌中存在不同表达,且表达水平与肿瘤分期、肿瘤直径及淋巴结转移存在密切关系,而TIPE2低表达、LASP1高表达可作为预后不良的重要预测指标。