气相色谱法测定N,N-二异丙基乙胺中的有关物质
2024-01-16廉贞霞姜鹰雁刘延新杨海霞
廉贞霞，李 霞,2，姜鹰雁，杨 帅，刘延新,2，杨海霞*
（1.山东省药学科学院 山东省生物药物重点实验室，山东 济南 250101；2.山东福瑞达医药集团有限公司 山东省黏膜与皮肤给药技术重点实验室，山东 济南 250101）
N,N-二异丙基乙胺（N,N-diisopropylethylamine，DIPEA）是重要的医药、化工原料，可作为关键中间体使用，且在医药、电子和农药等各领域有着广泛应用[1]。其不仅可用于制造医药麻醉剂、农药除草剂，还可用作胺、二氧化碳和卤代烃缩合生成脲烷反应中的缩合剂及高压条件下酯水解的催化剂[2]。DIPEA是一种优良的有机溶剂，欧盟将来可能对其作为基因毒性杂质进行控制。
二异丙胺作为DIPEA生产的主要原料[3]，也是主要工艺杂质。目前尚未检索到DIPEA中有关物质测定方法的报道。本文根据二异丙胺及DIPEA易挥发的性质及DIPEA的其他文献测定方法[4-6]，建立了气相色谱测定DIPEA中有关物质的方法，二异丙胺作为已知杂质进行控制。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
Agilent 7890A型气相色谱仪，包括G4513A型进样器和FID检测器（美国安捷伦科技有限公司）；XS-205DU型电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。
1.2 药品与试剂
DIPEA（批号：20180320，20180502，20191008）；二异丙胺（北京坛墨质检科技股份有限公司，批号：20171310）；乙腈（色谱纯，天津赛孚瑞科技有限公司，批号：20170415002）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：DB-624毛细管柱（30 m×0.53 mm，3.0 μm），载气为氮气，流速为2.2 ml/min，进样口温度为210 ℃，FID检测器，检测器温度为250 ℃，程序升温：起始温度为50 ℃，维持5 min，再以每分钟20 ℃的速率升温至200 ℃，维持3 min。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液 二异丙胺对照品溶液：精密称取二异丙胺对照品约15 mg，置10 ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1 ml，置10 ml量瓶中，加乙腈稀释并定容至刻度，摇匀，作为对照品贮备液，精密量取5 ml，置100 ml量瓶中，加乙腈稀释并定容至刻度，摇匀，即得。
2.2.2 供试品溶液 取DIPEA约50 mg，精密称定，置10 ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.2.3 空白对照溶液 以乙腈作为空白对照溶液。
2.3 测定法
精密量取供试品溶液及二异丙胺对照品溶液各1 μl，注入气相色谱仪，记录色谱图，已知杂质二异丙胺按外标法计算，不得过0.15 %，其他单杂及总杂按面积归一法计算，其他单杂不得过0.15 %，总杂不得过0.5 %。
2.4 专属性试验
分别精密量取对照品溶液、供试品溶液和空白对照溶液各1 µl，按2.1项下色谱条件进行测定，记录色谱图，见图1。结果表明，空白对照溶液不干扰样品中有关物质的测定；供试品溶液中已知杂质二异丙胺与各个峰之间及其他各杂质峰之间分离度均大于1.5，均已达到完全分离，表明所建立方法专属性良好。
图1 专属性试验GC图谱
2.5 检测限和定量限
取对照品溶液，用乙腈逐级稀释，直接进样，记录色谱图。以信噪比约为3时的溶液质量浓度为检测限，结果得二异丙胺的检测限为0.44 µg/ml，相当于供试品溶液浓度的0.0088 %；以信噪比约为10时的溶液质量浓度为定量限，结果得二异丙胺的定量限为0.74 µg/ml，相当于供试品溶液浓度的0.0148 %。
2.6 线性关系试验
精密称取二异丙胺对照品14.70 mg，置10 ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1 ml，置10 ml量瓶中，加乙腈稀释并定容至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液0.1，0.4，0.5，0.6，1.0 ml，分别置于10 ml量瓶中，用乙腈稀释并定容至刻度，摇匀，即得系列浓度对照品溶液。取定量限溶液及系列浓度对照品溶液，依次按浓度从低到高进样，以峰面积A为纵坐标，以浓度c（µg/ml）为横坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程为A=1.4716c-0.1560，r=0.9998。结果表明在0.74～14.70 µg/ml范围内，二异丙胺峰面积与浓度均呈良好的线性关系。
2.7 精密度试验
精密量取2.2.1项下对照品溶液1 µl，注入气相色谱仪进行分析，连续进样6针，记录色谱图。计算得二异丙胺峰面积的RSD为1.56 %（n=6），表明方法精密度良好。
2.8 回收率试验
取已测定二异丙胺含量的DIPEA约50 mg，精密称定，分别置9个10 ml量瓶中，分别精密量取2.2.1项下的对照品贮备液0.2，0.25，0.3 ml各3份，分别加入上述9个量瓶中，作为80 %，100 %，120 %浓度水平的溶液，每个浓度平行3份，按2.1项下色谱条件测定，扣除样品中已知二异丙胺的含量，以测得量与加入量计算回收率，结果见表1。二异丙胺的平均回收率为95.81 %，RSD为2.96 %。表明方法准确度良好。
表1 回收率试验结果
2.9 重复性试验及中间精密度
按2.2项下方法配制对照品溶液和供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定二异丙胺、其他单杂及总杂含量，平行测定6份。二异丙胺含量的RSD为2.86 %，其他单杂含量的RSD为2.67 %，总杂含量的RSD为1.84 %（n=6），表明方法重复性良好。
另取样品，于不同日期换不同的分析员，在不同的气相色谱仪上，按重复性试验项下方法，用同一批样品同法试验，并对试验结果和重复性试验结果，共12个数据进行分析。二异丙胺含量的RSD为3.26 %，其他单杂含量的RSD为2.51 %，总杂含量的RSD为2.74 %（n=12）。表明方法中间精密度良好。
2.10 耐用性试验
取对照品溶液、供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，改变柱温度、检测器和进样口温度、载气流量，对二异丙胺，最大单杂及总杂质的检测结果均无明显影响，表明方法耐用性良好。
2.11 样品测定
取3批DIPEA各约50 mg，精密称定，按2.2项下方法制备对照品溶液、供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定。已知杂质二异丙胺按外标法计算，其他单杂及总杂按面积归一法计算，结果见表2。结果表明，3批样品中有关物质测定结果均符合限度要求。
表2 样品测定结果（n=3）
3 讨论
3.1 溶剂的选择
DIPEA易溶于醇、醚等有机溶剂，甲醇作为空白溶剂时对测定有干扰。更换乙腈作为溶剂，不干扰测定，故选用乙腈作为DIPEA有关物质检查的溶剂。
3.2 方法选择
取2.2项下对照品溶液、供试品溶液、0.5 %对照溶液（精密量取供试品溶液0.5 ml，置100 ml量瓶中，加乙腈稀释并定容至刻度，摇匀），按2.1项下色谱条件进样测定，分别采用面积归一法，自身对照法及外标法计算二异丙胺含量，其他单杂及总杂结果见表3。
表3 不同方法样品测定结果
由表3可见，3个方法的结果相近，最终确定已知杂质二异丙胺含量按外标法计算，其他单杂及总杂含量按面积归一法计算。
3.3 限度讨论
根据各批样品检验结果，DIPEA中二异丙胺限度同最大单杂限度均定为0.15 %，总杂质限度定为0.5 %。
3.4 小结
方法学验证和样品测定结果表明，建立的色谱方法分离度好、灵敏度高、操作简便、准确度好，可用于测定DIPEA中有关物质的含量，能更好地控制DIPEA的产品质量。
