复合人参葵花盘抗痛风与高尿酸血症的作用研究

2024-01-08李志满李田野王玉孙印石

特产研究 2023年6期

李志满，李田野，王玉，孙印石※

（1.中国农业科学院特产研究所，吉林长春 130112；2.吉林省鹿参芝产业研究院，吉林长春 130061；3.吉林省远播医药科技有限公司，吉林长春 130022）

关键字：复合人参葵花盘；痛风；关节炎；高尿酸血症

痛风是一种关节炎症性疾病，其特点是由于血清尿酸盐水平过高和关节内单钠尿酸盐（MSU）结晶沉淀，导致急性疼痛反复发作[1,2]。痛风患者常伴有糖尿病、肾脏疾病和心血管疾病等，且患病率呈逐年上升趋势，已成为第四大代谢性疾病[3]。而高尿酸血症通常是由于体内嘌呤代谢紊乱，使得尿酸合成增多或排泄减少，进而机体出现尿酸代谢异常[4]。高尿酸血症是痛风疾病发生、发展的不同阶段。痛风与高尿酸血症具有病期长和难以根治等特点。目前治疗急性痛风或高尿酸血症多采用化学药物，虽然有一定的效果，但也会引起胃肠道刺激等副作用，患者服药后经常会出现腹泻、恶心和反酸等现象，影响患者的生活质量[5-7]。

天然植物是新型药物开发的来源之一，不仅具有生物活性，而且副作用较少，这主要依赖于其含有复杂的生物活性化合物[8,9]。葵花盘（Sunflower plate）是去除葵花籽的向日葵盘，味甘，性寒，归肝经，用于清热平肝、止痛止血。现代药理学证明，葵花盘具有降血糖、降血脂、抗氧化、缓解疼痛和抗炎等作用[10,11]。此外，有研究发现葵花盘粉对治疗痛风性关节炎具有较好的疗效[12-14]。本研究利用葵花盘这一新型抗痛风的药食同源材料，将人参、葵花盘、薏苡仁与淡竹叶进行组方，明确复合人参葵花盘改善高尿酸血症与抗痛风的药理作用，为复方制剂的开发利用提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 试剂

氧嗪酸钾、别嘌醇、秋水仙碱和尿酸钠购自西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司；黄嘌呤氧化酶购自北京世纪山水科技有限公司；尿酸测定试剂盒、肌酐测定试剂盒和尿素氮（BUN）测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；TNF-Elisa 试剂盒和IL-6 Elisa 试剂盒购自赛默飞试剂公司。

1.2 复合人参葵花盘的制备

复合人参葵花盘按照本课题组的专利方法进行提取和制备[15]。该组合物主要由人参、葵花盘、薏苡仁、淡竹叶和麦芽糊精等物质组成。人参、葵花盘、薏苡仁、淡竹叶分别经过乙醇和水进行提取、过滤和浓缩，浓缩物经不同程度的酶解处理后，进行混合和干燥处理，即为复合人参葵花盘。

1.3 仪器

Epoch2 型酶标仪（美国博腾仪器有限公司）；DHG-9123A电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；CPA225D电热恒温水浴锅（北京市永光明医疗仪器厂）；MS204S 电子分析天平（瑞士梅特勒公司）；超低温离心机（赛默飞世尔科技有限公司）。

2 试验方法

2.1 动物饲养

SPF 级BALB/c 健康雄性小鼠48 只（20 ± 2）g和SD 雄性大鼠36 只（200±20）g，购自辽宁长生生物技术股份有限公司[动物生产许可证：SCXK（辽）2020-0001]。自由进食进水，适应饲养7 d 后开始试验，饲养环境在环境温度（22±3）℃，相对湿度55%±15%，照明时间12 h/d。试验通过中国农业科学院特产研究所动物伦理委员会批准（No.ISAPSAEC-2022-76）。

2.2 大鼠急性痛风性关节炎模型建立及给药方法

将SD大鼠随机分为正常组、模型组、复合人参葵花盘低剂量给药组（0.2 g/kg）、复合人参葵花盘中剂量给药组（0.5 mg/kg），复合人参葵花盘高剂量给药组（1 g/kg）和秋水仙碱阳性对照组（0.3 mg/kg），每组6只。各给药组大鼠灌胃给予对应剂量的受试物，正常组和模型组给予相同体积的生理盐水，连续7 d。在第6天，建立急性痛风性关节炎模型，将0.2 mL 尿酸钠晶体（20 g/L）注射到大鼠右侧的踝关节腔内，正常组注入0.2 mL 的PBS 溶液。造模后的0、1、2、4、6、8、24 h，共7 个时间点对试验大鼠的右踝关节直径（mm）进行测量，3 次测量，计算平均值。

关节肿胀度（mm）=造模后的踝关节直径（mm）-造模前的踝关节直径（mm）。

2.3 痛风性关节炎功能障碍指数的测定

各组大鼠的步态进行观察，0 级：正常行走（0 分）；1 级：轻微跋行，受试下肢略有弯曲（1 分）；2 级：中度跋行，受试下肢刚触及地面（2 分）；3 级：重度跋行，受试下肢离开地面，3 足着地行走（3 分）。

2.4 血清中炎症因子的测定

根据Elisa 试剂盒说明书的方法检测各组大鼠血清中TNF-和IL-6 的含量。

2.5 高尿酸血症小鼠模型建立与给药方法

将雄性BALB/c 小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照药别嘌醇组（20 mg/kg）、复合人参葵花盘组（0.5g/kg、1 g/kg 和1.5 g/kg），每组8 只。除空白组外，各组均灌胃给予20 g/kg 酵母溶液，各给药组灌胃相应样品，共8 d。在第5～8 天，酵母灌胃1 h 后，除空白组，各组腹腔注射300 g/kg 氧嗪酸钾（OXO）溶液。空白组注射等量生理盐水。最后一次给药后1h，各组小鼠眼眶静脉丛取血，血浆静置30 min 后，以3 000 r/min的速度离心5 min，取上清，置于 80 ℃保存。

2.6 高尿酸血症小鼠血清中尿酸、肌酐、尿素氮的测定

按照南京建成试剂盒说明书的测定方法检测小鼠血清尿酸和肌酐及尿素氮的含量。

2.7 肝脏中黄嘌呤氧化酶的测定

按照南京建成试剂盒说明书的测定方法检测小鼠肝脏中黄嘌呤氧化酶的含量。

2.8 统计学分析

3 试验结果

3.1 复合人参葵花盘对急性痛风性关节炎大鼠的关节肿胀程度的影响

表1 结果显示，与正常组相比，模型组大鼠踝关节处在1、2、4、6、8、24 h 发生明显肿胀，在8 h 时肿胀程度最为严重，表明痛风性关节炎模型成功，差异具有统计学意义（P ＜0.01）。与模型组相比，复合人参葵花盘3 个剂量组大鼠踝关节的肿胀程度均有所下降（P＜0.05，P ＜0.01），具有剂量依赖性，秋水仙碱组显著抑制大鼠踝关节的肿胀的程度（P ＜0.01）。说明复合葵花盘能够抑制痛风性关节炎大鼠的关节肿胀。

表1 复合人参葵花盘对急性痛风性关节炎大鼠踝关节肿胀程度的影响（，n=6）Table 1 Effects of CGS on ankle swelling in rats with acute gouty arthriti (,n=6)

注：与正常组相比，##P ＜0.01；与模型组相比，*P ＜0.05，**P ＜0.01。Note:Compared with normal group,##P ＜0.05;Compared with model group,*P ＜0.05,**P ＜0.01.

3.2 复合人参葵花盘对功能障碍指数的影响

造模24 h 后，模型组大鼠活动量减少，走路姿势异常，受试下肢轻触或离开地面，呈3 足着地的步态，关节局部呈现红肿状态。与模型组相比，复合人参葵花盘低、中、高剂量组及秋水仙碱组大鼠行走障碍指数显著下降，说明复合人参葵花盘能够明显改善痛风引起的大鼠行走步态异常（P ＜0.01），结果见表2。

表2 复合人参葵花盘对急性痛风性关节炎模型大鼠步态的影响（，n=6）Table 2 Effects of CGS on gait of rats with acute gouty arthritis（,n=6）

注：与正常组相比，##P ＜0.01；与模型组相比，**P ＜0.01。Note:Compared with normal group,##P ＜0.01;Compared with model group,**P ＜0.01.

3.3 复合人参葵花盘对急性痛风性关节炎大鼠血清中炎症因子的影响

与正常组对比，注射MSU 的模型大鼠血清中炎症因子TNF-和IL-6 的含量显著上升（P ＜0.01）。与模型组相比，复合人参葵花盘中、高剂量组和秋水仙碱阳性组能够显著降低大鼠血清中TNF-的含量（P ＜0.05），复合人参葵花盘3 个剂量组和秋水仙碱阳性组能够极显著降低IL-6 的水平（P ＜0.01）。结果表明，复合人参葵花盘具有提高机体的抗炎能力从而达到抗痛风性关节炎的药理作用，结果见表3。

表3 复合人参葵花盘对急性痛风性关节炎大鼠血清中TNF-和IL-6 的影响（，n=6）Table 3 Effect of CGS on serum TNF-and IL-6 in rats with acute gouty arthritis (,n=6)

注：与正常组相比，#P ＜0.05，##P ＜0.01；与模型组相比，*P ＜0.05。Note:Compared with normal group,#P ＜0.05，##P ＜0.01;Compared with model group,*P ＜0.05.

3.4 复合人参葵花盘对高尿酸血症小鼠肾功能指标的影响

与正常组相比，模型组小鼠血尿酸值、尿素氮和肌酐显著增加（P ＜0.05，P ＜0.01），说明建立高尿酸血症小鼠模型成功。从表4 中可以看出，与模型组相比，复合人参葵花盘低、中和高剂量组均能显著降低小鼠血尿酸、尿素氮和肌酐的含量（P＜0.05，P＜0.01），给药组的血尿酸低于正常组小鼠血尿酸水平，与阳性组的作用一致，说明复合人参葵花盘能起到抗高尿酸血症的作用，结果见表4。

表4 复合人参葵花盘对高尿酸血症小鼠肾功能指标的影响（，n=8）Table 4 Effects of CGS on renal function indexes of hyperuricemia mice (,n=8)

注：与正常组相比，#P ＜0.05，##P ＜0.01；与模型组相比*P ＜0.05，**P ＜0.01。Note: Compared with normal group,#P ＜0.05，##P<0.01;Compared with model group,*P ＜0.05,**P ＜0.01.

3.5 复合人参葵花盘对高尿酸血症小鼠肝脏黄嘌呤氧化酶的影响

与正常组相比，模型组小鼠肝脏中黄嘌呤氧化酶的活力显著升高（P＜0.01），可能诱发小鼠体内尿酸合成增加。与模型组相比，复合人参葵花盘低、中和高剂量组能显著降低小鼠肝脏中黄嘌呤氧化酶的活力（P＜0.05），高剂量组能极显著降低小鼠肝脏中黄嘌呤氧化酶的活力（P ＜0.01），与阳性组的作用一致，说明复合人参葵花盘通过抑制黄嘌呤氧化酶的活力抑制高尿酸血症小鼠体内尿酸的合成，结果见表5。

表5 复合人参葵花盘对高尿酸血症小鼠肝脏黄嘌呤氧化酶活力的影响（，n=8）Table 5 Effects of CGS on the activity of XOD of liver in hyperuricemia mice (,n=8)

注：与正常组相比，##P ＜0.01；与模型组相比*P ＜0.05，**P ＜0.01。Note:Compared with the normal group,##P ＜0.01;Compared with the model group,*P ＜0.05,**P ＜0.01.

4 讨论与结论

近年来随着生活水平的提高，人们的饮食中越来越多地摄入高蛋白与高嘌呤类食物，导致部分人群尿酸值升高或持续偏高，当尿酸水平超过其物理溶解度时会以MSU 晶体的形式析出诱发痛风性关节炎，出现关节疼痛、肿胀、发热以及活动困难等症状[16]。痛风的发病机制与炎症密切相关，MSU 晶体刺激滑膜细胞、单核细胞、巨噬细胞及中性粒细胞并产生IL-1、IL-6 和TNF-等炎性因子[17]。在大鼠的急性痛风性关节炎试验中，通过在大鼠踝关节中注射MSU 晶体来诱导急性痛风性关节炎，引起了大鼠踝关节肿胀与行动困难的症状。与模型组相比，复合人参葵花盘组大鼠在1、2、4、6、8、24 h时显著减轻踝关节的肿胀度，说明复合人参葵花盘能够抑制MSU 引起的踝关节的肿胀且缓解行走障碍。复合人参葵花盘显著降低血清中IL-6 和TNF-的含量，说明复合人参葵花盘具有通过抑制炎症的发生而起到抗痛风的作用。因尿酸水平异常与痛风疾病二者关系密切，我们进一步探讨了复合人参葵花盘对尿酸的生成与分泌产生的作用。在高尿酸血症试验中，给予小鼠酵母膏增加嘌呤的摄入，联合氧嗪酸钾盐降低尿酸酶活性，二者联合给予导致小鼠尿酸升高，诱导高尿酸血症模型[18]。结果表明复合人参葵花盘能够显著降低高尿酸血症小鼠血清中尿酸、肌酐和尿素氮的含量。黄嘌呤氧化酶是促进尿酸在肝脏中合成的关键酶[19]，复合人参葵花盘能显著抑制黄嘌呤氧化酶的活力，证明了复合人参葵花盘能够抑制高尿酸血症小鼠体内尿酸的生成。

综上所述，复合人参葵花盘通过降低炎症因子IL-6 和TNF-的分泌而起到抗痛风性关节炎的生物活性，同时抑制黄嘌呤氧化酶活力进而减少尿酸的生成，从而达到改善高尿酸血症的作用。