-谷甾醇与Vc 抗氧化性能比较及-谷甾醇抑菌活性研究

2024-01-08赖丽玲陈丹郭晓莉陈旭辉谢福发林标声何玉琴

特产研究 2023年6期

关键词：谷甾醇菌种清除率

赖丽玲，陈丹，郭晓莉，陈旭辉，谢福发，林标声，3，何玉琴，3※

（1.龙岩学院生命科学学院，福建龙岩 364000；2.福建福迩金生物科技有限公司，福建漳平 364400；3.福建省人畜寄生与病毒性疫病防控工程技术研究中心，福建龙岩 364000）

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 材料与试剂 1,1-二苯基-2 苦苯肼（DPPH）购自福州艾博生物技术有限公司；-谷甾醇纯度≥95%购自合肥千盛生物科技有限公司；Tris-Hcl 缓冲液、抗坏血酸、水杨酸、双氧水、乙醇95%、无水乙醇均为分析纯。

供试菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌由微生物实验室提供。

1.1.2 主要仪器恒温培养箱（上海精宏实验设备有限公司）；SW-CJ-2D超净工作台（苏州净化设备有限公司）；电热鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司）；UV-759 型紫外可见分光光度计（上海奥谱勒仪器公司）。

1.2 试验方法

DPPH 清除率K=1（B1+B2）/B0

式中:B1是2 mL DPPH 与2 mL 样品液测得的吸光度；B2 是2 mL 样品液与2 mL 95%乙醇测得的吸光度；B0是2 mL DPPH与2 mL 95%乙醇测得的吸光度。

式中：A1是加入空白对照测得的吸光度；Ax是加入-谷甾醇溶液测得的吸光度。

式中：A空白为不加入样品，只加入邻苯三酚和缓冲液测得的吸光度值；A样品为加入-谷甾醇的吸光度值；A 对照的设置使用蒸馏水代替邻苯三酚。

1.2.4 供试菌种活化及菌悬液的制备将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌先转入LB 液体培养基中进行活化，传代2～3 次。分别取活化的菌种入无菌生理盐水中，并将其稀释成1.0×106～1.0×108CFU/mL 的菌悬液备用[10,11]。

抑菌率（%）=（样品抑菌圈直径—空白对照抑菌圈直径）/空白对照抑菌圈直径×100

1.3 数据处理

本文所涉及到的数据均为3 次重复试验的平均值，数据处理分析均采用Excel 软件。

2 结果与分析

从图1 中可知，Vc 对于DPPH 的清除效果较好，在试验浓度范围内，Vc 去除率最高达到96.3%，相比-谷甾醇的去除效果比较差，当样品溶液的浓度达到0.8 mg/mL，其清除率达到了22.2%。-谷甾醇的清除曲线与横坐标基本重合，因此断定，-谷甾醇不能清除DPPH。观察到DPPH 溶液被添加到样品中不会褪色。DPPH 溶液加入Vc 后，DPPH 溶液的吸光值会不断降低，褪色时间也会减少。由此可见，Vc抗氧化能力很强，能与氢及游离基相结合。Vc 可以永久性的阻断自由基的能力，是良好的氢化物给体剂。

图1 -谷甾醇与Vc 对DPPH 清除能力的对比Fig.1 Comparison of DPPH clearance ability between -sitosterol and Vc

图2 -谷甾醇与Vc 对羟自由基清除能力的对比Fig.2 Comparison of OH clearance ability between -sitosterol and Vc

图3 -谷甾醇与Vc 对超氧阴离子自由基清除能力的对比Fig.3 Comparison of clearance ability between -sitosterol and Vc

表1 -谷甾醇对不同菌种的抑菌圈直径Table 1 The diameter of the antibacterial zone of -sitosterol against different bacterial strains 单位：cm

表2 -谷甾醇对不同菌种抑菌率的影响Table 2 The effect of -sitosterol on the antibacterial rate of different bacterial strains

3 讨论

DPPH 是一种稳定的自由基、在酒精溶液颜色为紫色，在517 nm 处有很强的吸附能力。在自由基清除剂中，它与单个电子配对，因此，其吸附能力逐渐降低，其消退与其所能接收的使孤电子成对，从紫色变为浅黄色，且吸光光颜色为度值下降，反应完成后达到了稳定状态。由此，自由基清除能力可以通过517 nm 的吸光度来评估，-谷甾醇的抗氧化能力可以用自由基清除率来表示。DPPH 自由基清除率以Vc 清除能力最高、-谷甾醇的清除率较低，这与黄滢璋等[13]研究结果相似。

羟自由基（OH）是代谢过程中会产生的一种非常活泼的自由基，被认为是活性最强的活性氧。它不仅可以引发细胞凋亡，炎性反应以及癌症等一系列疾病，而且还可诱导肿瘤细胞增殖和分化。因此，对于其研究越来越受到人们的重视。但目前，关于它的作用机制并不清楚。羟自由基（OH）有很强的毒性，生物大分子可以引起蛋白质、DNA、核酸和脂质的体内氧化，导致代谢异常和身体的各种病理变化。羟自由基可以使细胞退化，破坏DNA、细胞膜和多糖类化合物，后来发现，当羟自由基可以降解细胞，其有害作用显著降低。本试验发现，-谷甾醇相对于Vc 清除OH 能力稍弱，但-谷甾醇具有一定的羟自由基清除能力。这与蒋琼凤等[14]发现从蓼蓝中提取的-谷甾醇具有清除羟自由基和超氧阴离子的能力，效果较甘露醇和苯甲酸更佳，可防止油脂发生氧化作用的研究结果相一致。