四川省部分规模养殖场猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪圆环病毒2 型感染情况调查

谢 晶，肖 璐，于吉锋，吴学婧，叶勇刚，李兴玉，潘 梦，曹 冶，林 毅，魏 勇，叶健强，毛从剑，康润敏

（四川省畜牧科学研究院动物遗传育种四川省重点实验室，四川成都 610066）

四川省是我国生猪生产和消费大省。国家统计局四川调查总队数据显示，2022 年四川省以全年6 548.4 万头生猪出栏量再次问鼎全国首位。随着省内生猪养殖业的不断发展，大规模、高密度养猪场数量渐增，规模化养殖与疫病防控、饲养管理之间的不对称导致猪场的发病情况日趋复杂[1-4]，其中免疫抑制性疾病的危害尤甚，其会削弱机体自身免疫力，增加其他疾病患病概率，引发混合感染，严重阻碍养猪业的持续健康发展[5-7]。猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）和猪圆环病毒2 型（porcine circovirus type 2，PCV2）作为2 种重要的免疫抑制性病原，已在我国流行多年[8-11]。PRRSV 主要导致母猪出现繁殖障碍（产死胎、木乃伊胎及流产）、仔猪呼吸道疾病，PCV2 主要引起猪皮炎肾病、繁殖障碍及包括呼吸系统在内的多系统功能障碍，并通过侵害免疫系统，增加猪群的死亡率[12-14]。这2种病原常呈混合感染，给规模化养猪场造成巨大经济损失[15-17]。因此，做好免疫抑制性疾病的监测与防控，成为养殖企业提升养殖效益的重要环节。

本调查采用荧光定量RT-PCR/PCR 方法，对2020 年采自四川省12 个地区规模化养猪场的898份样品进行了PRRSV 和PCV2 检测，并分析了其感染情况、发病规律和流行特征，以期为四川省PRRSV 和PCV2 感染防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 样品来源

2020 年从四川省12 个地区的规模化猪场采集898 份表现发热、呼吸困难、气喘、咳嗽、流产等症状的病猪样品，包括组织样品（肺脏、脾脏、淋巴结、肾脏、肝脏、流产胎）343 份、精液100 份、血液455 份，样品信息见表1。

表1 样品信息 单位：份

1.2 主要仪器与试剂

电动组织研磨器（型号为OSE-Y30），购自天根生化科技（北京）有限公司；全自动核酸提取仪（型号为Purifier 32），购自济凡生物科技（北京）有限公司；荧光定量PCR 仪（型号为PCRmax ECO48），购自英国比比科技公司。FineMag 快速磁珠法病毒DNA/RNA 提取试剂盒，购自济凡生物科技（北京）有限公司；M5 Super qPCR RT kit with gDNA remover 反转录试剂盒、2 × M5 GoldstarTaqMan Mixture 预混试剂，购自北京聚合美生物技术有限公司。

1.3 引物

参考李晓菲等[18]及《猪圆环病毒2 型荧光PCR 检测方法》（GB/T 35901—2018）分别合成PRRSV、PCV2 特异性引物及探针，送至成都擎科梓熙生物技术有限公司合成。引物和探针信息见表2。

表2 引物和探针信息

1.4 核酸提取及cDNA 制备

取适量病猪组织样品，剪碎后用放入洁净EP管中，用电动组织研磨器对其进行充分研磨，反复冻融3 次后，以12 000 r/min 转速离心10 min，取200 μL 上清液备用，精液和血液直接取200 μL 备用。使用全自动核酸提取仪提取病毒核酸，并利用反转录试剂盒将所提核酸反转录成cDNA。将提取的核酸和cDNA 置于-80 ℃保存。

1.5 荧光定量PCR 检测及结果判定

荧光定量PCR 反应体系为20.0 μL，其中2 ×M5 GoldstarTaqMan Mixture 10.0 μL，10 μmol/L 上、下游引物各1.0 μL，10 μmol/L 探针0.5 μL，模板2.0 μL，ddH2O 补足至20.0 μL。荧光定量PCR 反应条件：95 ℃预变性3 min；95 ℃变性15 s，60℃15 s（采集荧光），重复40 个循环。当被检样品的Ct ≤38 且扩增曲线为典型“S”曲线时，判为阳性；当38 ＜Ct ≤40 时，判为可疑，重复检测后38 ＜Ct ≤40 且扩增曲线为典型“S”曲线时，判为阳性。

2 结果与分析

2.1 组织样品

结果（ 表3） 显示，343 份组织样品的PRRSV 单感染率为27.70%，12 个地区的PRRSV 单感染率为0～50.00%，其中南充市最高，仅广元市未检出阳性样品；PCV2 单感染率为25.07%，12 个地区均检出PCV2 阳性，阳性检出率为8.33%～42.86%，其中内江市最高；PRRSV+PCV2 混合感染率为33.53%，12 个地区均检出PRRSV+PCV2 混合感染，阳性检出率为13.95%～58.33%，其中乐山市最高。由此可见，组织样品中PRRSV、PCV2 感染较为普遍，以PRRSV+PCV2 混合感染较为严重。

表3 组织样品检测结果

2.2 精液样品

结果（ 表4） 显示，100 份精液样品的PRRSV 单感染率为53.00%，10 个地区样品中均检出PRRSV 单感染阳性，阳性检出率为26.67%～83.33%，有7 个地区PRRSV 单感染率达到50%以上，其中以南充市最高；PCV2 单感染率较低，仅为6.00%，仅有达州、德阳2 个地区检出了PCV2 单感染样品，阳性检出率分别为14.29%、26.67%；PRRSV+PCV2 混合感染率为10.00%，仅4 个地区检出混合感染，其中绵阳市混合感染率最高，达38.46%。由此可见，精液样品中PCV2 单感染、PRRSV+PCV2 混合感染率均相对较低，PRRSV 单感染率较高，超过50%。

表4 精液样品检测结果

2.3 血液样品

结果（ 表5） 显示，455 份血液样品的PRRSV 单感染率为8.35%，12 个地区中有9 个地区检出PRRSV 单感染样品，阳性检出率为6.00%～25.00%，其中绵阳市最高；PCV2 单感染率为45.27%，各地区均有检出，阳性检出率为20.45%～75.00%；未检出PRRSV+PCV2 混合感染阳性。由此可见，血液样品以PCV2 单感染为主。

表5 血液样品检测结果

2.4 感染特征分析

在组织、精液、血液样品中，PRRSV、PCV2中至少一种为阳性的阳性检出率分别为32.96%、7.68%、27.17%。从不同地区样品的感染情况分析，PRRSV、PCV2 中至少一种为阳性的阳性检出率为52.17%～82.81%，阳性率最高的为绵阳市；在组织样品中，PRRSV、PCV2 中至少一种为阳性的阳性检出率为73.08%～100%，其中眉山市最高；在精液样品中，PRRSV、PCV2 中至少一种为阳性的阳性检出率为44.44%～100%，其中绵阳市最高；在血液样品中，PRRSV、PCV2 中至少一种为阳性的阳性检出率为34.09%～78.00%，其中成都市最高（表6）。

表6 不同地区样品PRRSV 和PCV2 中至少一种为阳性的阳性检出率 单位：%

从不同类别样品感染类型分析，PCV2 单感染率最高，达33.18%，其次为PRRSV 单感染、PRRSV+PCV2 混合感染，分别为20.71%、13.92%；PRRSV 单感染、PRRSV+PCV2 混合感染阳性率最高的均为组织样品，在总样品中分别占10.58%、12.80%，PCV2 单感染率最高的为血液样品，占比为22.94%（表7）。

表7 不同类别样品阳性检出率 单位：%

12 个地区中均检出了PRRSV、PCV2 单感染及PRRSV+PCV2 混合感染样品，PRRSV 单感染率为8.70%～37.50%，最高的为绵阳市；PCV2单感染率为18.60%～44.44%，最高的为内江市；PRRSV+PCV2 混合感染率为4.65%～20.29%，最高的为乐山市（表8）。

表8 不同地区病原阳性检出率 单位：%

3 讨论

在养殖业蓬勃发展的今天，现代养殖正在逐步取代传统养殖，但高速发展的规模化养殖与饲养管理之间的不平衡导致猪场的发病情况仍旧十分复杂。PRRSV 和PCV2 均为免疫抑制性病原，其感染机体后会导致猪免疫系统障碍，降低机体对抗原物质的反应，使猪陷入免疫抑制状态[19-20]。此外，还会继发淋巴细胞和巨噬细胞凋亡，淋巴组织广泛性坏死，导致感染猪免疫力降低，抗病能力减弱，免疫细胞生物活性降低、递呈能力减弱，免疫应答功能下降，对其他病原更加敏感，继而诱发混合感染及继发感染[21-22]，给养猪业造成巨大损失。

本研究对采自四川省12 个地区的898 份组织、精液及血液样品进行了PRRSV 和PCV2 检测。结果显示：12 个地区均检出了PRRSV 和PCV2，其中，PCV2 单感染率高达33.18%，以内江市最高；PRRSV 单感染率为20.71%，以绵阳市最高；PCV2+PRRSV 混合感染率为13.92%，以乐山市最高，说明四川省规模化养猪场中普遍存在PRRSV 和PCV2 感染，其中内江、绵阳、乐山等地的感染情况较为严重。本次采集的组织样品以PRRSV+PCV2 混合感染为主，精液样品以PRRSV单感染为主，血液样品则以PCV2 单感染为主，相比精液和血液样品，组织样品中PRRSV、PCV2的感染情况更为严重，精液样品中PCV2 感染率较低，血液样品中未发现2 种病原混合感染情况。

PCV2 和PRRSV 一旦在猪场发病，其彻底清除难度大、费用高。目前，疫苗免疫仍是疫病防控最有效的措施，但由于病毒不断变异重组，不同毒株间的交叉保护效果有限，因此建议采取综合性防控措施：第一，采取严格的生物安全措施，防控外部病原传入，及时监测并淘汰患病及带毒猪只，重视环境卫生，加强消毒，降低环境病毒载量，定期灭蝇灭鼠，切断传播途径；第二，在引种和选育过程中，强化病原检测，做好隔离检疫，坚决淘汰带毒种猪；第三，在疫苗免疫方面，根据场内毒株流行特征，优化免疫程序，实施合理的免疫措施；第四，在饲养管理中，做到分区管理，采用全进全出或自繁自养模式，合理饲喂具有抗病毒、增强免疫力的中药制剂，增强机体条件机能，改善猪的生长性能，提高抗病力。