我国部分地区屠宰生猪弓形虫和多杀性巴氏杆菌感染情况调查

2024-01-04孙向东刘晓雷刘明远姚火春胥小辰张海燕

中国动物检疫 2023年12期

孙向东，刘晓雷，刘明远，姚火春，侯璐，胥小辰，赵娜，许颖，张海燕，朱茜，张旗

（1.中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032；2.吉林大学人兽共患病研究所人畜共患传染病重症诊治全国重点实验室/人兽共患病研究教育部重点实验室，吉林长春 130062；3.南京农业大学动物医学院，江苏南京 210095；4.兴安盟农牧业综合行政执法支队，内蒙古乌兰浩特 137499；5.兴安盟农牧局综合保障中心，内蒙古乌兰浩特 137499；6.兴安盟动物疫病预防控制中心，内蒙古乌兰浩特 137499；7.扎赉特旗农牧业综合行政执法大队，内蒙古扎赉特旗 137699；8. 兴安盟农牧科学研究所，内蒙古乌兰浩特 137499）

刚地弓形虫，是一种人兽共患寄生虫，几乎可感染所有温血动物[1]。据世界卫生组织（WHO）估计，全世界30%～50%的人群存在该寄生虫的慢性感染，尤其是南美洲、南亚和非洲地区人群的感染率更高[2]，我国人群的弓形虫感染率为0.72%～23.41%[3]。我国是世界上最大的猪肉生产国和消费国，食用污染猪肉导致弓形虫感染的风险不容忽视[4-5]。猪弓形虫病多发于夏季，发病率和死亡率均较高，3～5 月龄猪最易感，给养猪业造成重大损失[6]。猪感染弓形虫后主要临床症状为咳嗽、呼吸困难、高热及运动障碍，怀孕母猪表现流产、早产、产死胎或畸形胎。

多杀性巴氏杆菌是一种革兰氏阴性菌，临床上可导致猪群发生猪肺疫。猪肺疫多发生于3～10周龄仔猪。健康带菌猪常因某些应激因素，如寒冷、闷热、长途运输、饲料突变等，导致内源性感染。多杀性巴氏杆菌可随病猪和带菌动物的分泌物、排泄物排出，经消化道、呼吸道或损伤的皮肤、黏膜造成传染[7]。猪只感染后，急性病例多表现出血性败血症变化，咽喉部急性肿胀，高度呼吸困难或纤维素性胸膜肺炎症状，慢性病例常表现慢性肺炎或慢性胃肠炎[8]。

为了解我国屠宰生猪弓形虫和多杀性巴氏杆菌感染情况及屠宰场屠宰检疫现状，选择河北、内蒙古、广西、四川和贵州等5 省份开展现场调查和采样检测，以期为完善我国生猪屠宰检疫工作及保障猪肉食品安全提供依据。

1 材料与方法

1.1 现场调查

对河北省承德市和张家口市，内蒙古自治区呼和浩特市和通辽市，广西壮族自治区贵港市和玉林市，贵州省贵阳市和黔东南州及四川省广元市和南充市等5 省份10 个市（州）的部分生猪屠宰场开展现场调查，了解生猪屠宰检疫开展及实验室人员能力建设情况。

1.2 样品采集

采集上述屠宰场健康生猪的肺组织、血清、咽拭子、扁桃体等样品进行弓形虫和多杀性巴氏杆菌检测。共采集样品6 281 份，其中肺组织样品1 371 份、扁桃体1 710 份、咽拭子1 650 份、血清样品1 550 份。

1.3 检测方法

1.3.1 弓形虫采集血清样品，参考文献[9]进行ELISA 检测；采集肺组织样品，参照农业行业标准《动物弓形虫病诊断技术》（NY/T 573—2022）进行PCR 检测。

1.3.2 多杀性巴氏杆菌将咽拭子采集液或扁桃体匀浆液以1:25 转接于多杀性巴氏杆菌增菌培养液中培养，然后对特异性基因KMT1进行PCR扩增，引物序列见表1[10-11]。

表1 多杀性巴氏杆菌特异性鉴定引物

2 结果

2.1 弓形虫感染情况

结果（表2）显示，对采自屠宰生猪的1 550 份血样进行ELISA 检测，发现抗体阳性率为4.0%～26.0%，平均为15.2%（95%CI：7.0%～24.4%）；对1 371 份肺组织样品进行PCR检测，发现病原学阳性率为0～10.6%，平均为7.0%（95%CI：1.7%～11.5%）。

表2 弓形虫实验室检测结果

2.2 多杀性巴氏杆菌感染情况

结果（表3）显示，对采自屠宰生猪的1 650份咽拭子进行PCR 检测，检出1 份阳性；对1 710 份扁桃体样品进行PCR 检测，阳性率为6.4%（95%CI：1.6%～10.5%），其中河北省阳性率最高，为15.9%，其他省份为3.5%～6.1%。

表3 多杀性巴氏杆菌实验室检测结果

3 讨论

研究[12]表明，全世界生猪弓形虫感染血清阳性率约为19%（95%CI：17%～22%），其中欧洲最低，为13%（95%CI：10%～15%），非洲为25%（95%CI：17%～34%），北美洲为25%（95%CI：19%～33%），均最高，亚洲和南美洲的阳性率分别为21%（95%CI：16%～26%）和23%（95%CI：17%～30%）。对我国已发表的44 篇猪群弓形虫感染文献进行数据分析发现，我国猪群弓形虫感染率约为29%，且近十年有逐渐上升趋势[13]。本研究采集了5 个省份的临床健康猪样品进行检测，发现弓形虫抗体阳性率平均为15.2%，低于全国平均水平，这可能与样品种类及屠宰场类型不同等有关。

除对畜牧业造成经济损失外，弓形虫还是重要的食源性人兽共患寄生虫，全球约1/3 人类感染弓形虫[2]。免疫功能健全者感染后多表现无症状或轻微流感样症状，但也有研究[14]发现，免疫功能健全者也偶有被侵犯眼、脑、肺、睾丸等器官，引发肝炎、风疹、皮疹的情况。此外，弓形虫还是影响人类优生优育的主要因素之一，弓形虫感染会显著增加男性不育的风险[15]，导致怀孕女性发生流产、产畸形胎[16]等情况。因此，对弓形虫早期感染进行有效预防和及时确诊，对于保障畜牧业健康发展、食品安全及人类健康有重要意义。目前弓形虫常用血清学检测方法有改良凝集试验（MAT）、间接血凝试验（IHA）和ELISA 等。MAT 被认为是弓形虫诊断的金标准，可用于检测所有动物血清中的弓形虫，已在欧美国家得到广泛应用，但由于成本较高，不适合在我国推广使用[17]。IHA 是早期研究中最常用的检测方法，其操作简单，但特异性和重复性较ELISA 低[18]。ELISA 是近20 年来在我国广泛应用的弓形虫检测方法，其特异性和敏感性高，结果更具说服力，适合批量操作。本研究检测结果显示，弓形虫病原学阳性率为7.0%，明显低于血清学结果。可能是因为PCR 法仅可在样品中含有病原体时才能检出阳性，同时其结果受采样方法、DNA 质量及扩增效率的影响较大。

多杀性巴氏杆菌为条件致病菌，其在猪群中的感染率或携带率研究很少。该菌引起的猪肺疫曾属于生猪屠宰检疫病种，在2023 年新修订的《生猪屠宰检疫规程》[19]中，将该病删除，其对生猪产业威胁不大，在养殖环节，可通过加强饲养管理，配合使用疫苗或药物对多杀性巴氏杆菌感染进行有效预防和治疗。

在屠宰环节实地调研中，发现以下问题：一是驻场官方兽医人数不足。根据农业农村部相关文件要求，大型屠宰企业、中小型屠宰企业、小型生猪屠宰场点配置的官方兽医应分别不少于10 人、5人、2 人。但调查发现，5 省份均存在驻场官方兽医年龄偏大、技术水平偏低、人员数量偏少等现象。二是存在外聘人员协助检疫现象。为弥补官方兽医数量不足，有些地方使用“指定兽医”“辅助兽医”“协检员”，即当地畜牧兽医主管部门聘请第三方协助驻场检疫，这些人员没有官方兽医资质，检疫水平参差不齐、责任心不强，检疫工作容易受到外围因素影响。三是屠宰场实验室检测能力待加强。由于检疫人员专业水平低、硬件设施配备不全、检疫制度执行不严，屠宰场疫病识别能力较弱，多数染疫动物无法确诊，作为不明原因死亡处理，为重大动物疫病传播带来隐患。建议尽快改善屠宰场实验室条件，提高屠宰检疫管理水平，明确屠宰场检疫能力建设标准，加快人工智能技术在屠宰行业的应用，以解决当前官方兽医不足、检疫人员效率低等难题。