抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体对类风湿关节炎的诊断价值

张小云，潘胜男，连建春

南京医科大学附属淮安第一医院检验科，江苏淮安 223021

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以慢性侵蚀性关节炎为主要特征的全身性自身免疫性疾病，致残率高。研究表明，RA患者血液存在多种抗环瓜氨酸肽抗体（anti-cyclic citrullinated peptide antibody，抗CCP抗体）及免疫复合物，在自身免疫损害中发挥重要作用[1-3]。抗CCP抗体和抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体（anti-mutated citrullinated vimentin antibody，抗MCV抗体）是RA最为重要的自身抗体，对RA的诊断和预后评估具有重要意义。文献报道25-羟维生素D[25-hydroxyvitamin D，25（OH）D]在人体内有免疫调节作用，自身免疫性疾病患者体内25（OH）D水平降低且与疾病活动性有关。本研究比较RA患者血清中抗CCP抗体、抗MCV抗体、25（OH）D水平并分析其与相关临床重要指标之间的关系，研究抗CCP抗体、抗MCV抗体和25（OH）D在RA诊断及其活动性判断中的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年8月至2021年11月南京医科大学附属淮安第一医院收治的466例RA患者纳入RA组，其中男103例，女363例，年龄17～87岁，平均（57.61±13.34）岁。所有RA患者均符合美国风湿病学会/欧洲抗风湿病联盟发布的RA诊断标准[2]：至少有一个关节肿痛和滑膜炎，X线检查显示典型的RA骨破坏改变；排除合并其他自身免疫性疾病、严重感染性疾病、器官功能衰竭或恶性肿瘤的患者。将同期住院的非RA的其他自身免疫性疾病及代谢性疾病患者100例纳入非RA组，其中男22例，女78例；年龄18～83岁，平均（55.50±9.50）岁；全身性骨关节炎10例，系统性红斑狼疮50例，干燥综合征10例，强直性脊柱炎10例，痛风20例，均符合国内外的相应诊治标准。选取同期健康体检者100人纳入对照组，其中男22例，女78例；年龄17～78岁，平均（57.44±11.08）岁，均无自身免疫性疾病家族史。本研究经南京医科大学附属淮安第一医院伦理委员会批准（伦理审批号：KY-2022-027-01），所有受试者均签署知情同意书。

1.2 研究方法

分别抽取三组受试者的静脉血约3ml，静置30min后，离心分离血清，–80℃保存待测。魏氏法检测红细胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR），免疫散射比浊法检测C反应蛋白（C-reactive proten，CRP）、补体C3和C4；双抗体夹心法检测抗CCP抗体、抗MCV抗体；电化学发光法检测25（OH）D；严格按照试剂说明书进行操作。

1.3 统计学方法

采用SPSS 23.0软件对结果进行统计学分析。计量资料符合正态分布的采用均数±标准差（±s）表示，组间比较采用单因素方差分析；绘制受试者操作特征曲线分析抗CCP抗体、抗MCV抗体、25（OH）D诊断RA的效能；抗MCV抗体与各临床指标的相关性采用Pearson相关性分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组受试者的血清抗MCV抗体、抗CCP抗体和25（OH）D水平比较

RA组患者的血清抗MCV抗体和抗CCP抗体水平显著高于非RA组和对照组（P<0.05）；RA组患者的血清25（OH）D水平显著低于对照组（P<0.05），见表1。

表1 三组受试者的血清抗MCV抗体、抗CCP抗体和25（OH）D水平比较（±s）

表1 三组受试者的血清抗MCV抗体、抗CCP抗体和25（OH）D水平比较（±s）

注：与RA组比较，*P<0.05

组别 抗MCV抗体（U/ml）抗CCP抗体（RU/ml）25（OH）D（ng/ml）对照组（n=100） 18.08±2.46* 10.44±2.82* 31.89±4.22*非RA组（n=100）19.72±2.63* 15.53±3.52* 15.08±2.98 RA组（n=466） 538.20±46.22 583.60±40.37 15.53±3.94

2.2 抗CCP抗体、抗MCV抗体、25（OH）D及三者联合对RA的诊断效能

抗CCP抗体、抗MCV抗体、25（OH）D诊断RA的曲线下面积（area under the curve，AUC）分别为0.74、0.81、0.75，三项联合诊断RA的AUC为0.90，敏感度为83.70%，特异性为82.40%，见表2。

表2 抗CCP抗体、抗MCV抗体、25（OH）D及三项联合对RA的诊断效能

2.3 RA患者的抗MCV抗体与各临床指标的相关性分析

在RA患者中，抗MCV抗体与ESR、CRP均呈正相关，与补体C3、C4均呈负相关（P<0.05），见表3。

表3 RA患者的抗MCV抗体与各临床指标的相关性分析

3 讨论

RA是一种主要累及全身多个关节，特别是以小关节受累为特征的自身免疫性疾病，随着疾病进展，可出现关节的畸形和活动受限，甚至出现多系统、多器官损害，严重影响患者的生活质量[4-5]。早期诊断RA的血清学指标主要为类风湿因子（rheumatoid factor，RF），RF虽然敏感度高，但特异性差。寻找新型RA相关抗体，有助于提高RA的诊断效率。2000年，人工合成环瓜氨酸肽成功，之后其被逐渐应用于RA的临床诊断。同时，与RF联合运用可大大提高不典型RA诊断的准确率，避免漏诊[6-7]。目前，瓜氨酸相关自身抗体在RA诊断和预后评估中日益成为重要的血清指标。瓜氨酸相关自身抗体家族包括抗MCV抗体、抗核周因子、抗CCP抗体和抗角蛋白抗体等，其可在RA患者的滑液、滑膜细胞和血清中被检测到。波形蛋白是一种细胞骨架蛋白。波形蛋白在凋亡的巨细胞内瓜氨酸化，改变蛋白结构，可进一步增加潜在的抗原决定簇[8]。抗CCP抗体和抗MCV抗体同属抗瓜氨酸化蛋白抗体家族。CCP抗原决定簇可通过人工进行合成，而MCV抗原来源于天然物质；CCP分子相比波形蛋白分子小20倍，因此其抗原决定簇相对减少，仅1～2个潜在决定簇，而波形蛋白有45个可被瓜氨酸化的潜在抗原位点，故抗MCV抗体在临床上具有较高的特异性和敏感度[9]。

近年来，抗MCV抗体作为RA诊断指标的研究越来越多。龚艳会等[10]研究显示，检测RA患者血清抗MCV抗体，其敏感度为71.60%，特异性为93.10%；蔡艳娟等[11]研究显示抗MCV抗体诊断RA的敏感度和特异性分别为89.87%、91.21%，明显高于RF；申旺等[12]研究显示抗CCP抗体和抗MCV抗体诊断RA的敏感度分别为83.80%和91.40%，诊断RF阴性的RA的敏感度分别为65.20%和81.00%。本研究结果与既往研究结果接近。

25（OH）D作为维生素D的主要代谢形式，是评价体内维生素D的最佳指标。研究报道维生素D缺乏与自身免疫性疾病相关，RA患者血清25（OH）D水平明显降低且与疾病活动性相关[13]。维生素D可抑制单核细胞向树突状细胞分化，从而减少可向T细胞提呈抗原的细胞数量，这在RA的发生发展中起重要作用。此外，维生素D抑制B细胞的成熟分化，抑制免疫球蛋白的产生，从而影响调节性免疫应答[14]。然而，也有研究发现部分RA患者血清25（OH）D水平升高。出现RA患者血清25（OH）D水平不一致的原因可能是由研究样本量小及临床症状的异质性引起的[15-17]。本研究结果显示，RA患者的血清25（OH）D水平明显低于健康人群，诊断RA的敏感度为48.80%，特异性为89.30%。

研究发现抗MCV抗体在RA患者中呈高表达，并与多项临床指标呈正相关。Avdeeva等[18]研究发现抗MCV抗体与ESR、CRP呈正相关，抗MCV抗体阳性患者的关节疾病活动度评分高于抗体阴性的患者。Keskin等[19]研究发现RA患者的抗MCV抗体与ESR、CRP呈正相关。刘利君等[20]研究发现抗MCV抗体与ESR、CRP无明显的相关性，但与X线显示的骨质破坏相关。随着X线分期的增高，抗MCV抗体水平呈现出增高趋势，抗MCV抗体水平升高提示RA患者的骨破坏加重。申旺等[12]研究显示抗MCV抗体水平在CRP>50mg/L、有关节腔积液的RA患者中明显升高；在RA缓解组中，抗MCV抗体水平在治疗3个月后明显下降；在RA未缓解组中，治疗前后的抗MCV抗体水平变化不大。但Innala等[21]研究显示，RF、抗CCP抗体和抗MCV抗体均不能够单独反映RA的疾病活动性，但三者联合可有效反映RA的疾病活动性。本研究显示抗MCV抗体与RA疾病活动性指标ESR、CRP均呈正相关，与补体C3、C4均呈负相关。虽然目前关于抗MCV抗体与RA疾病活动性的相关性研究结果不一致，但大部分研究认为二者具有一定的相关性，提示抗MCV抗体检测有利于对RA患者骨破坏情况、炎症反应等临床特征进行判断，为临床医生诊治RA患者提供帮助。

综上，抗CCP抗体、抗MCV抗体和25（OH）D在RA患者中具有较高的敏感度和特异性，有助于RA患者的临床诊断。抗MCV抗体有助于判断疾病的活动性，可作为RA活动性的新型诊断指标。