MEIS1 基因多态性与血液透析维持不宁腿综合征的相关性研究

潘 涛 池学锋 褚滋泓

不宁腿综合征（restless leg syndrome，RLS）属于是较为常见的一种运动感觉异常性病症，常表现为静态休息或夜间睡眠时存在下肢麻木、虫蚀、蚁走等严重不适感[1-2]。研究发现，相比正常健康的群体，血液透析维持患者伴发RLS 的概率较高（6%～75%）[3]。RLS 家族有较高的阳性率，说明RLS 存有遗传易感性，环境因素、易感基因以及其互相作用有关[4]。髓系亲嗜性白血病病毒整合位点1（myelophilic leukemia virus integration site 1，MEIS1）属于同源盒基因中的分枝基因，转录因子的编码为三核苷酸环延伸家族中的一员，对血液透析维持伴RLS 发生、进展均有参与[5]。基于此，本文探讨了MEIS1 基因多态性与血液透析维持伴RLS 的相关性，以期为临床治疗该病提供依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2021 年5 月至2022 年5 月在浙江省温州老年病医院神经内科进行血液透析维持患者70 例，其中血液透析维持伴RLS 组患者40 例，男27 例，女13 例；年龄50～65（60.64±4.56）岁；特发性RLS 组患者30 例，男26 例，女14 例；年龄50～66（60.67±4.59）岁。本研究经过医院伦理委员会审批（批件号WLNY-A-2023001）。

1.2 纳入及排除标准 纳入标准：（1）符合慢性肾脏病（chronic kidney disease，CKD）5 期诊断标准；（2）符合RLS 相关诊断标准：①下肢存在异常感觉；②具有强烈想要活动下肢的欲望；③休息诱发或加重症状；④精神或体力活动可以暂时性部分或完全缓解症状；同时满足以上四条，并确保不是因其他医学行为状况导致的即可确诊为RLS。（3）年龄≥18 岁；（4）行规律血液透析时间≥3 个月；（5）病例资料完整、可靠性、准确较优，能配合研究。排除标准：（1）伴有严重脑、肝及造血系统等原发病症、精神疾病患者；（2）存在帕金森病、肌痛、周围神经病变、妊娠、静脉瘀滞、感染、下肢水肿、类风湿关节炎、心力衰竭、腿部痉挛性病症、体位不适、习惯性拍足等疾患者；（3）临床病历原始资料记录不全者。

1.3 方 法

1.3.1 基因多态性检测 （1）留取所有研究对象肘静脉血3 mL，-20 ℃保存，通过血液基因组提取试剂盒（厂家：武汉纳磁生物科技有限公司；批号NMG0141-16）提取细胞全基因组以此对DNA 进行提取。（2）采用4 对引物特异扩增突变分析方法对MEIS1 基因的rs1820989、rs113851554 基因多态性予以检测。rs1820989 上游引物序列为 5' -ATTGATCCTGTCACCCAGGTAG-3'，下游引物序列为5'-GAAGGGAGACTGTGAAATGGTC-3'；rs113851 554 上游引物序列：5'-AACAAGCACAGTTCTCAGCA AA-3'，下游引物序列：5'-TGATCTAGATGCTTGAGT TGAAA-3'。（3）MEIS1 2 个基因位点PCR 反应体系和条件：其中，PCR 反应引物：由NCBI 的GenBank获取MEIS1 基因序列及其对应的2 个多态性位点。PCR 扩增反应体系：cDNA 模板10 μL，IOuM 上游引物0.1 μL，IOuM 下游引物0.1 μL，H2O 为6.35 μL，25 mM dNTP 为0.8 μL。反应条件：94 ℃预变性3 min，94 ℃变性30 s，56～66 ℃复性30 s，72 ℃退火延长30 s，总延长为72 ℃5 min。（4）使用Prime Premier Version 5.0 软件选取限制性内切酶及酶切产物片段大小，其中，MEIS1 基因rs1820989：限制性内切酶Vsp1 中包含等位基因（C、T），且对应的酶切片大小分别是393bp、202bp+191bp；MEIS1 基因rs113851554：限制性内切酶Csp61 包括等位基因（T、C）及对应的酶切片大小分别为183 bp、105 bp+78 bp。（5）DNA 在特定位点进行PCR 扩增后，先检测经电泳的琼脂糖（厂家：太阳马；规格：100 g/瓶），看是否有目的条带的扩出，以此对PCR 产物的浓度进行判断，以便进行下一步的限制性内切酶酶切反应，酶切反应后在进行电泳检测。

1.3.2 实验室指标 所有受试者抽静空腹脉血4 mL，使用离心机（厂家：Eppendorf；型号：5417R）行离心处理（设半径5 cm，10 min，转速3500 r/min）后，分离清液，-70 ℃置冰箱内储存，待检。由我院实验室检测β2-微球蛋白（β2-microglobulin，β2-MG）、尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、血肌酐（serum creatinine，Scr）、血红蛋白（Hemoglobin，Hb）、血液透析尿素清除指数（clearance time/Urea distribution volume，Kt/V）、甲状旁腺激素（parathyroid hormone，PTH）、钙离子（Calcium ion，Ca）、血清无机磷（phosphorus，P）、C-反应蛋白（C-reactive protein，CRP）、转铁蛋白饱和度（transferrin saturation，TS）水平。

1.3.3 MRI 检查 使用美国GE 1.5T 超导型磁共振扫描，其中T1W1、FLAIR 及T2W2 序列，部分的患者增加DWI 序列额扫描，FOV：2218，矩阵：200180，层厚：5 cm，NEX：2～3 次，层间距为2 mm，对患者施加增强扫描，行冠状位、矢状位及横轴位的扫描。测量共3 次后取平均值，获得最终的RMSI 值、log 值。

1.4 统计学方法 应用SSPS 26.0 统计软件对数据进行统计分析。计量资料用例（%）表示，采用χ2检验或Fisher 确切概率法比较两个位点的等位基因和基因型在各组中的分布差异。采用二元Logistic 回归分析MEIS1 基因rs1820989、rs113851554 多态性2 个位点表达与血液透析维持伴RLS 患者的相关生化指标的相关性，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 血液透析维持伴RLS 患者与特发性RLS 患者之间MEIS1 基因多态性2 个位点表达比较 应用Logistic 回归分析显示，血液透析维持伴RLS 患者与特发性RLS 患者的发生均与MEIS1 基因多态性的2个位点表达有关（P＜0.05）。见表1。

表1 血液透析维持伴RLS 患者与特发性RLS 患者之间MEIS1 基因多态性2 个位点表达比较[例（%）]

2.2 MEIS1 基因rs1820989、rs113851554 多态性2个位点表达与血液透析维持伴RLS 患者的相关生化指标相关性 采用Logistic 回归分析，可得出MEIS1基因rs113851554、rs1820989 多态性与Kt/V、Ca 水平无关（P＞0.05）；与β2-MG、BUN、Scr、Hb、PTH、P、CRP、TS 相关（P＜0.05）。见表2、3。

表2 MEIS1 基因rs1820989 多态性与血液透析维持伴RLS 患者的相关生化指标相关性[例（%）]

表3 MEIS1 基因rs113851554 多态性与血液透析维持伴RLS 患者的相关生化指标相关性[例（%）]

2.3 MEIS1 基因rs1820989、rs113851554 多态性分别与血液透析维持伴RLS 患者的MRI 参数相关性采用Logistic 回归分析，显示MEIS1 基因rs113851554、rs1820989 多态性与MRI 参数的幅度log 值及RMSI值相关（P＜0.05）。见表4、5。

表4 MEIS1 基因rs1820989 多态性与血液透析维持伴RLS 患者MRI 参数的相关性[例（%）]

表5 MEIS1 基因rs113851554 多态性与血液透析维持伴RLS 患者MRI 参数的相关性[例（%）]

2.4 MEIS1 基因s1820989、rs113851554 多态性与特发性RLS 患者的MRI 参数的相关性 采用Logistic回归分析发现，MEIS1 基因s1820989、rs113851554多态性均与MRI 参数RMSI 值、幅度log 值有关（P＜0.05）。见表6、7。

表6 MEIS1 基因rs1820989 多态性与特发性RLS 患者MRI 参数的相关性[例（%）]

表7 MEIS1 基因rs113851554 基因多态性与特发性RLS患者的MRI 参数的相关性[例（%）]

3 讨 论

RLS 属于一种中枢性神经系统病症，可分为症状性及特发性两种，多数特发性患者存在家族史，呈现常染色体显性或隐性遗传[6-7]。MEIS1 是指同源盒基因中三氨基酸环延伸家族的成员，通过和同源框基因（HOX）蛋白及其他的转录因子互相作用进而发挥对细胞活性的调节作用，且MEIS1 基因在多种类的正常造血组织内有着广泛的表达[8-9]。本研究发现，MEIS1 基因rs113851554、rs1820989 多态性与BUN、PTH、Scr、β2-MG、CRP、TS、Hb 表 达 及MRI 参 数RMSI 值、幅度log 值变化相关。表明RLS 患者中CRP、BUN、β2-MG、PTH、Scr、Hb、TS 可通过MEIS1基因进行影响。

血液透析患者会伴随机体中毒素的积聚使得体内肌肉萎缩、贫血等状况，久之引起RLS 疾病[10-11]。有研究对接受血液透析的RLS 患者疾病发生的风险因素进行探究，发现糖尿病史及透析龄较长为主要的影响因素[12-13]。研究指明，老年属于发生RLS 病症的主要保护性因素，而腹膜透析、年龄≥35 岁、高表达的成纤维细胞生长因子-23（FGF-23）、Hb≤9.8 g/dL、TS＜47%、CRP≥1.24 mg/dL、血清铁蛋白（SF）≤700 ng/mL 及P＞5.2 mg/dL 为透析患者发生RLS 疾病的风险因素[14]。本研究显示，血液透析维持伴RLS 与CRP、TS、β2-MG、BUN、Scr、PTH、Hb 以及幅度log 值、RMSI 值与MEIS1 基因s1820989、rs113851554 多态性有着一定的相关性。表明可通过进一步分析血液透析维持伴RLS 患者症状发生的主要因素，为临床对该类患者的病症更好的进行干预。

综上所述，在MEIS1 基因s1820989、rs113851554多态性的基础上分析血液透析维持与RLS 的相关性，探讨MEIS1 基因多态性与患者发生血液透析维持伴RLS 的关联性，可以证实β2-MG、BUN、TS、Scr、Hb、PTH、CRP 的水平变化可作为血液透析维持伴RLS 疾病主要特异及敏感的生物学指标，为分析血液透析维持伴RLS 患者患病的主要病理机制及干预提供了依据，为临床治疗带来契机。