临沂地区健康成人小而密低密度脂蛋白胆固醇参考区间的建立

李公奇，姜艳，张晓卉

（1.临沂市中医医院医学检验科，山东 临沂 276003；2. 临沂市中医医院肛肠科，山东 临沂 276003）

低密度脂蛋白胆固醇（Low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）由一系列密度、体积、理化特征不同的颗粒组成，存在明显的异质性。 小而密低密度脂蛋白胆固醇（Small and low density lipoprotein cholesterol，sdLDL-C）为LDL 亚组分之一，是心脑血管疾病的独立危险因素[1]。 目前临沂地区的sdLDL-C 基线水平不明， 实验室大多直接引用试剂生产厂家提供的生物参考区间，但因地域、种族等原因， 引用的参考区间与本地区居民的实际参考区间之间可能会存在一定差异[2]；另外，不同的检测系统得到的检测结果也存在一定差异。 试剂说明书中明确指出，实验室应该根据实际情况，建立适合本地区人群的参考区间[3]。 因此，不同地区、不同性别、 不同年龄段建立相应的正常参考区间是很有必要的[4]。 本研究旨在初步建立临沂地区健康成人sdLDL-C 的参考区间， 为临沂市的医学实验室提供参考。

1 材料与方法

1.1 标本来源 依据WS/T 402-2012 《临床实验室检验项目参考区间的制定》[5]中对参考个体的筛选标准， 选取2020 年3 月至12 月在我院正常体检成人3 791 名，其中男性1 651 名，年龄18～93 岁，女性2 140 名，年龄18～92 岁。 所有入选者经询问病史、血清学检查、心电图、超声波检查等排除心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病、高血压、高脂蛋白血症、肝脏肾脏疾病，且半年内均未服用降血脂药物。

1.2 仪器与试剂 采用Beckman AU5821 全自动生化分析仪，试剂、校准液、质控品均由浙江东瓯诊断产品有限公司生产，检测系统精密度、正确度均已通过验证。

1.3 方法

1.3.1 样本采集及处理 所有样本均在空腹状态下采集静脉血5 mL，3 000 r/min 离心10 min，2 h 内完成血清sdLDL-C 的检测， 严格按照标准操作程序操作，准确记录数据。

1.3.2 样本分组 依据世界卫生组织对年龄段划分标准将男、 女各分为3 组：18～44 岁为青年组，45～59 岁为中年组，≥60 岁为老年组。 样本共分6 组，每组样本数n≥120 例。

1.3.3 剔除离群值 参考CLSI EP28-A3c 文件[6]，采用Dixon法剔除离群值，离群值判断标准为疑似离群值与相邻值之差（D）与数据全距（R）比值D/R≥1/3，若有离群值应剔除并补充上其他数据。

1.4 统计学处理 采用SPSS 22.0 软件进行统计学分析。 以Kolmogorov-Smirnov法进行正态性检验，样本sdLDL-C 在各组中的分布均为非正态分布，在统计学描述时采用中位数（四分位数）M（P25~P75）表示，两组间比较采用非参数Mann-Whitney U检验， 多组间比较采用非参数Kruskal-Wallis H检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。采用Spearman秩相关进行sdLDL-C 水平与年龄的相关性分析；采用百分位数法建立sdLDL-C 的参考区间。

1.5 参考区间的验证 每组随机选取20 份健康人群血清样本（男女各半），按照sdLDL-C 的标准操作程序进行检测，根据WS/T402-2012《临床实验室检验项目参考区间的制定》[5]的要求，检测结果应有90%落在区间内， 即不超过2 个超出参考区间时验证通过。

2 结果

2.1 与试剂盒提供的参考区间比对 本研究3 791例样本呈非正态分布， 采用百分位数法建立P2.5～P97.5的参考区间，与试剂盒提供的参考区间比较有差异，见表1。

表1 临沂地区健康成人与试剂盒sdLDL-C 参考区间的比对（P2.5～P97.5，mmol/L）

2.2 不同性别、不同年龄组sdLDL-C 分布情况 将3 791 例样本按性别、 年龄划分为6 组进行比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。 男性中年组（45～59岁）sdLDL-C 水平明显高于青年组（18～44 岁）和老年组（≥60 岁），差异有统计学意义（P＜0.05）。 女性中年组（45～59 岁）和老年组（≥60 岁）sdLDL-C 水平明显高于青年组（18～44 岁），差异有统计学意义（P＜0.05）。 青年组（18～44 岁）sdLDL-C 水平男性高于女性，差异有统计学意义（P＜0.05）。 中年组（45～59 岁）、老年组（≥60 岁）sdLDL-C 水平男、女差异无统计学意义（P=0.158，P=0.114），见表2。

表2 不同性别、不同年龄组sdLDL-C 分布[M（P25～P75），mmol/L]

2.3 不同性别sdLDL-C 分布与年龄相关性分析男、 女两组样本与年龄均为非正态分布， 采用Spearman秩相关进行分析， 男性sdLDL-C 水平与年龄无相关性（P＞0.05，r=0.016），女性sdLDL-C 水平与年龄呈显著性正相关(P<0.05，r=0.254)，见表3。

表3 不同性别sdLDL-C 分布与年龄相关性分析

2.4 各组人群sdLDL-C 参考区间的建立， 男性各组间sdLDL-C 水平差异有统计学意义， 需分组建立参考区间；女性中年组（45～59 岁）与老年组（≥60 岁）sdLDL-C 水平差异无统计学意义，合并为一组，女性青年组（18～44 岁）单独一组，见表4。

表4 各组人群sdLDL-C 参考区间（P2.5～P97.5，mmol/L）

2.5 参考区间的验证 以上三组每组各选取20 例健康体检个体， 测定结果均在建立的参考区间范围内，符合参考区间验证的要求，说明本研究建立的参考区间可以用于临床。

3 讨论

小而密低密度脂蛋白胆固醇（sdLDL-C）被美国胆固醇教育计划委员会列入新发现的成人心血管疾病的重要危险因素之一[7-8]。 sdLDL-C 可自由穿过血管壁，极易氧化，并能募集巨噬细胞吞噬被氧化的LDL，形成泡沫细胞，聚集到动脉壁[9]，不易通过受体介导的途径被清除， 导致其蓄积于血管壁，对血管壁造成持续损伤[10-11]，加重心肌梗死病情。 近年来，sdLDL-C 水平的检测在国内外受到普遍的重视， 国内许多医学实验室已逐步实现对sdLDL-C 的检测。 但是，由于地域、种族等差异，sdLDL-C 在人群中的分布很难进行统一[12]，本实验室使用的厂家提供的参考区间源于浙江、 北京和山东地区的360 例健康人群， 其sdLDL-C 分布水平与本地区人群的分布水平差异较大。 因此，非常有必要根据临沂地区人群的sdLDL-C 分布情况来建立相应的参考区间， 为临沂市的医学实验室提供参考。

本研究发现， 临沂地区sdLDL-C 水平在人群中的分布存在性别、年龄的差异，不能直接引用试剂厂家提供的单一参考区间。 男性各年龄段sdLDL-C 水 平 有 显 著 性 差 异，45 ～59 岁 男 性sdLDL-C 水平明显高于其他年龄段， 其sdLDL-C分布与年龄无相关性；45 岁以上女性sdLDL-C 水平明显高于18～44 岁女性， 其sdLDL-C 分布与年龄呈显著性正相关，表明女性随着年龄的增长，其体内sdLDL-C 水平逐渐增高， 这可能和雌性激素的相关保护机制有关， 绝经前女性的保护性脂蛋白水平较高[13]，这就是年龄较大的妇女患心血管疾病的风险明显增加的原因， 与LDL-C 各组分的不同分布密切相关[14]；18～44 岁男性sdLDL-C 水平明显高于同年龄段女性，这与吴燕等[15]的研究结果一致。本研究认为，男性各年龄组间sdLDL-C 水平有显著性差异，需分组建立参考区间；女性中年组、老年组间sdLDL-C 水平无显著性差异， 可合并为一组，女性青年组需单独建立参考区间。 建立本地区sdLDL-C 的生物水平参考区间对个体化医疗发展有重大意义。

本研究中因受青少年（18 岁以下）人群样本采集所限， 未将18 岁以下健康人群列入调查之列，只初步建立了健康成人的sdLDL-C 参考区间，且纳入的3 791 名健康成人在需要根据性别、年龄分组的情况下样本量还不够， 研究存在一定的局限性。 在下一步的研究中，将联合多家地市医院采集样本进行统计分析，并将18 岁以下健康人群纳入研究中，建立大区域性人群的sdLDL-C 参考区间，这样会更具实际应用价值。