lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1在急性淋巴细胞白血病患儿血清中的表达水平及相关性分析

张君利

(商丘市第一人民医院血研室,河南 商丘 476000)

急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)常见异质性肿瘤疾病,多发病于0～9岁儿童,白血病患儿中ALL占比约70%,表现为出血、贫血、白血病细胞浸润全身各器官,威胁患儿健康[1]。免疫表型固有淋巴细胞具有免疫监视、调节作用,可参与淋巴细胞发育、上皮屏障维持及组织损伤修复,在炎症、自身免疫、代谢等相关疾病中发挥重要作用。近期有肿瘤研究表明,长链非编码RNA MAGF-AS1(lncRNA MAFG-AS1)可通过靶向miR-143-3p/AKT2轴促进胃癌进展[2]。但lncRNA MAFG-AS1在ALL的生物学机制尚未明确。长链非编码RNA RPPH1(lncRNA RPPH1)可能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胆囊癌GBC-SD细胞增殖,推测lncRNA RPPH1可能影响ALL患儿的免疫表型[3]。本研究首次分析血清lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1表达水平联合检测对ALL的诊断价值,以期为临床早期诊断ALL提供参考。

1 对象与方法

1.2 方法

1.2.1 病理学参数资料收集 以病历收集、跟踪检查结果等方式进行资料收集,包括性别、年龄、白细胞计数、乳酸脱氢酶(LDH)水平、淋巴结肿大、危险度分层(低危型、中危型、高危型)。ALL危险度分层[5]根据年龄、诱导化疗第15 天、第33 天骨髓缓解情况、外周血细胞总数、t(4∶11)、t(9∶22)易位状况、泼尼松反应状况及融合基因(MLI/AF4与BCR/ABL)检测进行综合分析:①低危型。以下条件均需符合:1岁≤年龄<6岁;第15 天骨髓幼淋+原淋<5%(M1)或5%≤幼淋+原淋≤25%(M2),第33 天骨髓M1;第8 天外周血白血病细胞<10×109L-1;白细胞计数<20×109L-1;7 d泼尼松反应佳。②中危型:情况a:与低危标准相符,但第33 d骨髓幼淋+原淋>25%(M3)。情况b:以下条件均需符合:年龄≥6岁或<1岁;第15天骨髓M1或M2;第33天骨髓M1;第8 天外周血白血病细胞低于10×109L-1;白细胞计数≥20×109L-1;泼尼松反应佳。③高危型:至少符合以下1项标准:第15 天骨髓M3;第33 天骨髓M3或M2;第8天外周血白血病细胞≥10×109L-1;泼尼松反应差;t(4:11)(MLL/AF4)或t(9:22)(BCR/ABL)存在异常。

1.2.2 血清lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1表达水平检测 受检儿童入组后均采集4 mL空腹静脉血,以离心(3 000 r·min-1,10 min),留取上清液;实时荧光定量PCR检测血浆中lncRNA RPPH1表达水平,仪器与试剂选择:赛默飞世尔RNA提取试剂盒(QKG-198)、美国Fermentas公司cDNA反转录试剂盒(K1622)、美国Bio-Rad公司qRT-PCR仪(T100),进行总RNA提取、cDNA反转录后,对lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1进行扩增。引物序列由上海生工生物工程合成:β-actin R:5′-GCGCACCACCATGTACCCT-3′、F:5′-AGGGGCCGGACTCGTCATACT-3′;RPPH1 R:5-TCGCTGGCCGTGAGTCTGT-3′、F:5′ CGAGCTGAGTGCGTCCTGTC-3′。上样体系:10 μL 2xSYBR Premix Ex TaqTM ⅡProbeQPCR Mix(大连宝生物工程,DRR390A),8.0 μL dd H2O,50 ng·μL-1cDNA 1 μL,10 μM F/R(各0.5 μL)。反应条件:95 ℃、120 s;94 ℃、30 s,62 ℃、45 s,45个循环。内参β-actin表达,采用2-ΔΔCt法定量分析lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1表达水平。

1.2.3 观察指标 ①比较3组血清lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1表达水平。②比较不同病理学参数ALL患儿血清lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1表达水平。③分析血清lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1与病理学参数的相关性。④分析血清lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1表达水平联合检测对ALL的预测价值。

2 结果

2.1 3组研究参与者血清lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1表达水平比较 入院时3组血清lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1表达水平比较:ALL组>非恶性血液病组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 3组研究参与者血清lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1表达水平比较

2.2 不同病理学参数ALL患儿血清lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1表达水平比较 ALL患儿血清lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1表达水平与年龄、性别无关,差异无统计学意义(P>0.05)。ALL患儿血清lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1表达水平比较:白细胞计数<50×109L-1患儿低于白细胞计数≥50×109L-1患儿;LDH水平<250 U·L-1患儿低于LDH水平≥250 U·L-1患儿;有淋巴结肿大患儿高于无淋巴结肿大患儿;低危型患儿<中危型患儿<高危型患儿,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同病理学参数ALL患儿血清lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1表达水平比较

2.3 相关性分析 ALL患儿血清lncRNA MAFG-AS1表达水平与白细胞计数、LDH水平、淋巴结肿大、危险度分层呈正相关(P<0.05);ALL患儿血清lncRNA RPPH1表达水平与白细胞计数、LDH水平、淋巴结肿大、危险度分层呈正相关(P<0.05)。见表3。

表3 相关性分析

2.4 ROC曲线分析 以ALL患儿为阳性标本,以非恶性血液病患儿为阴性样本,绘制ROC曲线,结果显示,入院时血清lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1表达水平联合诊断ALL的AUC为0.802,优于各指标单一诊断。见表4。

表4 ROC曲线分析

3 讨论

ALL为造血系统恶性肿瘤疾病,发病率、病死率在儿童恶性肿瘤疾病中居首位;现阶段,随着临床放化疗技术的深入研究,ALL患儿5年生存率已超70%,但因患儿个体差异、后期复发等因素,仍有30%ALL患儿生存质量欠佳[6-7]。因此,ALL早期诊断、预后评估对改善患儿预后具有重要意义。

有研究[8-9]表明,lncRNA可作为内源性RNA,替代微小RNA,竞争性参与肿瘤细胞调节、DNA甲基化、组蛋白修饰等细胞生物学调控过程;lncRNA异常表达可能与恶性肿瘤疾病进展有关。lncRNA RPPH1是RNA成分内切核糖核酸酶,可形成tRNA序列的成熟5＇末端。有研究[10]指出,lncRNA RPPH1在2型糖尿病患者蛋白尿进展中表达上调,对其病情进展具有一定预测价值。lncRNA RPPH1下调通过Gal-3/MEK/ERK通路抑制糖尿病肾病患者系膜细胞的细胞增殖及炎症反应[11]。在非小细胞肺癌中,发现lncRNA RPPH1通过miR-326/WNT2B轴调节癌细胞活力、增殖及侵袭,促进非小细胞肺癌进展[12]。DI等[13]研究表明,lncRNA MAFG-AS1可通过调节STC2通路促进乳腺癌增殖、转移。

本研究结果发现,入院时ALL组血清lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1表达水平较高,非恶性血液病组次之,对照组最低,且不同病理学参数下二者表达水平存在明显差异,可见lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1在ALL、非恶性血液病患儿机体内异常高表达,可能介导非恶性血液病及ALL的病理过程,与肿瘤细胞活性、机体病理状态、临床危险度密切相关,可能影响ALL患儿病情进展。本研究结果显示,ALL患儿血清lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1表达水平与白细胞计数、LDH水平、淋巴结肿大、危险度分层呈正相关(P<0.05),提示ALL患儿血清lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1高表达,可直接作用巨噬、单核细胞,或通过改变RNA表达水平、调控细胞通路,参与血液疾病发生、进展,促进炎症反应,加重ALL患儿疾病进展[14-15]。另外,本研究进一步绘制ROC曲线显示,入院时血清lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1表达水平联合诊断ALL的AUC为0.802,优于各指标单一诊断,对鉴别ALL、非恶性血液病患儿表现出较高诊断效能,对ALL患儿疾病诊断、预后评估具有重要作用。

综上所述,ALL患儿血清lncRNA MAFG-AS1、lncRNA RPPH1表达水平与白细胞计数、LDH水平、淋巴结肿大、危险度分层有关,二者联合检测对ALL具有较高诊断价值。