子痫前期患者孕晚期血清miR-181a、C反应蛋白表达量及临床意义

于海微,林锦芬,黄团明,邓 虹,李 玲,蔡翩翩

(厦门市中医院妇产科,福建 厦门 361009)

子痫前期是妊娠期特有的进展性疾病,随着病情的发展能够影响重要脏器功能,给母儿的健康造成了严重的影响[1]。目前,子痫前期的病因及具体机制尚未清楚,临床普遍认为与孕妇、胎儿、胎盘等多方面因素协同作用所致,例如:胎盘因子进入母体血液循环、子宫-胎盘血管结构异常等,其中家族史、年龄、多胎妊娠、慢性高血压或肾脏病病史是其高危因素[2]。同时,一些研究发现炎症反应、免疫反应损伤也是引起子痫前期的重要原因[3-4]。C反应蛋白(CRP)属于急性时相反应蛋白,当机体存在急性损伤或炎性反应时,其浓度会在短时间内快速升高[5]。微小RNA(miRNA)是一类约22个碱基长度的非编码RNA,在细胞分化、增殖、凋亡等多种生物学进程中具有重要的作用。有学者发现,微小RNA-181a在子痫前期患者胎盘组织中可以出现特异性的增强表达,考虑其参与了子痫前期的病理生理过程[6]。为了完善子痫前期患者的诊疗方案,本研究回顾性分析孕晚期子痫前期患者资料,分析血清miR-181a、CRP表达量及临床意义。

1 资料与方法

1.1一般资料:回顾性分析2020年2月～2023年2月于厦门市中医院就诊的108例孕晚期子痫前期患者资料将其作为研究组,选取同期于本院进行产检的108例正常孕晚期产妇作为对照组。研究组年龄25～40岁,均值(34.50±3.28)岁;孕周28～36 w,均值(33.25±2.08)w;其中初产妇72例,经产妇36例。对照组年龄24～42岁,均值(34.55±3.25)岁;孕周28～36 w,均值(33.30±2.25)w;其中初产妇70例,经产妇38例。两组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。纳入标准:子痫前期符合《妇产科学》第9版[7]中的诊断标准;单胎妊娠;孕周≥28 w;患者具有良好的沟通能力;本院建档且资料完整。排除标准:存在其他妊娠合并症或并发症;合并急性或慢性感染性疾病;有药物滥用史或酗酒史;胎儿畸形和双胎;免疫缺陷;恶性肿瘤;近1个月使用过抗凝药;凝血功能障碍;患有精神障碍。

1.2方法:两组受检对象均接受孕晚期血清miR-181a与CRP检测。采集受检者空腹状态下的静脉血标本3～5 ml放置在抗凝管中,使用低速离心机(型号:TD6M;由湖南沪康离心机有限公司生产)进行离心10 min,速度为3 000 r/min,半径为10 cm,血清分离后取上清液,放置在-80℃的冰箱内存储。①CRP:使用酶联免疫吸附法(ELISA)对CRP进行检测,由上海康朗生物科技有限公司提供试剂盒。②miR-181a:提取血清300 μl,加入1 ml Trizol试剂,之后提取总RNA,对其纯度与浓度进行检测,逆转录RNA为cDNA,使用cDNA作为模板,通过实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对miR-181a的表达量进行检测。miR-181a下游引物序列5′-CATACTGCCCCTCCCGTTTG-3′,上游引物序列5′-TGGGATTCGATCAACAGAGAGT-3′;内参U6下游引物序列5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′,上游引物序列5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′。反应条件:15min、95℃预变性、20s、94℃变性、34s、60℃退火,循环频次为40次,各标本有平行反应复孔3个,以U6作为对照,使用“2-ΔΔCt”法对miR-181a表达量进行计算。

1.3观察指标:①比较两组受检者的血清miR-181a与CRP水平。②比较研究组中轻度子痫前期患者(67例)与重度子痫前期患者(41例)的血清miR-181a与CRP水平。③根据妊娠结局分析研究组中妊娠结局良好患者(78例)与妊娠结局不良(30例)患者的血清miR-181a与CRP水平。不良妊娠结局包括:急性胎儿宫内窘迫、产后出血、胎盘早剥、胎死宫内、早产、凝血功能障碍、新生儿窒息等任意一种。④观察miR-181a、CRP联合检测与单独检测使用受试者工作特征(ROC)曲线对子痫前期不良妊娠结局的预测效能,即敏感度与特异度进行分析。

1.4统计学分析:采用SPSS23.0软件对研究数据进行统计与分析行t及χ2检验。

2 结果

2.1两组miR-181a与CRP水平对比:研究组miR-181a水平[(6.20±1.00)]与CRP水平[(43.52±6.562)mg/L]均高于对照组[(1.03±0.38)、(4.20±1.03)mg/L],差异有统计学意义(t=50.224、61.537,P<0.05)。

2.2轻度与重度子痫前期患者血清miR-181a、CRP水平对比:重度子痫前期患者的血清miR-181a水平[(7.18±1.30)]与CRP水平[(51.98±12.87)mg.L],均高于轻度子痫前期患者[(6.50±1.12)、(39.02±11.06)mg/L],差异有统计学意义(t=3.155、5.551,P<0.05)。

2.3妊娠结局良好与妊娠结局不良患者的血清miR-181a、CRP水平对比:妊娠结局不良患者的血清miR-181a水平[(7.35±1.36)]、CRP水平[(52.65±10.67)mg/L]均高于妊娠结局良好患者[(5.45±1.27)、(40.80±8.55)mg/L],差异有统计学意义(t=6.828、6.009,P<0.05)。

2.4miR-181a、CRP联合检测与单独检测对于子痫前期不良妊娠结局的预测效能:ROC曲线分析发现,miR-181a与CRP联合检测对于子痫前期不良妊娠结局的预测敏感度、特异度高于单独CRP、miR-181a检测,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 miR-181a、CRP联合检测与单独检测对于子痫前期不良妊娠结局的预测效能

3 讨论

子痫前期是一种多因素、多通路、多机体致病的疾病,其发病率约为4%～6%,能够导致心、肾、肝、肺、脑、内分泌、血液系统及子宫胎盘血流灌注异常,不仅直接危害母儿的健康,且是孕产妇与胎儿死亡的重要原因[7-8]。因此,尽早且准确的预测子痫前期发生、进展以及不良妊娠结局情况,对于保障母儿预后具有积极的影响。

CRP属于急性时相反应蛋白,主要由肝脏合成,对于各种急慢性炎性反应具有较高的敏感性[9]。正常情况下,CRP在体内的含量极微,而机体存在炎性损伤、感染等问题时,活化的巨噬细胞分泌细胞因子诱导并刺激肝细胞,导致CRP水平快速升高,其生物学特性表现为激活与识别某种影响防御机制与炎症的物质[10]。有研究指出,妊娠高血压患者的血清CRP水平高于正常孕产妇,并与血压指标呈正相关性[11]。CRP可以提高吞噬细胞的作用,影响凋亡细胞清除,使凋亡指数上升[12]。同时,CRP升高后可以促进其他炎性因子形成,损伤血管内皮,干扰舒血管物质的释放,导致子痫前期的形成与加重[13]。miRNA是一类不编码蛋白、缺乏开放阅读框的小分子RNA,miRNA与其靶基因序列间的低互补性可以使其与多个靶基因互相作用,所以在诸多生物学过程与通路中发挥着多样性的复合效应。有研究采用荧光实时定量PCR技术对子痫前期患者的157个miRNA表达进行检测,发现其miRNA与正常妊娠者存在明显差异[14]。miR-181a在细胞的分化与生长中发挥着重要的作用,特别是在自身免疫性疾病与恶性肿瘤方面的异常表达能够引起细胞功能异常。

现阶段,临床关于miR-181a在孕晚期子痫前期患者中的应用报道甚少,本研究结果说明miR-181a、CRP表达与孕晚期子痫前期患者病情进展、预后不良有关,考虑原因如下:全身小动脉痉挛及内皮细胞功能障碍是子痫前期患者的基本生理病理变化,而胎盘在供血不足的情况下能够刺激机体释放促炎因子CRP,CRP升高后损伤血管内皮细胞,促进其释放的舒血管物质减少,进一步升高了血压水平。同时,CRP能够促进血管平滑肌细胞迁移与增生,增加血管重构阻力。miR-181a通过多个靶向基因参与了滋养细胞侵袭、血管内皮损伤等病理过程,干扰滋养细胞合成,导致胎盘血流动力学发生变化,继而加重子痫前期进展。因此,临床可以对子痫前期患者进行miR-181a、CRP水平动态检测,一旦发现水平异常或持续性升高应警惕病情加重,及时诊疗与治疗,以便保障妊娠结局。此外,ROC曲线分析结果说明miR-181a、CRP联合检测可以弥补单一检测的不足,提高诊断效能,且血清学标本获取简便,利于患者接受,有望成为子痫前期患者病情预测、临床诊疗的新靶点与标志物。需要注意的是,由于本次研究为回顾性分析,结果可能存在偏倚,加之样本量有限,所以血清miR-181a、CRP检测对于子痫前期患者的临床应用价值仍需要进一步探讨与论证。综上所述,miR-181a、CRP表达与孕晚期子痫前期患者病情进展、预后不良有关,联合检测能够提高不良妊娠结局的预测效能,具有一定的临床参考价值。