M2型丙酮酸激酶对乳腺癌评价标准研究

刘云龙 陈绍森 朱文斌 段文博 李月 岳丽玲

摘 要：目的：研究M2型丙酮酸激酶（PKM2）及富含脯氨酸蛋白11（PRR11）在乳腺癌病灶组织中的表达情况及预后分析。方法：本研究选择自2020年10月至2021年9月間于我院住院治疗并确诊为乳腺癌的病理标本共计96例，确诊为乳腺癌，分析病例癌组织内及癌组织周围的PKM2及PRR11的阳性表达情况，记录病理标本对应的患者肿瘤大小、TNM分期及远端转移情况。结果：乳腺癌组织中PKM2的阳性表达率为91.67%（88/96），具有统计学意义（P<0.05）；乳腺癌组织中PRR11的阳性表达率为82.29%（79/96），具有统计学意义（P<0.05）；PKM2、PRR11水平与肿瘤大小、TNM分期及远处转移情况间具有强相关性。结论：PKM2及PRR11在乳腺癌中均呈现高表达趋势，与乳腺癌的发展进程存在不同程度的相关性。

关键词：PKM2，PRR11，乳腺癌，远处转移，TNM分期，免疫组化

DOI编码：10.3969/j.issn.1002-5944.2023.04.060

基金项目：本文受齐齐哈尔市科技攻关项目“两种M2型丙酮酸激酶（PKM2）激活剂抗乳腺癌的作用研究”（项目编号：LHYD-2021104）资助。

Study on Evaluation Criteria of M2 Pyruvate Kinase for Breast Cancer

LIU Yun-long CHEN Shao-sen ZHU Wen-bin DUAN Wen-bo LI Yue YUE Li-ling

（The Second Affi liated Hospital of Qiqihar Medical College）

Abstract： Objective： To investigate the expression and prognosis of M2 pyruvate kinase （PKM2） and proline-rich protein 11 （PRR11） in breast cancer lesions. Methods： This study chose the pathological specimens of a total of 96 patients diagnosed with breast cancer treated in the hospital from October 2020 to September 2021， analyzed the positive expression of PKM2 and PRR11 within and around cancer tissues， record the tumor size， TNM staging and distant metastasis of pathological specimens of patients. Results： The positive expression rate of PKM2 in breast cancer tissues was 91.67% （88/96）， which was statistically signifi cant （P<0.05）. The positive expression rate of PRR11 in breast cancer tissues was 82.29% （79/96）， which was statistically signifi cant （P<0.05）. PKM2 and PRR11 levels were strongly correlated with tumor size， TNM stage and distant metastasis. Conclusion： PKM2 and PRR11 are highly expressed in breast cancer， which are correlated with the development of breast cancer to varying degrees.

Keywords： PKM2， PRR11， breast cancer， distant metastasis， TNM staging， immunohistochemical

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，发病率占全身各种恶性肿瘤的7%～10%，已成为威胁妇女健康的主要病因[1]。PKM2是癌症组织中的一种特异性酶，在很多肿瘤中存在高度表达情况，是有氧糖酵解中的一种关键酶，PRR11是位于染色体17q11上的新型基因，有标准研究表明[2]其与细胞增殖、细胞癌变存在联系。本研究旨在对以上两种物质同乳腺癌的发生、发展间存在的联系进行标准研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究选择自2020年10月至2021年9月间于我院住院治疗并确诊为乳腺癌的病理标本共计96例，入组的患者均行手术病灶切除或穿刺活检确诊为乳腺癌。其中男患者1人，女患者95人，年龄分布在29～70岁之间，平均年龄（42.46±17.71）岁。所有参与本实验的入组患者或家属均已签署知情同意书，且本研究已通过我院伦理委员会批准同意开展。

1.2 入组标准和排除标准

患者均经手术后病理或穿刺活检确诊为乳腺癌，入组病理对应患者均未进行靶向治疗或放化疗，并于病灶内及病灶周围边缘5cm处也进行病灶采集，进行病理切片。

1.3 仪器与设备

PKM2抗体及PRR11抗体均由美国 Santa Cruz公司供应。免疫组织化学试剂盒均由北京上海梵态生物科技有限公司提供。二氨基联苯胺试剂由上海易恩化学技术有限公司提供。实验用显微镜是由日本奥林巴斯公司生产的CX33型病理科用显微镜。

1.4 方法

病理组织进行切片，以5μm厚度进行连续切片，将切片浸泡于50mmol/L的乙二胺四乙酸溶液中，冷却后水洗至室温，滴注山羊血清封闭液，置于室温中20min，将切片上多余液体甩掉，加入PKM2多克隆抗体或PRR11多克隆抗体，置于4℃环境中过夜，而后加入SP9000生物素标记，置于37℃环境中45min，并加入二氨基联苯胺显色40s，再用苏木精复染，用乙醇脱水后进行中性封固。

1.5 观察指标

选择两名副高级及以上职称病理科医生对病理切片进行双盲法审阅，注意观察时避开肿瘤边界及肿瘤坏死区域，PKM2及PRR11均以细胞核或细胞质中发现棕黄色颗粒则记为该指标下的阳性细胞。判断表达应用半定量积分法，根据染色的强度及阳性细胞比例将半定量积分记为0～3分。其中评定标准为：着色深记为3分；中等着色记为2分；轻度着色记为1分；未着色记为0分。阳性细胞比例为随机视野中选择100个细胞进行计数，若计数阳性细胞数比例≥50%为3分；25%～50%记2分；6%～24%记1分；≤5%记0分。将以上两组得分相加，总分0～1分为阴性（-）；2分为弱阳性（+）；2～4分为中阳性（++）；5～6分为强阳性（+++）。

1.6 统计学分析

2 结 果

2.1 肿瘤及周围组织阳性表达情况

乳腺癌组织中PKM2的阳性表达率为91.67%（88/96）、癌旁组织中PKM2的阳性表达率为51.04%（49/96），差异具有统计学意义（P<0.05）；乳腺癌组织中PRR11的阳性表达率为82.29%（79/96）、癌旁组织中PRR11的阳性表达率为48.96%（47/96），差异具有统计学意义（P<0.05）。具体情况如表1所示。

2.2 PKM2及PRR11同乳腺癌发展的相关性

PKM2水平同对应患者的肿瘤大小、TNM分期及远处转移情况间具有强相关性（r=4.964；6.898；5.031，P=0.002；0.000；0.001）；PRR11水平同对应患者的TNM分期及远处转移情况间具有强相关性（r=7.121；4.993，P=0.000；0.002），同肿瘤大小间无明显相关性（r=0.112，P=0.863）。

3 讨 论

乳腺癌是由乳房组织发展成的癌症。乳房是由皮肤、纤维组织、乳腺腺体和脂肪组成的，乳腺癌是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤。有研究人员证实高浓度的葡萄糖可促使PKM2赖氨酸305位点乙酰化，PKM2 K305乙酰化使得PKM2酶活性受到抑制，同时促使PKM2与伴侣分子HSC70结合，经分子伴侣介导的自噬（CMA）在溶酶体中被降解。此外在进一步的试验中，研究人员通过异位表达PKM2 K305Q突变体的方式证实PKM2乙酰化修饰可促使肿瘤细胞中糖酵解中间产物累积，从而促进细胞增殖及肿瘤生长[3]。

PRR11是一种新型的可以调节S期及控制细胞有丝分裂过程的细胞周期相关基因。有许多的研究证实了PRR11蛋白对肿瘤的发生、发展、预后及生物细胞存活周期有着一定的指导作用。因此PRR11是一个新的潜在的癌症诊断及治疗靶点，因此对于PRR11的研究，对肿瘤诊断、预防及治疗有重要意义，值得对其进行关注研究。有研究得出PRR11基因在多种癌症中表达异常，这种异常表达可能与癌症的发生和发展存在着一定的关系[4]。PRR11癌基因在肺癌、胰腺癌和胃癌中高表达，且与疾病进展存在相关性。但对于PRR11同乳腺癌间的关系目前尚无研究，为本研究提供了一个新的思路[5]。

本研究选择了PKM2及PRR11两种指标，分析其在乳腺癌病灶组织中的表达情況，以及两种指标同乳腺癌患者预后间的关系情况。得出了PKM2及PRR11在肿瘤中均存在高表达的情况，且同肿瘤的进展间存在着一定的联系，并具有一定的相关性。因此本研究结果提示我们，对于PKM2及PRR11指标的检测可以有效地发现乳腺癌的存在，并对乳腺癌的后续治疗提供一定的指导作用，为临床提供一定的依据，同时给患者提供了更大的生存机会。因此本方法值得于临床中推广使用。但本研究仍有一些不足之处，如入组患者较少等，我们还会在日后的研究中继续完善，使得统计数据更具说服力。

参考文献

[1]郭一萌，杨静，严虹霞，等.二甲双胍对乳腺癌患者预后影响的Meta分析[J].肿瘤研究与临床，2019，31（1）：41-46.

[2]宋霖，张宁.PXDN表达水平对乳腺癌患者术后远期生存及预后的价值[J].临床血液学杂志，2018，31（10）：772-776.

[3]朱志阳，陈真伟，陈甸甸，等.M2型丙酮酸激酶和富含脯氨酸蛋白11在乳腺癌组织的表达及其临床意义[J].中华实验外科杂志，2020，37（4）：728-730.

[4]贺帅，刘欣媛，马俊兵，等.乳腺癌中SIRT5、PKM2及HK2的表达及其意义[J].临床与实验病理学杂志，2020，36（5）：520-523.

[5]王峰，李梅，朱建伟，等.SIRT3在乳腺癌中的表达与临床预后的相关性分析[J].东南大学学报（医学版），2017，36（4）：524-529.

作者简介

刘云龙，硕士，副主任医师，副教授，主要从事肿瘤外科、普胸外科常见疾病的诊断、治疗及研究。

（责任编辑：刘宪银）