复方氨酚烷胺片（胶囊）中主成分含量均匀度测定*

梁 静，李 超，黄 俊，罗立骏，徐 登，冯 琴，程辉跃

（重庆市食品药品检验检测研究院·国家药品监督管理局麻醉精神药品质量监测重点实验室，重庆 401121）

复方氨酚烷胺片（胶囊）属解热镇痛类非处方［1-6］，规格均为每片（粒）含对乙酰氨基酚250 mg、金刚烷胺100 mg、咖啡因15 mg、马来酸氯苯那敏2 mg、人工牛黄10 mg。复方氨酚烷胺片（胶囊）历史久远，企业留存的研发及申报资料都较少，且不完整，制剂研发、标准建立的相关资料已无从溯源。复方氨酚烷胺片的现行质量标准为《国家药品标准·化学药品地方标准上升国家标准（第十六册）》（WS1- XG - 015 - 2002）［7］，复方氨酚烷胺胶囊的现行质量标准为《卫生部药品标准·化学药品（第五册》（WS-HY<05> -01）［8］，但自注册以来从未进行过改进和变更，多个关键质控项目缺失，已无法对该药品的质量进行有效控制。根据2020年版《中国药典（四部）》通则0941［9］规定，“每一个单剂标示量小于25 mg 或主药量小于每一个单剂重量25%者”，应检查含量均匀度。复方氨酚烷胺片（胶囊）的咖啡因和马来酸氯苯那敏的标示含量分别为15 mg和2 mg，故需建立含量均匀度的测定方法。本研究中采用高效液相色谱（HPLC）法对咖啡因和马来酸氯苯那敏进行含量均匀度检查，以更好地控制和评价各企业产品的混合均匀度及主成分含量均匀度。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260 型高效液相色谱仪（美国Agilent 公司），配有紫外检测器；Waters 2695 型高效液相色谱仪（美国Waters 公司），配有光电二极管列阵检测器（PDA）；XSE204 型电子天平（精度为0.1 mg），Quintix 224 - 1CN 型电子天平（精度为0.01 mg），均购自瑞士Mettler Toledo 公司；SB25 - 12DT 型新芝超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司，功率为600 W，频率为50 kHz）。

1.2 试药

复方氨酚烷胺片源于44 家生产企业，共106 批样品，其中1 批（批号为X201002）用于方法学考察；复方氨酚烷胺胶囊源于52 家生产企业，共135 批样品，其中1批（批号为20210622）用于方法学考察；对乙酰氨基酚对照品（批号为100018 - 202312，含量为100%），咖啡因对照品（批号为171215-202013，含量为99.7%），马来酸氯苯那敏对照品（批号为100047-202008，含量为99.7%），均购自中国食品药品检定研究院；甲醇为色谱纯，水为二次纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件［10-14］与系统适用性试验

色谱柱：YMC - C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流动相：0.1 mol / L 磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢铵11.5 g，加1 000 mL 水使溶解，用磷酸调pH 至3.0 ±0.05）- 甲醇（60∶40，V/V）；流速：1.0 mL/ min；检测波长：275 nm（对乙酰氨基酚），225 nm（咖啡因、马来酸氯苯那敏）；柱温：35 ℃；进样量：5 μL（对乙酰氨基酚），20 μL（咖啡因、马来酸氯苯那敏）。在此色谱条件下，各组分色谱峰的分离度均符合要求，理论板数按氯苯那敏峰计不低于5 000，对照品溶液各主峰峰面积的RSD均不超过1%。色谱图见图1。

1.马来酸 2.对乙酰氨基酚 3.咖啡因 4.氯苯那敏图1 高效液相色谱图1.Maleic acid 2.Acetaminophen 3.Caffeine 4.ChlorphenamineFig.1 HPLC chromatogram

2.2 溶液制备

供试品溶液：取样品1 片（粒），置200 mL 容量瓶中，加甲醇- 水溶液（40∶60，V/V）适量，超声（功率为600 W，频率为50 kHz）使溶解，再用甲醇-水溶液（40∶60，V/V）稀释并定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

对照品溶液：取对乙酰氨基酚对照品适量，精密称定，置100 mL 容量瓶中，加甲醇-水溶液（40∶60，V/V）溶解并稀释成每1 mL 约含对乙酰氨基酚0.125 mg 的对乙酰氨基酚对照品溶液；取马来酸氯苯那敏对照品适量，精密称定，置50 mL 容量瓶中，加甲醇- 水溶液（40∶60，V/V）适量，超声使溶解并定容，摇匀，作为马来酸氯苯那敏对照品贮备液；取咖啡因对照品适量，精密称定，置250 mL容量瓶中，加甲醇-水溶液（40∶60，V/V）适量，超声使溶解，再精密加入马来酸氯苯那敏对照品贮备液10 mL，用甲醇-水溶液（40∶60，V/V）稀释成每1 mL 约含咖啡因75 μg、马来酸氯苯那敏10 μg 的咖啡因和马来酸氯苯那敏对照品溶液；取对乙酰氨基酚、咖啡因与马来酸氯苯那敏对照品各适量，精密称定，置100 mL 容量瓶中，加甲醇- 水溶液（40∶60，V/V）溶解并稀释成每1 mL 约含对乙酰氨基酚1.25 mg、咖啡因75 μg、马来酸氯苯那敏10 μg的混合对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察：分别吸取对乙酰氨基酚、咖啡因和马来酸氯苯那敏对照品溶液5，10，15，20，25，30 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以进样量（X，μg）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归。结果见表1。

表1 方法学考察结果Tab.1 Results of the methodological investigation

重复性试验：取同一批（片剂企业A，批号为X201002；胶囊剂企业M，批号为20210622）样品6 份，精密称定，按2.2 项下方法制备供试品溶液，按2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并计算含量。结果见表1，表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一批（片剂企业A，批号为X201002；胶囊剂企业M，批号为20210622）样品适量，按2.2项下方法制备供试品溶液，分别于常温下放置0，2，4，8，16，24 h 时按2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果见表1，表明供试品溶液在常温下24 h 内稳定性良好。

加样回收试验：取样品（片剂企业A，批号为X201002；胶囊剂企业M，批号为20210622）适量，平行9 份，分别精密加入咖啡因和马来酸氯苯那敏对照品溶液8，10，12 mL，各3 份，按2.2 项下方法制备供试品溶液，按2.1 项下色谱条件进样测定，并计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量均匀度测定

片剂：根据2020 年版《中国药典（四部）》通则0941［9］规定，若A+2.2S≤15.0，则供试品的含量均匀度符合规定；若A+S>15.0，则供试品的含量均匀度不符合规定；若A+ 2.2S> 15.0 且A+S≤15.0，则另取20 片（粒）复试。随机抽取每个生产企业的1～6 批样品进行含量均匀度考察，共106 批，含量均匀度测定色谱图见图2。其中，需复试的样品8 批，包括咖啡因含量均匀度需复试1批，马来酸氯苯那敏含量均匀度需复试6批，2 个主成分均需复试1 批，涉及7 家生产企业；不合格样品8 批（即A+S> 15.0），其中咖啡因和马来酸氯苯那敏含量均匀度不合格各4 批，涉及4 家生产企业。需复试的样品批数不计入合格率计算，故片剂含量均匀度的合格率为91.84%（90/98）。详见表2。

表2 复方氨酚烷胺片（胶囊）需复试批数和不合格批数Tab.2 Number of batches of Compound Paracetamol and Amantadine Hydrochloride Tablets（Capsules）need to be retested and unqualified

1.马来酸（225 nm） 2.对乙酰氨基酚（275 nm） 3.咖啡因（225 nm） 4.氯苯那敏（225 nm）A - B.供试品溶液 C - D.对照品溶液图2 含量均匀度测定高效液相色谱图1.Maleic acid（225 nm） 2.Acetaminophen（275 nm） 3.Caffeine（225 nm） 4.Chlorphenamine（225 nm）A - B.Test solution C - D.Reference solutionFig.2 HPLC chromatograms of the content uniformity

胶囊剂：随机抽取每个生产企业的1～6 批样品进行含量均匀度考察，共考察135 批，含量均匀度测定色谱图见图2。需复试的样品18 批，其中咖啡因含量均匀度需复试16批，马来酸氯苯那敏含量均匀度需复试1批，2 个主成分均需复试1 批，涉及13 家生产企业；不合格样品6 批（即A+S> 15.0），其中咖啡因和马来酸氯苯那敏含量均匀度不合格各3 批，涉及6 家生产企业。需复试的样品批数不计入合格率计算，故胶囊剂含量均匀度的合格率为94.87%（111/117）。

2.5 重量/装量差异与含量均匀度的关系

根据2.4 项下测定结果，对S值较大的片剂生产企业C、胶囊剂生产企业E 和胶囊剂生产企业K 产品的重量/装量差异与含量均匀度的关系进行考察，详见图3。片剂生产企业C、胶囊生产企业E的产品每片（粒）中3种主成分含量与片（粒）重曲线高度一致，表明主成分在制粒时混合均匀，但由于片剂生产企业C的产品重量的RSD为3.31%，胶囊生产企业E 的产品装量的RSD为2.25%，导致含量均匀度不合格；胶囊生产企业K 的产品装量的RSD为1.35%，但仅有对乙酰氨基酚的含量与装量差异呈正相关。

A1，B1，C1.对乙酰氨基酚 A2，B2，C2.咖啡因 A3，B3，C3.马来酸氯苯那敏图3 重量/装量差异与含量均匀度的关系A1，B1，C1.Acetaminophen A2，B2，C2.Caffeine A3，B3，C3.Chlorphenamine MaleateFig.3 Relationship between weight difference and content uniformity

3 讨论

3.1 含量测定方法建立

采用高效液相色谱-紫外检测法对对乙酰氨基酚、咖啡因和马来酸氯苯那敏3个主成分进行分离和含量测定，其难点在于对乙酰氨基酚每片（粒）含量250 mg，而马来酸氯苯那敏每片（粒）含量仅2 mg，上述2个主成分含量差异达125倍。因此，考虑在同一液相色谱系统中，采用不同的进样量，以保证2种主成分定量的准确性。根据PDA 图谱扫描结果，咖啡因的最大吸收波长为275 nm，马来酸氯苯那敏的最大吸收波长为228 nm，由于马来酸氯苯那敏的含量低，氯苯那敏的峰面积较小。因此，确定咖啡因和马来酸氯苯那敏的检测波长为225 nm。

此外，在现行法定标准中，流动相采用等度洗脱方式，导致氯苯那敏的保留时间较长，往往超过50 min 才出峰，且氯苯那敏的含量极低，导致氯苯那敏峰形不够尖锐，理论板数较差，影响定量的准确性。采用加大有机相的比例，氯苯那敏峰的出峰时间稳定在16 min 左右，提高了氯苯那敏峰的理论板数和定量的准确性。故选择2.1项下流动相等度洗脱程序。

3.2 含量均匀度测定结果评价

复方氨酚烷胺片：片剂含量均匀度合格率为91.84%，106 批中有8 批产品需复试，有8 批产品不合格。咖啡因含量均匀度不合格的有4 批，来自片剂生产企业A 的3 批和片剂生产企业E 的1 批，其咖啡因的S值不大，但A值太大，导致A+S>15.0。片剂生产企业C 产品的含量均匀度较差，马来酸氯苯那敏含量均匀度不合格。分析原因，生产企业C 产品的A值和S值均较大，且A值与含量测定结果差异较大。片剂生产企业G产品中马来酸氯苯那敏的含量均匀度极差，6 批产品中马来酸氯苯那敏含量均匀度有3 批不符合规定；1 批S值为5.80%，其余5 批S值最大为1.66%。表明该生产企业混合制粒的工艺没有问题，结合其产品的含量测定结果，认为生产企业G 对马来酸氯苯那敏的投料量未严格按处方和标准作业程序进行投料，导致批间差异较大。

复方氨酚烷胺胶囊：胶囊剂含量均匀度合格率为94.87%，135 批中有18 批产品需复试，有6 批产品不合格。咖啡因含量均匀度不合格的有3批，来自胶囊生产企业D，B，F，企业D 和B 是由于咖啡因含量均匀度A值过大而导致不合格；而胶囊生产企业F产品的含量均匀度较差，1批产品咖啡因含量均匀度不合格，马来酸氯苯那敏含量均匀度需复试，含量均匀度A值和S值均较大，导致产品的含量均匀较差。胶囊生产企业K产品的含量均匀度极差，1 批产品的咖啡因和马来酸氯苯那敏含量均匀度均需复试，2种主成分的A值仅为1.41%和0.06%，表明主药投料量合格；但S值过大，分别为9.41%和14.14%。表明混合制粒时未混匀，导致产品的含量均匀度极差。胶囊生产企业O产品的马来酸氯苯那敏含量高达142%，这与含量测定结果一致，其规格为同品种其他产品标识量的1/2，对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺和咖啡因含量均符合规定，马来酸氯苯那敏的含量却远高于规定限度，表明未严格按处方量投料生产。胶囊剂中咖啡因含量均匀度需复试的批数较多，涉及12家企业的16批产品，除了胶囊生产企业K的1批产品外，其余均为咖啡因含量过高导致含量均匀度超出规定限度，表明胶囊剂中咖啡因过量投料的现象较片剂普遍。

3.3 含量均匀度不符合规定的原因分析

考察S值较大的片剂生产企业C、胶囊生产企业E和胶囊生产企业K 产品的重量/装量差异和含量均匀度的关系，结果显示，由于对乙酰氨基酚每片标示量为250 mg，占每片（粒）制剂总质量的50%～70%，每片（粒）制剂中对乙酰氨基酚的含量与每片（粒）质量直接相关，故控制好重量/装量差异的均匀性，可保证对乙酰氨基酚每片（粒）含量的均匀性。片剂生产企业C和胶囊生产企业E 的产品由于重量/装量差异较大，导致含量均匀度不合格，提示生产企业C和E应注意对压片工艺的改进和提高。胶囊生产企业K的产品咖啡因和马来酸氯苯那敏的含量和胶囊的装量差异无关联，表明混合制粒时未充分混匀。提示生产企业应重视在湿法制粒时制软材的混合工艺，改进工艺参数，积极查找原因，提高上述3种主成分的混合均匀性。

3.4 小结

复方氨酚烷胺片（胶囊）中5 种主成分的混合顺序是保证本品种含量均匀度的关键。建议企业根据5种主成分的处方量，按从小到大进行逐级投料和混合，且保证足够的混合时间，以保证每种主成分混合的均匀性。复方氨酚烷胺片（胶囊）的现行质量标准中，由于缺乏咖啡因和马来酸氯苯那敏2 种主成分含量及含量均匀度的控制，部分生产企业对这2种成分的投料未严格按标准进行，批间差异较大，含量均匀度较差。建议生产企业应严格管控咖啡因和马来酸氯苯那敏的投料情况；同时，应在质量标准中增订咖啡因和马来酸氯苯那敏2种主成分的含量及含量均匀度控制项目。