山东济南地区健康成人血清超氧化物歧化酶参考区间的初步建立与验证

曹修娥，张倡誌，鲍国林，赵士玉，刘义庆（山东第一医科大学附属省立医院临床医学检验部，济南 250021）

检验项目的参考区间是诊断疾病、治疗监测、判断预后和健康评估的重要依据，受性别、年龄、遗传学、饮食习惯和地理环境等因素的影响[1-3]。血清超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）是临床常用指标，能通过催化阴离子自由基发生歧化反应来清除阴离子自由基、对抗细胞的氧化损伤，消除自由基对细胞膜的损害，从而避免疾病的发生[4-5]。另外，血清SOD的水平可以反映机体的抗氧化能力，可作为肿瘤等疾病的辅助诊断指标，若与其他指标联合检测，可以提高对疾病的诊断效能[6-8]。

目前，血清SOD的实验室检测逐渐普及，但实验室使用的参考区间多参照试剂说明书，未考虑地域和人群等因素的影响，存在参考区间应用不当的问题，给临床诊疗和患者安全带来不利影响。本研究旨在建立山东济南地区健康成人血清SOD的参考区间，为本地区临床应用SOD辅助诊断各类疾病提供更好的依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2020年3月～2021年10月在山东第一医科大学附属省立医院体检的健康成人2 559例，其中男性1 293例，年龄18～88（42.51±11.53）岁；女性1 266例，年龄18～89（42.16±11.18）岁。纳入标准：入选对象经B超、内外科检查、胸片、心电图及实验室检查（肝肾功能、血脂血糖、血尿常规、血清病毒抗原抗体、血清肿瘤标志物等）均正常，女性避开月经期。排除标准：①体检资料不全者、年龄＜18岁；②肝肾功能不全者；③具有心血管病史者、糖尿病、高血压、高脂血症者。本研究通过了我院伦理委员会批准。

1.2 仪器与试剂 BECKMAN Coulter AU5831全自动生化流水线；SOD检测试剂盒（比色法，福建福缘生物科技有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 标本采集及检测：所有入选对象于清晨体格检查后，空腹采集静脉血3～5ml，置于黄色促凝管中，室温自然凝固后3 200r/min离心10min，分离并吸取上层血清，立即上机检测或-20℃冰箱保存待集中检测，排除溶血、脂血和黄疸标本。样本检测：血清SOD（比色法，福建福缘生物科技有限公司）使用BECKMAN Coulter AU5831全自动生化流水线检测，具体操作严格按照仪器SOP文件和项目SOP文件操作。检测前室内质控在控，该项目的室间质评成绩合格。

1.3.2 参考区间的验证：按照WS/T402-2012《临床实验室检验项目参考区间的制定》[9]，每组采集至少20例健康个体，检测血清SOD水平，将测定值与已建立的参考区间进行比较，若落在参考限外的测定值不超过2个，则该参考区间验证通过；若3个或3个以上测定值超出参考限，则需重新筛选20例，重复上述操作。若验证仍未通过，则提示需要重新建立参考区间。

1.4 统计学分析 采用SPSS21.0和GraphPad Prism 5.0软件进行统计分析。正态性检验选用Kolmogorov-Smirnov检验。呈正态分布的计量资料用均数 ± 标准差（±s）表示，非正态分布的计量资料采用中位数（四分位间距）即[M(P25,P75)]表示，多组间比较采用Kruskal-Wallis 秩和检验，组间两两比较采用Mann-WhitneyU秩和检验并计算Z值，以P＜0.05为差异有统计学意义。采用百分位数法（P2.5～P97.5）建立参考区间。

2 结果

2.1 SOD数据的正态性检验 SOD数据正态性检验结果表明，W=0.985，P=0.000。SOD数据呈非正态分布，采用M(P25,P75)进行描述。

2.2 不同性别和年龄组健康成人血清SOD检测结果比较 见表1。男性血清SOD水平为181.30(172.00，189.45) U/ml，高于女性的175.70(165.60，184.33) U/ml，差异有统计学意义（Z=-9.67，P=0.000）。血清SOD水平随着年龄的增加而降低，其中男性年龄组间比较Z=-4.993～-2.094，P= 0.000～0.036；女性年龄组间比较41～50岁与51～60岁两年龄组间比较Z=-0.209，P=0.835，其余年龄组间比较Z=-3.847～-2.034，P=0.000～0.042。除51～60岁组血清SOD在男、女性间比较，差异无统计学意义（Z=-0.526，P=0.599），其余年龄组间男性血清SOD水平均高于女性，差异有统计学意义（Z=-7.601～-1.984，P= 0.000～0.047）。

表1 不同性别和年龄组健康成人血清SOD检测结果比较 [M（P25，P75）U/ml]

2.3 健康成人血清SOD参考区间的建立与验证 见表2。本研究中，血清SOD数据呈非正态分布，因此采用百分位数法（P2.5～P97.5）建立参考区间。依据表1中组间分析结果，将男性、女性年龄分组中差异无统计学意义的年龄组合并，计算合并后各组的参考区间。按WS/T402-2012进行验证，参加验证的独立样本其血清SOD的检测结果除男性51～60岁组有1例超出范围，其余均落在本研究建立的参考区间内，根据标准全部验证通过。

表2 健康成人血清SOD参考区间值及验证结果（P2.5～P97.5）

2.4 血清SOD参考区间与其他研究结果的比较 见表3。其他研究报告均显示血清SOD随年龄增加而降低且男性均高于女性，与本研究结果趋势一致。但是不同地区血清SOD参考区间存在差异。

表3 其他研究报告中血清SOD参考区间（U/ml）

3 讨论

超氧化物歧化酶（SOD）是一种源于生物体的活性物质，作为一种重要的能清除体内超氧阴离子自由基的抗氧化酶，保护细胞免受损伤。由于分布广泛，在多种疾病如心脑血管疾病、肝脏疾病、肾脏疾病、糖尿病和自身免疫性疾病等患者血清中表现出浓度水平的降低。有研究结果表明，将血清SOD与其他指标联合应用，可在肝病、早期糖尿病、肺炎的鉴别诊断、恶性肿瘤等疾病的筛查、诊断、术后监测等方面具有一定的指导意义，并能提高监测效能[10-12]，因此检测血清SOD水平对疾病的预防与诊疗有重要意义。

我国幅员辽阔、人口构成复杂，且不同地区人群由于遗传学、饮食习惯、营养状况、地理环境等因素的影响导致检验项目的参考区间存在差异[13-15]。本研究旨在分析济南地区健康成人血清SOD水平与性别、年龄的相关性，依据性别和年龄等因素建立本地区血清SOD的参考区间，为临床诊疗提供参考。分析结果显示，血清SOD水平随着年龄增加而降低，且男性SOD水平高于女性，原因可能与成年男性中吸烟及饮酒者的比例高于女性有关。有研究证实[16]，吸烟可生成大量的活性氧自由基，为保持机体内氧自由基平衡，抗氧化酶的活性会反应性增加，SOD作为最主要的抗氧化酶，其血清浓度会升高。另外，还可能与机体激素水平变化、机体代谢能力变化有关，随着年龄的增加，机体的抗氧化能力呈下降趋势，尤其绝经后，雌激素分泌减少，机体的抗氧化能力下降更明显，因此，血清SOD水平显著降低[17]。

本研究我们通过对山东济南地区2 559例健康成人的血清SOD水平分析，综合年龄、性别因素，建立了济南地区不同性别及年龄段的血清SOD参考区间，与以往研究中的血清SOD参考区间均有差异性[18-19]，这可能与以下因素有关：①地区差异的关系，地理、历史、人群遗传背景、饮食结构和人口构成不同；②检测系统不同。③样本数据来源不同和样本量大小差异因素。

本研究仍存在一定的局限性：①只是针对山东济南地区的健康成年人，其他地区未做调查分析；②缺少18岁以下人群研究样本，该部分群体的参考区间仍需进一步探讨。

总之，我们综合年龄和性别因素初步建立了济南地区男女性不同年龄段血清SOD 的参考区间，为SOD在临床上用于疾病的筛查、诊断、术后监测、判断预后等提供了数据基础和参考意见。