贵州省HIV/AIDS患者合并梅毒感染病毒载量与T淋巴细胞亚群相关性分析

覃达文　杨秀程　洪章萍　熊倩妤　蒙楠　胡勇　杨兴林

摘要：目的 分析貴州省近3年人类免疫缺陷病毒（HIV）/艾滋病（AIDS）患者合并梅毒感染病毒（HIV-RNA）载量与T淋巴细胞亚群之间的相关性。方法 选取2019年1月1日—2021年12月31日在贵阳市公共卫生救治中心新确诊且未进行抗逆转录病毒治疗（ART）的HIV/AIDS患者2 869例。根据患者梅毒检测结果，分为单纯HIV感染组2 289例、HIV/梅毒现症感染组333例和HIV/梅毒既往感染组247例。比较3组患者一般人口学资料及实验室检测指标基线数据的差异，并分析HIV不同组间各自HIV-RNA载量与T淋巴细胞亚群的相关性。结果 HIV/梅毒现症感染组的年龄小于单纯HIV感染组和HIV/梅毒既往感染组，男性占比高于单纯HIV感染组和HIV/梅毒既往感染组（P＜0.05）。HIV/梅毒现症感染组的HIV-RNA载量低于单纯HIV感染组，CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、CD3⁺T细胞均高于单纯HIV感染组（P＜0.05）；HIV/梅毒既往感染组的HIV-RNA载量高于HIV/梅毒现症感染组，CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、CD3⁺T细胞均低于HIV/梅毒现症感染组（P＜0.05）；HIV不同组间CD4/CD8比值差异无统计学意义（P＞0.05）。单纯HIV感染组和HIV/梅毒既往感染组Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级HIV-RNA载量均依次降低（P＜0.05）；HIV/梅毒现症感染组Ⅱ级、Ⅲ级HIV-RNA载量低于Ⅰ级（P＜0.05）。3组患者HIV-RNA载量与T淋巴细胞亚群均呈负相关（P＜0.01）。结论 HIV/梅毒合并感染后T淋巴细胞亚群发生改变；随着HIV-RNA载量的变化，HIV/梅毒合并感染的T淋巴细胞亚群亦有所差异。

关键词：人类免疫缺陷病毒；艾滋病；梅毒；病毒载量；T淋巴细胞；贵州

中图分类号：R512.91，R759.1文献标志码：ADOI：10.11958/20221797

Correlation analysis between viral load and T lymphocyte subsets in HIV/AIDS patients

co-infected with syphilis infection in Guizhou province

QIN Dawen YANG Xiucheng HONG Zhangping XIONG Qianyu MENG Nan HU Yong YANG Xinglin

1 School of Public Health and Wellness， Guizhou Medical University， Guiyang 550025， China;

2 Department of Laboratory， Guiyang Medical Center for Public Health

△Corresponding Author E-mail： yangxinglin.123@163.com

Abstract： Objective To analyze the correlation between HIV-RNA load and T lymphocyte subsets in HIV/AIDS patients co-infected with syphilis in Guizhou province in recent three years. Methods A total of 2 869 newly diagnosed HIV/AIDS patients who did not receive antiretroviral therapy （ART） were selected in the public health rescue center of Guiyang from January 1， 2019 to December 31， 2021. According to results of syphilis testing， patients were divided into the simple HIV infection group （n= 2 289）， the current HIV/syphilis infection group （n=333） and the previous HIV/syphilis infection group （n=247）. The general demography data and the baseline data of laboratory test indicators were compared between the three groups of patients. The correlation between the HIV-RNA load and T lymphocyte subsets in different groups of HIV was analyzed. Results The age of the HIV/syphilis current infection group was lower than that of the HIV/syphilis simple infection group and the HIV/syphilis past infection group， and the proportion of males was higher than that of the HIV simple infection group and the HIV/syphilis past infection group （P＜0.05）. The HIV-RNA load was lower in the HIV/syphilis current infected group than that in the HIV-only infected group. CD4⁺T cells， CD8⁺T cells， and CD3⁺T cells were higher in the HIV/syphilis current infected group than those of the HIV simple infection group （P＜0.05）. The HIV-RNA load was higher in the HIV/syphilis previous infection group than that in the HIV/syphilis current infection group， and CD4⁺T cells， CD8⁺T cells and CD3⁺T cells were lower than those in the HIV/syphilis current infection group （P＜0.05）. There was no significant difference in the CD4/CD8 ratio between different HIV groups （P＞0.05）. The HIV-RNA load of grade Ⅰ， Ⅱ and Ⅲ decreased sequentially in the simple HIV infection group and the  previous HIV/syphilis infection group （P＜0.05）. The HIV-RNA load of grade Ⅱ and Ⅲ in the HIV/syphilis current infection group was lower than that of grade Ⅰ （P＜0.05）. There was a negative correlation between HIV-RNA load and T lymphocyte subsets in the three groups of patients （P＜0.01）. Conclusion Changes in  T lymphocyte subsets occur after HIV/syphilis co-infection. With changes in HIV-RNA load， there are also differences in the T lymphocyte subsets of HIV/syphilis co-infection.

Key words： HIV; AIDS; syphilis; viral load; T lymphocyte; Guizhou

艾滋病（acquired immune deficiency syndrome，AIDS）是国内外关注的重大传染性疾病，截至2021年底，全球约有3 840万例人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染者，其中2021年新发感染者约150万［1］。HIV主要以破坏CD4⁺T细胞为主，导致机体免疫功能缺陷，同时梅毒与HIV感染存在相似的传播途径（如性传播、血液传播、母婴传播等），使得合并梅毒感染的概率增加［2-3］。CD4⁺T细胞水平是反映机体免疫功能及病程进展的一项重要免疫指标，与机体内病毒（HIV-RNA）载量相关。研究发现，HIV/梅毒合并感染时，HIV-RNA载量升高，CD4⁺T细胞数量下降，可引起免疫系统功能损伤，严重者导致“恶性梅毒”发生［4-6］。近年来，针对HIV/梅毒合并感染是否影响HIV的病程进展尚存较大争议［7-8］。本研究选择贵州省近3年新确诊且未进行抗逆转录病毒治疗（antiretroviral therapy，ART）的HIV/AIDS患者，通过回顾性分析单纯HIV感染及HIV/梅毒合并感染的HIV-RNA载量和T淋巴细胞亚群变化差异、CD4⁺T细胞计数级别与HIV-RNA载量差异、各自HIV-RNA载量与T淋巴细胞亚群的相关性，了解HIV/梅毒合并感染时HIV-RNA载量与T淋巴细胞亚群的变化情况，为临床诊疗提供参考依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选择2019年1月1日—2021年12月31日在贵阳市公共卫生救治中心新确诊且未进行ART的HIV/AIDS患者为研究对象。纳入标准：（1）HIV/AIDS患者由贵州省HIV确诊实验室诊断为HIV阳性。（2）HIV/AIDS患者进行梅毒诊断。（3）一般人口学资料及基线实验室检测指标完整。排除标准：（1）既往接受ART。（2）合并病毒性肝炎。（3）患有严重自身免疫性疾病、精神疾病及恶性肿瘤。HIV/AIDS患者诊断标准参照《中国艾滋病诊疗指南（2018版）》［9］，梅毒诊断参照WS273-2018梅毒诊断标准［10］。本研究方案通过贵阳市公共卫生救治中心伦理委员会审查（审批编号：202148），所有患者均签署知情同意书。

1.2 研究方法

回顾性收集整理患者年龄、性别等一般人口学资料，在瑞美实验室管理系统中搜索梅毒螺旋体、HIV-RNA、CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、CD3⁺T细胞实验室检测指标并将对应患者的数据录入Excel，同时对所有收集的数据进行严格审核。

1.3 实验室指标检测及分组

通过无菌试管收集患者空腹外周血10 mL，并在24 h内进行相关实验室指标检测，包括梅毒螺旋体、HIV-RNA、CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、CD3⁺T細胞。

1.3.1 梅毒检测

采用快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）联合梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）进行诊断，试剂盒分别购自上海科华和日本富士公司（批号分别为20181109、VN181012），并按照说明书进行实验操作。根据患者梅毒检测结果，分为单纯HIV感染组［RPR（-）TPPA（-）］、HIV/梅毒现症感染组［RPR（+）TPPA（+）］、HIV/梅毒既往感染组［RPR（-）TPPA（+）］。

1.3.2 病毒载量检测

采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction，RT-qPCR）方法检测，使用COBAS AmpliPrep仪器及核酸提取试剂盒（美国Roche公司）提取HIV-RNA，通过COBAS TaqMan 48测定其病毒载量。相关操作按照说明书进行。

1.3.3 T淋巴细胞亚群检测

使用BD FACSCantoTM Ⅱ流式细胞分析仪（美国BD公司）及专用试剂盒对T淋巴细胞亚群进行检测。采用反向移液技术吸取50 μL混匀的EDTA-K2抗凝全血，加入管底，避免血液碰到管壁上部。在流式管底部加入一定量的流式抗体试剂，将流式管放置旋涡混合器（型号XH-B）上方，轻轻涡动混匀约3 s，室温避光反应25 min。向管内加入450 μL流式细胞仪用溶血剂，轻轻涡动混匀约15 s，室温避光反应10 min。绝对计数微球开瓶之前涡动混匀约30 s。吸取50 μL混匀后的绝对计数微球，加入管底，避免液体碰到管壁上部，轻轻涡动混匀约10 s。上机检测。CD4⁺T细胞计数检测结果分为3级：Ⅰ级，CD4⁺T细胞计数≤200个/μL；Ⅱ级，CD4⁺T细胞计数201～350个/μL；Ⅲ级，CD4⁺T细胞计数≥351个/μL。

1.4 统计学方法

采用SPSS 24.0软件进行数据分析。为方便统计将HIV-RNA载量进行对数转换。计量资料正态性检验采用K-S检验法，非正态分布的计量资料以M（P₂₅，P₇₅）表示，多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验，组间多重比较采用Nemenyi检验；计数资料以例（%）表示，多组间比较采用χ²检验；采用Spearman秩相关分析HIV不同组间各自HIV-RNA载量与T淋巴细胞亚群的相关性。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组间一般资料比较

共纳入研究对象2 869例，其中单纯HIV感染组2 289例，男1 616例（70.6%），女673例（29.4%）；年龄1～91岁，中位年龄46.0（31.5，58.0）岁。HIV/梅毒现症感染组333例，男276例（82.9%），女57例（17.1%），年龄16～80岁，中位年龄33.0（26.0，50.0）岁。HIV/梅毒既往感染组247例，男175例（70.9%），女72例（29.1%），年龄19～88岁，中位年龄48.0（34.0，61.0）岁。HIV/梅毒现症感染组的年龄小于单纯HIV感染组及HIV/梅毒既往感染组（χ2=66.245，P＜0.05），男性占比高于单纯HIV感染组及HIV/梅毒既往感染组（χ2=21.974，P＜0.05）。

2.2 不同组间HIV-RNA载量和T淋巴细胞亚群变化比较

HIV/梅毒现症感染组的HIV-RNA载量低于单纯HIV感染组，CD4⁺T细胞、CD8⁺T細胞、CD3⁺T细胞均高于单纯HIV感染组（P＜0.05）；HIV/梅毒既往感染组的HIV-RNA载量高于HIV/梅毒现症感染组，CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、CD3⁺T细胞均低于HIV/梅毒现症感染组（P＜0.05）；不同组间CD4/CD8比值差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

2.3 不同组间CD4⁺T细胞计数级别与HIV-RNA载量的差异

同一CD4⁺T细胞计数级别下3组间HIV-RNA载量差异均无统计学意义（P＞0.05）。3组内CD4⁺ T细胞计数级别与各自HIV-RNA载量差异均有统计学意义（P＜0.05）；其中，单纯HIV感染组和HIV/梅毒既往感染组Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级HIV-RNA载量均依次降低（P＜0.05）；HIV/梅毒现症感染组Ⅱ级、Ⅲ级HIV-RNA载量低于Ⅰ级（P＜0.05），Ⅱ级与Ⅲ级间差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

2.4 3组各自HIV-RNA载量与T淋巴细胞亚群的相关性

单纯HIV感染组、HIV/梅毒现症感染组、HIV/梅毒既往感染组中各自HIV-RNA载量与T淋巴细胞亚群均呈负相关（P＜0.01），见表3。

3 讨论

T淋巴细胞对机体的免疫反应发挥关键作用，患者感染HIV时，CD4⁺T细胞是HIV-RNA攻击的重要靶细胞，导致外周循环系统中CD4⁺T细胞数量逐渐减少［11］。然而，机体主要利用CD4⁺T细胞清除梅毒螺旋体［12］。章松平等［13］研究显示，HIV/AIDS患者合并梅毒隐性感染早期，细胞免疫功能可能有所增强。本研究也发现，HIV/梅毒现症感染组CD4⁺T细胞数量高于单纯HIV感染组，提示HIV/梅毒现症感染组的基线CD4⁺T细胞计数可能出现一过性增加，这有利于更多的CD4⁺T细胞攻击梅毒螺旋体，加强其清除力度。但是，本研究结果显示，HIV/梅毒既往感染组的CD4⁺T细胞数量低于HIV/梅毒现症感染组，HIV-RNA载量高于HIV/梅毒现症感染组，提示梅毒患者既往感染时免疫系统可能已受到损伤，在合并HIV感染后，基线CD4⁺T细胞计数并未出现一过性增加的现象，表明HIV/梅毒合并感染的不同时期，机体免疫激活状态与CD4⁺T细胞、HIV-RNA载量密切相关且有所差异，推测其会影响梅毒的疾病进展。因此，及时检测HIV-RNA载量、T淋巴细胞亚群对于梅毒的病程进展及临床诊疗至关重要。

HIV/AIDS患者合并梅毒感染是否影响HIV的病程进展目前尚存较大争议。有研究报道，HIV/梅毒合并感染并不会影响HIV疾病进展［7］。另有研究发现，HIV合并梅毒感染者的CD4⁺T细胞数量的减少与HIV-RNA载量增加有关［14-15］。本研究结果显示，单纯HIV感染组和HIV/梅毒既往感染组中Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级HIV-RNA载量依次降低，且2组患者HIV-RNA载量与CD4⁺T细胞数量呈负相关，表明随着HIV-RNA载量增加，CD4⁺T细胞数量的减少，导致机体免疫系统功能缺陷，推测可能会影响HIV患者的病程进展，这与相关报道结果相似［8，16］。因此，笔者建议对所有单纯HIV及合并梅毒患者应进行HIV-RNA载量、T淋巴细胞亚群检测，并及时接受相应治疗。

综上所述，HIV/梅毒合并感染后T淋巴细胞亚群发生改变；随着HIV-RNA载量的变化，HIV/梅毒合并感染的T淋巴细胞亚群亦有所差异。HIV/梅毒合并感染的细胞学免疫机制错综复杂，目前仍未完全明确，一定程度上HIV-RNA载量与T淋巴细胞免疫功能相互影响，是病情发生、发展与转归的重要因素。本研究的局限性在于：作为一项观察性研究，未对HIV/梅毒合并感染进行临床分期研究，且未考虑患者年龄、性别、种族等因素，仅探讨了新确诊且未进行ART的HIV/梅毒合并感染基线HIV-RNA载量与T淋巴细胞亚群的相关性。本研究为下一步开展前瞻性研究提供思路，针对新确诊的HIV/梅毒合并感染进行临床分期并开展随访调查，观察患者在治疗期间的HIV-RNA载量和T淋巴细胞亚群变化，从而为疾病的临床治疗提供理论依据。

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（2022-11-14收稿 2023-02-09修回）

（本文編辑 陈丽洁）