牛磺酸对酒精性肝病大鼠肝脏脂质代谢的影响

2023-11-02冯洁，徐鑫

工业微生物 2023年5期

冯洁，徐鑫

1.苏州市动物园，江苏苏州 215000；2.苏州市畜牧兽医站，江苏苏州 215000

大量试验证实，乙醇是很多急性或慢性疾病，以及精神行为障碍发病的一大重要危险因素。进入人体的乙醇排泄有80%～90%依靠肝脏代谢，少部分经肺与肾排出。鉴于牛磺酸具有的范围广、特异性低及不会对人体产生危害等优点，本文旨在研究牛磺酸对酒精性肝病大鼠肝脏脂质代谢的影响。

1 材料

1.1 试验动物

健康大鼠66 只，体重（120±10）g，雄性，SPF（无特定病原体）级。

1.2 日粮

全过程大鼠日粮分为高脂饲料和普通饲料两种，其中高脂饲料由15%玉米油和85%普通饲料混合而成；普通饲料就是全价配合饲料。

1.3 试验药品与试剂

牛磺酸（纯度高于99%）；60%vol 纯粮白酒；吡唑；玉米油；禾丰维他生；氯化钠，甲醛溶液，无水乙醇，95%乙醇，新洁尔灭，冰乙酸；考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒，总胆固醇试剂盒，甘油三酯试剂盒，高密度脂蛋白试剂盒。

1.4 主要仪器

12 号大鼠灌胃针；JJ 系列高精度电子天平；马头牌YP-B、YP-C 型系列应变式电子天平；WFJ2 系列7200 型分光光度计；ZDX-35BI 型座式自动电热压力蒸汽灭菌器；组织匀浆器；HH-6 数显恒温电热水浴锅；低速离心机；电热鼓风干燥箱；常用手术器械；BS 224S 精密电子天平。

2 方法

2.1 饲养管理

将所有大鼠放置在试验中心统一进行饲养，每笼控制在5～7 只，室内温度控制在18 ℃左右，温差不超过2 ℃，湿度控制在55%左右，灯光每隔12 h打开或关闭。

2.2 试验方法

预防试验：取36 只体重为120±10 g 的SPF 级大鼠，按照统一标准饲养7 d，按照5 g/100 g 体重的标准饲以普通全价饲料，自由饮用去离子超纯水，同时在水中添加维他生。在试验的第2 周对大鼠进行分组，分别为模型组、对照组、2%牛磺酸空白对照组、2%牛磺酸预防组、5%牛磺酸空白对照组与5%牛磺酸预防组。试验方法见表1。每天早上8 点使用0.9%氯化钠溶液对对照组的大鼠进行灌胃，选择普通全价饲料进行饲喂，自由饮水；牛磺酸空白组的大鼠均选用普通全价饲料进行喂养，同时在其饮水中分别加入2%与5%的牛磺酸；模型组的大鼠则每日清晨用白酒+吡唑混合液对其实施灌胃操作，在第1周按照10 mL/（kg·d）的剂量使用20%的白酒灌胃，第2 周按照15 mL/（kg·d）的剂量使用30%的白酒灌胃，第3 周按照15 mL/（kg·d）的剂量使用40%的白酒灌胃，并在白酒中添加24 mg/（kg·d）的吡唑，正常饮水，饲喂高脂饲料（饲用玉米油+普通饲料）；按照模型组相同的步骤造模牛磺酸预防组，并在饮水中同时分别加入2%、5%牛磺酸。在试验进行到第8周、10 周、12 周时，分别从模型组、对照组及预防组中随机选取2 只大鼠，断头处死，取出其肝脏做石蜡切片以验证造模效果。12 周末成功造模后杀鼠，采集其肝脏与血液。

表1 试验方法

治疗试验：取SPF 级大鼠30 只，统一标准饲养7 d 后将其随机分成两组，即正常对照组6 只，造模组24 只。造模组的全部大鼠都按照预防试验同样的方法建立大鼠ALD 模型，在完成造模后的第4周、8 周、12 周分别从上述两组大鼠中抽取2 只作为试验对象，提取其肝脏制成病理切片，对造模效果进行分析。待造模成功12 周后，再将剩余大鼠分成4个小组，详见表2，每一组均包括6 只大鼠，其中自然恢复组饲以正常饮水和普通全价饲料；正常对照组饲喂普通全价饲料，正常饮水；而2%、5%牛磺酸组大鼠均饲喂葡萄全价饲料，饮水中分别添加浓度为2%、3%、5%的牛磺酸。分别在第4 周、8 周后从各组中选出3 只大鼠，采用断头法处死大鼠，然后采集其肝脏与血液。

表2 试验方法

2.3 采集，制备样本

2.3.1 制备血清

对大鼠严格禁食12 h，在最后一次给药24 h后，称重，断头取血，将其置于离心机上处理，设置转速为3 500 r/min，连续处理15 min，将处理后的上清液分别装入1.5 mL 离心管内，放置在冰箱中-18℃冷冻保存。

2.3.2 处理脏器

采用断头法处死大鼠，快速解剖取出其肝脏，使用PBS 多次冲洗，使用滤纸吸净肝脏水分后将肝脏放置在天平上称重。然后将肝脏放置在10%中性甲醛溶液中进行固定处理，经过常规石蜡包块处理，用HE 染色后使用光学显微镜观察肝脏病理变化。

2.4 观察与检测

2.4.1 试验观察

在试验前对大鼠称重一次，观察大鼠试验期间的毛发、行为、饮食、精神、死亡等状态；结束试验后，称重然后处死大鼠。

2.4.2 生化指标的检测

测定肝组织匀浆内抗氧化能力，需要按照试剂盒上的说明进行操作，运用722 光栅分光度计对肝组织匀浆内抗氧化能力进行测定，然后根据相关的公式计算血清中的TC、TG、HDL 水平。

2.5 数据分析

计量资料用“均数±标准差”表示，使用SPSS 13.0 统计软件对单因素方差进行分析，使用Duncan’s 法进行多重比较。

3 分析结果

3.1 情况观察

预防试验期间，观察到牛磺酸空白组、对照组大鼠行动敏捷，毛皮柔顺有光泽，饮食正常，精神状态良好；剩余组的大鼠在灌酒后便表现为嗜睡、步履蹒跚、四肢瘫软；模型组的大鼠伴有活动量减少、反应迟钝、食欲下降、毛色晦暗、发育迟缓等表现；牛磺酸预防组的大鼠的外观优于模型组，其醉酒的时间更短，饮水与采食均正常，背毛也正常，与模型组相比体重增长更显著。

治疗试验期间，观察发现自然恢复组、牛磺酸治疗组与模型组相比，饮食、运动、体重都有所增加，皮毛光泽逐渐恢复。治疗一个月后，牛磺酸治疗组与自然恢复组相比，体重明显增加，其中3%牛磺酸组与5%牛磺酸组无显著差异。治疗两个月时，全部大鼠都接近正常。

3.2 牛磺酸对大鼠血清中TC、TG、HDL 含量的影响

如表3 所示，治疗一个月后，自然恢复组与对照组大鼠血清中的TC 含量相比，增加了56.13%，差异非常显著（P<0.01）；2%牛磺酸治疗组、3%牛磺酸治疗组和5%牛磺酸治疗组TC 含量与对照组相比分别增加了23.23%、14.84%、9.03%，差异都不明显（P>0.05），其中，5%牛磺酸治疗组与自然恢复组的差异非常显著（P<0.01），而与2%牛磺酸治疗组和3%牛磺酸治疗组无显著性差异（P>0.05）。治疗两个月后，自然恢复组、2%牛磺酸治疗组、3%牛磺酸治疗组和5%牛磺酸治疗组与对照组相比，TC 含量分别增加了12.99%、2.60%、2.60%、1.29%，无显著性差异（P>0.05）。

表3 大鼠血清中TC 含量的变化

如表4 所示，治疗一个月后，自然恢复组与对照组大鼠血清中的TG 含量水平相比，增加了32.08%，差异显著（P<0.05）；5%牛磺酸治疗组、3%牛磺酸治疗组和2%牛磺酸治疗组分别增加了1.87%、1.87%、5.66%，差异都不显著（P>0.05）。治疗两个月后，自然恢复组、2%牛磺酸治疗组、3 牛磺酸治疗组%和5%牛磺酸治疗组与对照组相比，TG 含量水平分别增加了3.77%、1.87%、1.87%、0，无显著性差异（P>0.05）。

表4 大鼠血清中TG 含量的变化

如表5 所示，治疗一个月后，其他各组与对照组大鼠血清中的HDL 含量相比，水平均有降低，自然恢复组减少了41.23%，具有显著差异（P<0.05）；2%牛磺酸治疗组、3%牛磺酸治疗组和5%牛磺酸治疗组分别减少了32.23%、23.22%、8.06%，差异均不显著（P>0.05）。治疗两个月后，自然恢复组、2%牛磺酸治疗组、3%牛磺酸治疗组和5%牛磺酸治疗组与对照组相比，HDL 含量分别减少了28.50%、14.00%、9.50%、2.00%，均无显著性差异（P>0.05）。