NFKB1 基因多态性与冠心病（心血瘀阻证）及炎症因子的相关性研究*

陈 云 李 超

（浙江省金华市人民医院，浙江金华 321000）

冠心病属于中医学“胸痹”“真心痛”“厥心痛”范畴，具有发病率高、致残率高及致死率高［1］。流行病学研究证实，除了经典（如血脂异常、高血压）的危险因素，遗传因素参与冠心病发病机制得到了医学界学者们的普遍认同［2］。心血瘀阻证是冠心病最为常见的证候类型［3］，国内多项研究表明心血瘀阻证与基因多态性相关［4-5］。近些年研究发现NFKB1-rs28362491基因多态性与中国西北地区人群冠心病易感性相关，纯合突变DD基因型携带者冠心病发病风险增加［6］，但与冠心病（心血瘀阻证）研究尚缺乏全面的分析。本研究分析NFKB1 基因多态性与冠心病（心血瘀阻证）及炎症因子的相关性，为中医证候遗传多态性提供一定的科学依据。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 病例选择 诊断标准：冠心病诊断参照美国心脏病学会和心脏协会（ACC/AHA）冠心病心绞痛诊断指南和《2007 年中国慢性稳定性心绞痛诊断与治疗指南》制定的稳定性心绞痛［7］。冠心病中医辨证分型标准参照《中药新药治疗胸痹的临床研究指导原则》［8］《冠心病中医辨证标准》［9］。本研究中所有受试者均为浙江中部地区汉族常住人群，相互之间均无血缘关系；年龄18～75 岁，性别不限，排除先天性心脏病、严重急慢性感染、肝肾功能不全、恶性肿瘤等疾病。受试患者均签署知情同意书，所有相关操作经过医院伦理委员会审核通过（伦理审批号：IBR-2021073-R）。

1.2 临床资料 选取2018 年6 月至2021 年6 月就诊于金华市人民医院心血管内科疑似冠心病患者280例，根据冠脉造影结果，冠心病组173 例，根据中医辨证分型，分为心血瘀阻证患者69 例，男性47 例，女性22例；年龄18～75岁，平均（62.69±4.13）岁；非心血瘀阻证患者104 例，男性69 例，女性35 例；年龄18～75 岁，平均（61.37±5.73）岁。107例非CHD 患者作为对照组，其中男性65 例，女性42 例，年龄18～75 岁，平均（61.78±5.35）岁。各组患者的临床资料差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.3 治疗方法 1）冠状动脉造影术。采用Judkin 法造影，阳性诊断标准为至少有1 支主要冠脉或其主要分支血管内径狭窄≥50%。由两位经验丰富的介入治疗专家共同进行及判断。2）NFKB1 基因多态性检测。空腹抽取静脉血5 mL，采用低渗法分离白细胞，提取DNA，利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术（PCR-RFLP）扩增NFKB1 基因启动区-94 位点，进行NFKB1 基因多态性检测（I/D），具体方法参照文献［10］。3）炎症因子分析。抽取清晨空腹肘正中静脉血5 mL，乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管收集，ALLEGRAX-15R 医用低速离心机，1 000 r/min，离心15 min，血清于-80 ℃冰箱储存。采用酶链免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）水平。

1.4 统计学处理 应用SPSS22.0 统计软件。使用Hardy-Weinberg 平衡检验样本的群体代表性。计量资料以（）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验；计数资料以“n、%”表示，组间比较采用χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组NFKB1 基因rs28362491 位点多态性比较 见表1。NFKB1 基因rs2836249 位点的基因型及等位基因频率在心血瘀阻证和非心血瘀阻证及对照组的分布均符合Hard-Weinberg 平衡定律（χ2=1.359、1.083、1.572，P＞0.05）。心血瘀阻证NFKB1 基因rs28362491位点DD 基因型频率高于非心血瘀阻证和对照组，II、ID 基因型频率低于非心血瘀阻证和对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。各组D、I 等位基因频率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表1 各组基因型及等位基因分布比较［n（%）］

2.2 各组炎症因子水平比较 见表2。各组患者TNF-α、IL-6、IL-8水平比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。心血瘀阻证TNF-α、IL-6、IL-8 水平均高于非心血瘀阻证和对照组（P＜0.05）。非心血瘀阻证与对照组TNF-α、IL-6、IL-8 水平比较，差异亦有统计学意义（P＜0.05）。

表2 各组TNF-α、IL-6、IL-8水平比较（ng/L，±s）

表2 各组TNF-α、IL-6、IL-8水平比较（ng/L，±s）

组 别心血瘀阻证非心血瘀阻证对照组n 69 104 107 TNF-α 27.83±2.19*△20.52±3.16*18.42±1.85 IL-6 30.57±1.92*△24.23±1.29*19.28±1.39 IL-8 25.72±1.59*△20.12±1.27*17.51±1.38

2.3 不同基因型患者炎症因子水平比较 见表3。不同基因型组TNF-α、IL-6、IL-8 水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。DD 基因型组TNF-α、IL-6、IL-8 水平均高于ID 和II 基因型组（P＜0.05）。ID 组和II 基因型组TNF-α、IL-6、IL-8 水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

表3 不同基因型患者TNF-α、IL-6、IL-8水平比较（ng/L，±s）

表3 不同基因型患者TNF-α、IL-6、IL-8水平比较（ng/L，±s）

基因型DD ID II n 55 127 98 TNF-α 24.23±2.52*△18.23±4.28 17.97±2.72 IL-6 23.79±2.73*△18.38±1.57 19.53±2.42 IL-8 26.54±1.65*△19.23±1.83 21.78±2.42

3 讨 论

冠心病属中医学“胸痹”“真心痛”“厥心痛”范畴，其发病与血瘀、痰浊、气滞等有关，冠状动脉痉挛中医病机可用气滞解释，血液流速异常近似于中医之血瘀证，冠状动脉粥样斑块形成则与“痰浊”有关［11］。目前研究证实基因单核苷酸多态性与冠心病中医证候有明显的相关性，尤其在冠心病（心血瘀阻证）方面，包含血瘀证、血瘀阻滞证、瘀血痹阻证、瘀血闭阻证、瘀血阻脉证。宋曙霞等研究发现冠心病血瘀证患者ACE 基因多态性与血管病变严重程度相关，ACE 基因DD、I/D 型患者血管狭窄支数较Ⅱ型多［5］。徐长福等采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测血瘀证组、非血瘀证及非冠心病MMP-3-1171 5A/6A 的基因型，发现MMP-3-1612 5A/6A 基因多态性与冠心病血瘀证发生相关，5A/5A基因型成为血瘀证易感性遗传因素［12］。郑景辉等研究证实IL-8-251A/T SNP AT 基因型可增加家族聚集性冠心病血瘀证的易感性［13］。

NFKB1 基因上游启动子区域-94 位点存在基因多态 性（NFKB1-94-ins/del ATTG，rs28362491） 是NFKB1 基因中唯一具有表达功能的SNP，表现为ATTG 碱基的插入/缺失，编码野生纯合基因型（ins/ins，II），杂合突变基因型（ind/del，ID），纯合突变基因型（del/del，DD）3 种基因。相关研究表明，在不同人群中，携带NFKB1 基因rs28362491 D 等位基因或DD 基因型的携带者易患冠心病［14］。辨证论治是中医精髓，证候是疾病发生过程中不同阶段病因病机的高度概括。一病可有多证，一证还见于多种疾病，“同病异治，异病同治”，不同证候类型间存在的基因多态性差异表达或许正是其物质基础［15］。本研究结果提示冠心病（心血瘀阻证）NFKB1 基因多态性位点DD 基因型及D等位频率明显高于冠心病非心血瘀阻证及对照组，证实DD 基因型成为心血瘀阻的危险因素，但发病机制尚不明确。

炎症因子参与动脉粥样硬化斑块、血栓形成进程，与冠心病的发生、发展密切相关［16］。TNF-α 破坏血管内皮细胞，诱发其他炎症因子的合成及释放，加速粥样硬化斑块形成［17］。此外，其促进冠心病患者的心肌收缩力下降及膜电位改变，导致恶性心律失常等心血管事件发生风险增加。IL-6 刺激心血管平滑肌分泌血小板源性生长因子，形成血栓，同时加快脂质在内皮细胞沉积速度，易患粥样斑块［18］。IL-8 引起血管细胞内钙离子浓度超载，产生细胞变形反应、脱颗粒反应现象，影响活性氧产生效率，从而对冠心病患者的心肌细胞造成损伤［19］。由此可见，TNF-α、IL-6、IL-8 可能通过血管内皮细胞损伤、打破血凝-抗血凝平衡、加快脂质沉积等病理生理过程参与心血瘀阻证的形成。本研究结果表明，冠心病（心血瘀阻证）患者血清TNF-α、IL-6、IL-8 含量显著高于冠心病非心血瘀阻证及对照组。进一步深入研究，NFKB1-rs28362491 基因DD 基因型TNF-α、IL-6、IL-8 水平高于II 基因型和ID 基因型。究其原因可能是等位基因D 调控NF-κB 的转录水平，抑制p50 蛋白合成，打破p50/p65 异源二聚体与p50/p50 同源二聚体在细胞内的平衡，进而影响其下游TNF-α、IL-6、IL-8的表达。

综上所述，NFKB1-rs28362491 基因多态性与浙中地区汉族人群冠心病（心血瘀阻证）有关联，DD 基因型可能干预TNF-α、IL-6、IL-8 水平成为冠心病（心血瘀阻证）易感性遗传因素。基因-冠心病证候中西医结合研究可作为中医辨证的参考指标。由于本研究入组病例样本量相对较少，且单中心患者，故今后需扩大样本量及多中心开展深入研究，进一步揭示NFKB1-rs28362491 基因多态性-冠心病（心血瘀阻证）的相关性。