烟台市公共场所人工水环境中军团菌污染情况调查及其病原型别鉴定

朱董楠 董兆静 王松松 侯春梅 王彦青

1.山东省烟台市疾病预防控制中心微生物检验科，山东烟台 264000；2.山东省招远市疾病预防控制中心检验科，山东招远 265400

军团菌感染在临床多见，而军团菌感染的防控是临床研究重点之一。与军团菌感染相关的研究显示，本类病原菌可导致局部流行的情况的发生，而对于公共场所军团菌的检测是感染防控措施制订的重要参考依据[1-2]。人工水环境作为军团菌感染流行的重要相关问题，对其进行军团菌污染情况的调查研究，有助于了解病原菌分布情况，对于疾病的防控意义较高。临床中关于公共场所人工水环境中军团菌污染情况的调查研究多见，但是众多研究显示，不同城市及地区的不同时间段的差异较大[3-5]。因此，对于公共场所军团菌感染及病原型别的针对性研究极为必要。本研究现探讨及分析某市公共场所人工水环境中军团菌污染情况调查及其病原型别。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019 年1 月至12 月的150 份公共场所人工水环境标本为研究对象。其中，空调冷却水58 份，淋浴水35 份，供水水箱32 份，喷泉水25 份；医疗单位66 份，宾馆酒店30 份，商场超市28 份，娱乐场所26 份；菌落总数＜104cfu/ml 样本70 份，≥104cfu/ml样本80 份；春季36 份，夏季60 份，秋季38 份，冬季16 份；市区72 份，郊区78 份。所有标本采集均由经验丰富者进行，且采集标本均符合相关标准。

1.2 检验方法

采集150 份公共场所人工水标本，遵照《水质采样技术指导（HJ 494-2009）》[6]中的相关标准进行采样，其中中央空调冷却水为采集冷却水的表层水，每次采集500 ml，其中医疗单位的水样本也为采集候诊室空调冷却水；淋浴水为3 d 未用的淋浴头，采集喷头初次流出的水样，采用灭菌玻璃瓶采集，每次采集500 ml；供水水箱为无菌采集的方式采集水箱内的水标本，每次采集500 ml；喷泉水为采集离池边1 m 左右处，深50 cm 的水标本，每次采集500 ml。所有水标本均于采集2 d 内送检，室温下保存。

每份水标本进行检测时，均先进行摇匀处理，然后取200 ml，采用0.45 μm 的滤膜进行抽滤处理，将所用滤纸剪碎后，将其在10.0 ml 无菌去离子水中进行洗脱处理，然后以1.0 ml 样品进行酸处理。取0.1 ml 接种于军团菌选择性培养基上，置于5%CO2培养箱，37℃的温度下孵育10 d，进行培养结果的判定。同时采用军团菌乳胶凝集试剂盒（上海华微泰达生物科技有限公司，批号：OXOID DR0800M）进行血清型的鉴定，将使用特异性兔抗体敏化的蓝色胶乳颗粒干燥结合于测试卡上。其与血清型抗原发生反应，并在检测反应区内呈现凝集反应。上述操作均由两名经验丰富的专业人员进行操作，然后进行结果的统计。

1.3 观察指标

统计150 份公共场所人工水环境标本的军团菌检出情况，统计军团菌检出率，对检出军团菌型别构成进行统计及比较，同时分析不同水样（空调冷却水、淋浴水、供水水箱及喷泉水）、场所（医疗单位、宾馆酒店、商场超市及娱乐场所）、菌落总数（＜104cfu/ml及≥104cfu/ml）及季节（春季、夏季、秋季及冬季）的军团菌检出情况。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0 统计学软件进行数据分析。计数资料以例数或百分比表示，采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 150 份公共场所人工水环境标本军团菌检出情况比较

150 份公共场所人工水环境标本共有检出43 份军团菌，检出率为28.67%，40 份检出单一型别，3 份检出混合型别，其中嗜血军团菌的检出率显著高于非嗜血军团菌，且Lp1 型占比高于其他型别，单一型别占比高于混合型别，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。混合检出共3 份，分别为Lp1 型别与Lp7 型别、Lp1 型别与Lp5 型别及Lp1 型别与Lp6 型别混合。

表1 150 份公共场所人工水环境标本军团菌检出情况比较（n=150）

2.2 不同水样的军团菌检出情况比较

空调冷却水水样本的军团菌检出率高于其他水样的检出率，差异有统计学意义（P＜0.017）；而淋浴水、供水水箱及喷泉水水样本的军团菌检出率比较，差异无统计学意义（P＞0.017）。见表2。

表2 不同水样的军团菌检出情况比较[例（%）]

2.3 不同场所水标本的军团菌检出情况比较

医疗单位水样本的军团菌检出率高于其他场所的检出率，差异有统计学意义（P＜0.017）；而宾馆酒店、商场超市及娱乐场所水样本的军团菌检出率比较，差异无统计学意义（P＞0.017）。见表3。

表3 不同场所水标本的军团菌检出情况比较[例（%）]

2.4 不同菌落总数水标本的军团菌检出情况比较

不同菌落总数样本的军团菌检出率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表4。

表4 不同菌落总数水标本的军团菌检出情况比较[例（%）]

2.5 不同季节水标本的军团菌检出情况比较

夏季水样本的军团菌检出率高于其他季节的检出率，差异有统计学意义（P＜0.017）；而春季、秋季及冬季水样本的军团菌检出率比较，差异无统计学意义（P＞0.017）。见表5。

表5 不同季节水标本的军团菌检出情况比较[例（%）]

2.6 不同地点的军团菌检出情况比较

郊区水样本的军团菌检出率高于市区的检出率，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表6。

表6 不同地点的军团菌检出情况比较[例（%）]

3 讨论

军团菌感染致病的情况在临床多见，其为革兰阴性杆菌，主要为以气溶胶为载体的形式感染致病，可导致肺损伤等情况的发生，其中又以嗜肺军团菌致病情况相对更为多见，故其是临床重点防控的致病菌群之一[7-8]。临床中与军团菌感染及防控相关的研究多见，而对于其早期的防控是感染发生的重要基础与前提。因此，对于军团菌污染情况的研究意义与需求较高。土壤与水源作为军团菌存在与滋生的重要环境场所，其是研究的重点[9-11]，而人工水环境是重点监测且研究较多的方面。临床中关于公共场所人工水环境中军团菌污染情况的研究多见，而众多相关研究显示，不同时间及地点的公共场所人工水环境军团菌感染情况存在一定差异[12-14]，因此对于特定地点不同时间的军团菌污染情况的研究及监测意义较高。另外，不同型别军团菌的检出情况可受多方面因素影响，且不同型别军团菌的传播力及致病力存在一定差异[15-17]，因此对军团菌型别的鉴别需求较高。

本研究探讨山东省烟台市公共场所人工水环境中军团菌污染情况调查及其病原型别，结果显示，150份公共场所人工水环境标本共有43 份检出军团菌，检出率为28.67%，且主要为检出单一型别，仅有3 份检出混合型别，且嗜血军团菌的检出为主，且以Lp1 型占比高于其他型别（P＜0.05），同时不同菌落总数样本的军团菌检出率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），而空调冷却水、医疗单位、夏季及郊区水样本的军团菌检出率高于其他水样、场所及季节的检出率（P＜0.017）。因此认为人工水环境的军团菌污染情况仍较为明显，需进一步加强监测与防控。而本研究中的军团菌仍以嗜血军团菌Lp1 型为主，提示其是重点监测与防控的菌群；再者，空调冷却水、医疗单位及夏季的检出率较高，提示上述场所、季节及地点可能是军团菌感染的危险因素，应重视上述因素的防控、监测与干预[18-20]；而不同菌落总数样本的军团菌检出情况比较，差异无统计学意义（P＞0.05），则提示菌落总数对军团菌污染的影响并不显著，这与既往研究存在一定一致性[21-22]，因此应全面监测不同公共场所的军团菌污染情况。鉴于上述情况的存在，对某市公共场所人工水环境军团菌的进一步细致且全面的监测意义与需求加高[23-26]。另外，国内关于军团菌的众多防治与管理规定均显示，公共场所的水系统是军团菌滋生与繁殖的最为突出方面与问题，与军团菌易于在淡水中存活等有关，同时其人工水环境中的水较多存在流动较差等情况，更易于军团菌在此类水体中的生存，而军团菌污染的水体形成的气溶胶可导致吸入者感染，因此国内对于公共场所人工水环境的军团菌监测的重视程度极高。万博宇等[12]研究显示，不同场所的水标本军团菌检出率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），其中医院的检出率为33.3%，而本研究则显示医疗单位的检出率（43.94%）相对较高，提示不同地区的不同场所可能存在一定差异；而林锦忠等[4]研究显示，不同月份的检出率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），而本研究中则显示，夏季的检出率（46.67%）高于其他季节，可能与夏季的水温度（25～45℃）更适合军团菌的生长有关，而不同地区的季节及水环境温度存在一定差异，导致不同地区的季节影响作用存在差异，而这进一步提升了针对特定城市地区进行研究的意义与需求。

综上所述，山东省烟台市公共场所人工水环境中军团菌污染情况较为突出，单一型别占比较高，且空调冷却水、医疗单位、夏季及郊区水样本的军团菌检出率相对更高，可作为干预与防控措施制订的参考依据。