复方乳酸乳膏的处方优化及质量考察

肖 琴，朱海游，刘 欣，熊景辉，罗甘树，黄 琨

湖北丽益医药科技有限公司，抗病毒药物湖北省重点实验室，湖北 武汉 430205

寻常型鱼鳞病和手足皲裂症是皮肤科常见病，主要表现为皮肤干燥、角化、脱屑、皲裂等，可伴有疼痛及不同程度瘙痒［1］，容易并发手足皲裂症［2］。寻常型鱼鳞病主要是角质层潴留严重，很可能与脱屑过程受损及外角质层内桥粒异常存留密切相关［3］。手足皲裂症主要临床症状为皮纹出现深浅程度不同、长度不同的裂隙，碰触有痛感，通常还伴有出血现象［4］。寻常型鱼鳞病和手足皲裂症在临床上的治疗主要是通过抑制角质剥脱、增生为主，在促进角质层水分保留后，使皮肤恢复正常的润泽度［5-6］。采用药物治疗主要是通过增加角质层水合能力，促进角化正常，使皮肤润泽［7］。复方乳酸乳膏的治疗效果显著，且治疗后安全性高，无明显不良反应情况，患者耐受性较佳［8］。主要作用机制是促进角化、增强角质层的水合作用，促使皮肤滋润、角化正常。复方乳酸乳膏是一种油包水型乳膏制剂，主要成分为乳酸和尿素。乳酸属于一种α-羟基酸，通过抑制离子键形成酶，使角质层细胞和角质形成细胞的带正、负电荷基团间的相互吸引力减弱，从而降低角质层细胞间的内聚力，使增厚的角质层脱落、变薄［9］。尿素是一种无毒、无刺激性、无致敏性的物质。其药理是多方面的，具有抗菌、使蛋白质溶解和变性以及增加蛋白质的水合作用，并可促进皮肤穿透性，软化角质层，促进药物经皮吸收，止痒、抗菌和抗癌等，从而使皮肤柔软、防止干裂［10-13］。尿素是一种存在于表皮的吸湿分子，是天然保湿因子的组成部分，对角质层的充分水合作用和完整性至关重要［14］。人体可通过特异性尿素转运蛋白和水-甘油跨膜运输蛋白通道机制吸收尿素［15］。研究表明，尿素和乳酸合用可显著增加疗效，在对寻常型鱼鳞病与手足皲裂患者的治疗中应用复方乳酸软膏进行治疗能够明显改善临床症状且不会产生明显的不良反应，疗效确切［16］。

研究发现，本品乳酸的有效浓度一般为8%～12%，在制剂中加入一定量的氨水，可加快角质层水分的吸收，促使水合作用增加［17］。现行复方乳酸乳膏处方中多含有油酸成分，但通常会导致产品热稳定性差、易加热分解的质量问题。实验优化了复方乳酸乳膏处方，并进一步对其质量进行了考察从而解决了现有技术中复方乳酸乳膏存在的质量问题，且处方中未添加防腐剂成分，副作用小，具有更好的安全性。

1 实验部分

1.1 仪器及试药

1.1.1 仪 器 BME100LX 型实验室乳化机（上海全简机电有限公司），FE28 型pH 计（METTLER TOLEDO），TG16A 型高速离心机（上海卢湘仪离心机仪器有限公司），安捷伦7890A 气相色谱仪，UV-2550 型紫外分光光度计，TD20002 型电子天平。

1.1.2 试 药 乳酸（无锡福祈制药有限公司，批号：20120304）、尿素（湖南芙蓉制药有限公司，批号：120306）、浓氨溶液（南京化学试剂股份有限公司，批号：20130117）、硬脂酸聚烃氧（40）酯（南京威尔药业集团股份有限公司，批号：20140207）、胆固醇（南京新百药业有限公司，批号：140403）、单硬脂酸甘油酯（江西阿尔法高科药业有限公司，批号：20140405）、白凡士林（湖南尔康制药股份有限公司，批号：100120121004）、甘油（湖南尔康制药股份有限公司，批号：20140210）。

1.2 方 法

1.2.1 复方乳酸乳膏的制备方法 将白凡士林、胆固醇、单硬脂酸甘油酯混合后，加热至80 ℃，并搅拌混匀，即得到油相。然后将乳酸，纯化水搅拌混合成均一溶液，再加入浓氨溶液，搅拌混合均匀，再加入甘油、硬脂酸聚烃氧（40）酯、尿素，加热至80 ℃，然后搅拌溶解，即得到水相。在搅拌条件下，将水相加入油相中，均质乳化30 min，将所得混合溶液继续搅拌冷却至冷凝成膏。

1.2.2 复方乳酸乳膏的质量评估方法 （1）外观性状：乳白色乳膏，质地均匀细腻，粘稠度适中，易于涂布。（2）离心试验：取复方乳酸乳膏适量于离心管中，3 000 r/min 离心30 min 后观察乳膏是否分层。（3）冷热循环试验：取灌装好的乳膏先置于冰箱保鲜室（4~10 ℃）内2 d 后再转移至40 ℃烘箱中放置2 d 为1 个冷热循环，试验共循环3 次，冷热循环结束后将样品在3 000 r/min 离心30 min，观察乳膏是否分层。（4）乳酸含量测定：取乳酸对照品0.3 g，精密称定，置50 mL 量瓶中，用体积分数为60%的乙醇溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL，置10 mL 量瓶中，精密加入硫酸1 mL和乙醇5 mL，振摇1 min，置60 ℃水浴中1 h，取出，冷却，加体积分数为60%的乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL，置具塞离心管中，加水1 mL，精密加入三氯甲烷3 mL，振摇1 min，静置分层，取下层三氯甲烷溶液，即得对照品溶液。取本品适量（约相当于乳酸0.3 g），精密称定，加体积分数为60%的乙醇溶液30 mL，于60 ℃热水中超声处理约20 min，趁热转移至50 mL 量瓶中，用体积分数为60%的乙醇适量洗涤器皿并转移至量瓶中，放冷，加体积分数为60%的乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 mL，照对照品溶液制备项下的方法，自“置10 mL 量瓶中”起同法操作，即得供试品溶液。取乳酸乙酯适量，加三氯甲烷制成每1 mL 中约含5 mg 的溶液，取1µL 注入气相色谱仪，定位乳酸乙酯峰。取对照品溶液与供试品溶液各2 µL，分别注入气相色谱仪，测定，按外标法以峰面积计算，即得。（5）尿素含量测定：取尿素对照品0.3 g，精密称定，置100 mL 量瓶中，加体积分数为60%的乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10 mL，置100 mL 量瓶中，加体积分数为60%的乙醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取本品适量（约相当于尿素0.3 g），精密称定，加体积分数为60%的乙醇30 mL，置60 ℃水浴中超声处理，搅拌使尿素溶解，放冷，移入100 mL 量瓶中，加体积分数为60%的乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，置100 mL 量瓶中，加体积分数为60%的乙醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。精密量取供试品溶液和对照品溶液各5 mL，分别置25 mL 量瓶中，各精密加入质量分数为2%的对二甲氨基苯甲醛溶液（取对二甲氨基苯甲醛2 g，加乙醇94 mL 及盐酸6 mL，混匀）10 mL，加体积分数为60%的乙醇稀释至刻度，摇匀，另精密量取质量分数为2% 的对二甲氨基苯甲醛溶液10 mL，置25 mL 量瓶中，加体积分数为60%的乙醇至刻度，摇匀，作为空白，暗处放置30 min 后，照紫外-可见分光光度法，在420 nm 的波长处分别测定吸光度，计算，即得。

1.2.3 处方初步筛选 通过初步筛选实验，胆固醇、单硬脂酸甘油酯、硬脂酸聚烃氧（40）酯、白凡士林是决定复方乳酸乳膏稳定性的主要因素，采用L9（34）正交设计实验优化处方中胆固醇（A）、单硬脂酸甘油酯（B）、硬脂酸聚烃氧（40）酯（C）、白凡士林（D）的用量，见表1。

表1 正交设计L9（34）因素水平Tab.1 Factor levels of orthogonal design L9（34）

2 结果与讨论

2.1 处方优化

正交试验是一种从大量的实验数据中挑选适量的、有代表性的数据进行测试的实验设计方法［18］。按照L9（34）正交设计试验，共9 个处方，每个处方总量为100 g，按照1.2.2 项下复方乳酸乳膏的质量评估方法进行综合评分，考察指标综合评分表见表2。

表2 处方优化考察指标综合评分表Tab.2 Comprehensive scores of evaluation indices of formulation optimization

正交设计表中极差R值越大对试验结果影响越大，均值k值最大者为最佳因素，正交试验设计结果见表3。

表3 处方正交试验设计与结果Tab.3 Orthogonal design and results of formulation

根据表3 结果，通过极差分析得出最佳处方为A2、B3、C3、D2，即胆固醇的质量分数为2% 、单硬脂酸甘油酯的质量分数为8%、硬脂酸聚烃氧（40）酯的质量分数为5%、白凡士林的质量分数为30%，各因素对复方乳酸乳膏质量影响顺序：硬脂酸聚烃氧（40）酯（C）＞胆固醇（A）＞单硬脂酸甘油酯（B）＞白凡士林（D）。

根据处方优化结果，确定的最佳处方见表4。根据所得最优组合制备3 批样品进行验证，实验中观察到最终制备得到的乳膏外观均匀细腻，涂展性良好，无分层现象。

表4 最佳处方Tab.4 Best formulation

2.2 质量控制

2.2.1 性状 本品外观为乳白色乳膏，质地均匀细腻，粘稠度适中，易于涂布。

2.2.2 微生物限度 根据2020 版《中国药典》四部通则1105［19］进行微生物限度检查，未检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌，需氧菌总数＜103cfu/g，霉菌和酵母菌总数＜102cfu/g，符合要求。

2.2.3 pH 值 取本品10.0 g，加水20 mL，置水浴上加热搅拌至溶解，放冷，依法测定（中国药典2020 版二部附录ⅥH）［19］，应为4.0~6.0。结果测得3 批乳膏pH 值分别为4.5、4.6、4.5，符合要求。

2.2.4 乳酸含量测定 本品含乳酸（C3H6O3）应为标示量的90.0%~110.0%。结果3 批自制复方乳酸乳膏的乳酸含量分别为标示量的99.8%、100.1%、99.4%，均符合标准规定。

2.2.5 尿素含量测定 本品含尿素（CH4N2O）应为标示量的90.0%~110.0%。结果3 批自制复方乳酸乳膏的尿素含量分别为标示量的98.8%、99.4%、99.7%，均符合标准规定。

2.2.6 稳定性试验 取制备好的复方乳酸乳膏成品3 批，分别进行1、2、3、6 个月的加速（40 ℃）和长期（25 ℃）稳定性试验，考察性状、pH 及含量变化等，结果未见酸败、变色、分层等，性状、pH 值及含量均符合要求，且未见明显变化。说明复方乳酸乳膏的稳定性良好。

3 结 论

本文采用硬脂酸聚烃氧（40）酯作为乳化剂，经过正交实验［20］筛选确定了乳膏处方组成，通过正交设计直观分析和方差分析法得出的最佳处方为胆固醇的质量分数为2%、单硬脂酸甘油酯的质量分数为8%、硬脂酸聚烃氧（40）酯的质量分数为5%、白凡士林的质量分数为30%，成功优化了复方乳酸乳膏处方。内含有质量分数为6%的浓氨溶液、质量分数为15%的尿素和质量分数为12%的乳酸，能有效抑制表皮增长，角质脱落后，使角质层有水合作用，滋润肌肤，起到止痒和止痛良好效果。制成的乳膏外观均匀细腻，黏稠度适宜，且具有较好的黏附性和涂展性。处方中未添加防腐剂成分，副作用小，具有更好的安全性。乳膏成品的性状、微生物限度、pH 及含量均符合本品质量标准要求，制剂稳定性实验显示，6 个月考察期内，在各放置条件下乳膏样品未见分层现象，含量没有明显变化，考察结果表明优化后处方制备的复方乳酸乳膏样品内部结构较为稳定，说明本制剂稳定性良好，处方合理可行，产品质量稳定可控，解决了现有技术中乳膏热稳定性差、易加热分解的技术问题，并具备进一步工业化生产条件。