仔猪病毒性腹泻病原检测与分析

●苑 彬

（河北省廊坊市安次区农业农村局 河北 廊坊 065000）

经国内外相关研究表明，引起不同日龄仔猪腹泻因素很多，如病原因素（病毒、细菌和寄生虫），养殖场环境因素（温度、湿度、采光），饲养管理技术因素（饮水、饲料）及外界环境应激（断奶、转群、换料）等。仔猪病毒性腹泻可引起仔猪的生长性能下降、免疫力降低、腹泻、肠道感染等一系列的临床症状，严重时可导致其死亡，给我国生猪养殖业造成严重的经济损失[1-2]。临床中常见的引起仔猪病毒性腹泻的病原有PEDV、TGEV、PorV、PDCoV 4种，可引起仔猪病毒性腹泻以厌食、呕吐、水样腹泻及严重脱水，传染性强、死亡率较高，采用实验室诊断方法可进行鉴别诊断，如病理学观察、免疫学诊断及分子生物学诊断[3-5]。病毒性腹泻对仔猪的危害较大，因此，采用实验室诊断方法（RT-PCR）对仔猪病毒性腹泻病毒的区别诊断具有重要意义。

2020～2022年在河北廊坊安次区仔猪规模化养殖场及散养户采集患腹泻病仔猪粪便、肠内容物及内脏病料组织总计1508份，进行PEDV、TGEV、PorV、PDCoV 4种病毒性腹泻病原检测，并开展4种病毒性腹泻病流行病学调查，对该地区仔猪4种病毒性腹泻病综合防控具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 病料来源

2020～2022年采集河北廊坊安次区规模化养殖场及散养户患腹泻病仔猪粪便、肠内容物及其他内脏病料组织1508份，其中2020年采集病料样品461份、2021年采集病料样品494份，2022年采集病料样品553份（表1）。

表1 样品采集统计结果

1.2 试验方法

1.2.1 病料的处理与核酸的提取 将采集的病料加入等量、无菌的PBS进行研磨，高速离心（12 000 r/min，10 min），取上清分装，-80℃反复冻融3次。参照组织RNA提取试剂盒，提取病料组织中病毒RNA，反转录为cDNA，-80℃保存备用。

1.2.2 引物设计与RT-PCR检测 参照文献[6]报道的PEDV、TGEV、PorV、PDCoV 4种病原鉴定引物（表2），在生工生物工程（上海）股份有限公司合成，以本文“1·2”节中反转录的cDNA为模板，进行PCR扩增。PCR产物经1·0% 琼脂糖凝胶电泳检测判定其结果，并分析其感染率。

表2 引物序列

2 结果与分析

2.1 仔猪4种病毒性病原的检测结果

对2020～2022年采集河北廊坊安次区区仔猪规模化养殖场及散养户中患腹泻仔猪粪便、肠内容物及其他内脏病料组织总计1508份样品进行处理，并提取组织RNA，反转录成cDNA，用RT-PCR方法检测PEDV、TGEV、PorV、PDCoV 4种病原，结果见图1。用RT-PCR方法对采集的样品可扩增出PEDV、TGEV、PorV、PDCoV 4种病原目的基因条带（231 bp，342 bp，309 bp，1100 bp），与预期大小一致。

图1 仔猪样品中的PEDV、TGEV、PoRV、PDCoV PCR检测结果

2.2 仔猪4种病毒性病原的阳性率检测结果

2020～2022年采集的1508份样品，包括2020年采集病料样品461份、2021年采集组织样品494份，2022年采集组织样品553份，对采集的样品采用RT-PCR方法检测PEDV、TGEV、PorV、PDCoV 4种病原，分析4种病原阳性率，统计感染情况。由表3可知，2020～2022年共计采集1508份样品，检测的PEDV、TGEV、PorV和PDCoV阳性率分别为11·00%，7·03%，2·98%，2·59%，其中PEDV和TGEV阳性率较高，且呈现逐年上升的趋势。

表3 不同种类猪感染病原的检测结果

3 讨论与结论

仔猪病毒性腹泻病是养猪业中常见疾病之一，临床中常见的病毒性病原主要包括PEDV、TGEV、PorV和PDCoV，仔猪的感染率和死亡率均较高，且在临床中症状相似，不易区分[6]。有研究表明，RT-PCR是检测仔猪病毒性腹泻病最有效的检测方法，该方法便于操作、灵敏度高、假阳性率低，并且适用于规模化养殖场的检测。本试验研究表明，用RT-PCR方法对采集的样品可扩增出PEDV（231 bp）、TGEV（342 bp）、PorV（309 bp）、PDCoV（1100 bp），与预期大小一致；经分析，采集1508份样品中PEDV、TGEV、PorV和PDCoV阳性率分别为11·00%、7·03%、2·98%和2·59%，其中PEDV和TGEV阳性率较高，且呈现逐年上升的趋势。说明该地区规模化养殖场及散养户中PEDV和TGEV流行严重，应引起注意，定期进行检测和对仔猪进行PEDV和TGEV疫苗接种，进行有效的综合防控。