类风湿关节炎患者血清IL-35、MMP-3、TIMP-1水平变化与免疫功能的关系研究

杨瑜 吴洁

（新乡市中心医院 1.检验科；2.风湿免疫科 新乡 453700）

类风湿关节炎是临床常见的自身免疫性疾病，晚 期可侵犯多个系统，有较高的致残率及死亡率[1]，早诊断、优化治疗是改善患者预后的关键。类风湿因子（rheumatoid factor, RF）、抗环瓜氨酸肽（anti-cyclic citrullinated peptide, anti-CCP）抗体是类风湿关节炎的主要抗体，但存在假阳性及假阴性，特异性相差较大[2]。因该病呈持续的炎症反应，T 细胞浸润滑膜为主要病理改变，探讨免疫炎症反应成为类风湿关节炎的主要研究方向。白介素-35（interleukin-35, IL-35）是一种新型的抑制性细胞因子，在调节性T 细胞调控免疫反应以及炎症进展中占据着重要作用[3]。基质金属蛋白酶-3（matrix metalloproteinase-3, MMP-3）是一种可破坏胶原及降解关节软骨的蛋白酶，在骨破坏过程中发挥重要作用；组织金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitor of matrix metalloproteinases-1, TIMP-1）是MMPs 的主要生理抑制剂，具有促进细胞增殖、调节细胞存活及凋亡等作用[4]。本研究分析类风湿关节炎患者IL-35、MMP-3、TIMP-1水平，并探讨与免疫功能的相关性，旨在探寻可有效诊断疾病的指标，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

将2020 年1 月—2022 年10 月我院诊治的80 例类风湿关节炎患者纳入观察组，其中男27 例，女53 例；年龄35 ～75 岁，平均（62.73±4.15）岁；病程6 个月～10年，平均（4.82±1.08）年；处于疾病活动期32 例，稳定期48 例。另将80 例健康志愿者纳入对照组，其中男30 例，女50 例；年龄35 ～78 岁，平均（63.10±4.27）岁。两组一般资料对比差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

纳入标准：①观察组患者符合类风湿关节炎的诊断标准[5]；②对照组身体状况良好，无关节炎等病症。

排除标准：①伴强直性脊柱炎、骨关节炎、痛风等患者；②伴恶性肿瘤、心脑血管疾病；③凝血障碍、自身免疫缺陷者；④并发哮喘、呼吸功能不全、慢性感染者；⑤近期服用影响实验室检查指标的药物者。

1.2 方法

两组受检者均在入院当天晨起采集空腹静脉血5 mL，对血液样本离心处理10 min，转速3 000 r/min。采集离心后的上清液，置于-80 ℃冰箱内待检。采用酶联免疫法检测IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平，相关试剂盒由深圳晶美生物技术有限公司提供，在450 nm 波长下测定吸光度，经标准曲线计算相关指标浓度。

将保存的上清液标本取出后采用免疫发光法测定免疫球蛋白（immunoglobulin, Ig）A、IgG、IgM 及补体C3、补体C4 等免疫功能水平，试剂盒由美国Epitope Diagnostics 公司生产。

1.3 观察指标

①比较两组受检者的血清IL-35、MMP-3、TIMP-1水平以及IgA、IgG、IgM、补体C3、补体C4 水平。②比较类风湿关节炎不同分期患者血清IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平以及IgA、IgG、IgM、补体C3、补体C4水平，采用28 项关节疾病活动度（disease activity score 28, DAS28）[6]评分。缓解期：DAS28 评分＜2.8 分；活动期：DAS28 评分≥2.8 分。③分析IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平与免疫功能指标的相关性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 26.0 进行统计分析，计数资料以n（%）表示，采用χ2检验；计量资料以±s表示，采用t检验，两指标之间的相关性采用Pearson 相关性分析。P＜0.05提示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 比较两组受检者血清相关指标及免疫功能指标

观察组血清IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平均高于对照组，免疫功能指标IgA、IgG、IgM 水平高于对照组，补体C3、补体C4 水平低于对照组（表1，P＜0.05）。

表1 两组血清相关指标及免疫功能指标（±s）

表1 两组血清相关指标及免疫功能指标（±s）

组别 观察组（n ＝80）对照组（n ＝80） t 值 P 值IL-35/(pg·mL-1)151.24±38.86 45.27±6.35 24.071 ＜0.001 MMP-3/(ng·mL-1)85.43±12.74 28.76±4.18 37.803 ＜0.001 TIMP-1/(μg·L-1)142.20±12.27 73.53±6.53 44.189 ＜0.001 IgA/(g·L-1) 3.68±0.48 2.08±0.21 27.315 ＜0.001 IgM/(g·L-1) 2.07±0.41 1.40±0.23 12.747 ＜0.001 IgG/(g·L-1) 17.53±2.16 12.73±1.08 17.778 ＜0.001 C3/(g·L-1) 1.05±0.11 1.40±0.15 16.83 ＜0.001 C4/(g·L-1) 0.12±0.08 0.38±0.09 19.312 ＜0.001

2.2 比较类风湿关节炎不同分期患者血清相关指标及免疫功能指标

80 例类风湿关节炎患者中，活动期血清IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平和IgA、IgG、IgM 水平均高于稳定期，补体C3、补体C4 水平低于稳定期（表2，P＜0.05）。

表2 类风湿关节炎不同分期患者血清相关指标及免疫功能指标（±s）

表2 类风湿关节炎不同分期患者血清相关指标及免疫功能指标（±s）

组别 活动期（n ＝32）稳定期（n ＝48） t 值 P 值IL-35/(pg·mL-1)185.73±41.08 132.06±36.72 6.106 ＜0.001 MMP-3/(ng·mL-1)98.83±15.10 68.73±10.27 10.622 ＜0.001 TIMP-1/(μg·L-1)168.73±21.43 129.63±18.20 8.765 ＜0.001 IgA/(g·L-1) 4.18±0.08 3.18±0.06 63.828 ＜0.001 IgM/(g·L-1) 2.31±0.07 1.98±0.05 24.604 ＜0.001 IgG/(g·L-1) 20.10±1.08 16.37±1.01 15.74 ＜0.001 C3/(g·L-1) 0.91±0.05 1.21±0.03 33.542 ＜0.001 C4/(g·L-1) 0.10±0.01 0.21±0.03 19.978 ＜0.001

2.3 相关性分析

采用Pearson 相关性分析，血清IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平与IgA、IgG、IgM 呈正相关性，与补体C3、补体C4 呈负相关（表3，P＜0.05）。

表3 血清IL-35、MMP-3、TIMP-1水平与免疫功能指标的相关性

3 讨论

类风湿关节炎是一类特发性自身免疫性疾病及慢性炎症性疾病，免疫功能紊乱、炎症反应异常在疾病发生、进展中占据着重要作用。机体免疫功能紊乱，大量致病因子入侵，B 细胞活化，分泌大量抗体，抗体与抗原相结合后形成大量的免疫复合物积聚在关节，从而诱发一系列免疫反应，致组织损伤、滑膜增生及骨关节炎[7]。其中B 淋巴细胞作为细胞共刺激分子，可促使机体产生自身抗原的抗体，导致大量Ig 升高，并激活、消耗补体系统。本研究发现，观察组IgA、IgG、IgM 水平高于对照组，补体C3、补体C4 水平低于对照组，活动期IgA、IgG、IgM 水平高于稳定期，补体C3、补体C4 水平低于稳定期（P＜0.05）。因此，免疫紊乱是类风湿关节炎的主要病理特征，寻找与其密切相关的指标，有助于进行疾病诊断、疗效评估及预后评判。

IL-35 是一种新型细胞分子，归于IL-12 细胞因子家族，可提高T 细胞功能，抑制炎性细胞因子的释放；同时可诱导B 细胞分泌IL-10、IL-35 因子；另外IL-35 也影响了部分促炎性细胞因子的释放，有研究表明，IL-35通过对Th17 细胞的分化的抑制，降低IL-17 表达，发挥了促炎性特征[8]。MMP-3 主要由关节滑膜细胞及软骨细胞产生，当机体滑膜呈炎症反应及增生，滑膜表层细胞会释放大量的MMP-3 并进入关节液内，随后随着血管、淋巴结转移至血液循环[9]。TIMP-1 主要分布在机体体液及组织液内，TIMPs 与MMPs 保持着动态平衡，但在多种疾病患者中，两者平衡被打破[10]。本研究发现，观察组血清IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平均高于对照组，活动期血清IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平均高于稳定期（P＜0.05）。说明类风湿关节炎患者血清IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平呈升高现象，尤其是疾病处于活动期时，其表达增高。其原因是IL-35 主要来源于T 细胞，并通过抑制血管生成，起到调节抗炎症反应的作用；MMP-3 是一种能降解细胞外所有基质的钙、锌蛋白酶，与组织重建、炎症反应、骨吸收、软骨基质降解等密切相关[11]。杨平等[12]研究指出，类风湿关节炎患者血清MMP-3 水平升高，动态监测其变化，可准确评估疾病活动程度。TIMP-1可调节细胞增殖、存活及组织分化，并能抑制血管生成。当患者合并类风湿关节炎后，持续免疫紊乱及炎症反应作用下，会引起关节损伤，为了抑制Th17 分化及炎症反应，体内会释放大量IL-35，使其表达升高；与此同时MMP-3 升高会破坏关节软骨组织，并能激活其他MMP 物质，诱发级联反应，最终加重软骨破坏程度；而为了抑制MMP 物质的释放，TIMPs 相应产生，致其表达升高[13]。

本研究发现，采用Pearson 相关性分析，血清IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平与IgA、IgG、IgM 呈正相关性，与补体C3、补体C4 呈负相关（P＜0.05）。王晓亮等[14]研究发现，血清IL-35、MMP-3 与IgA、IgG、IgM 呈正相关性。崔静等[15]研究指出，MMP-3/TIMP-1 平衡对类风湿关节炎的临床结局有着重要作用。分析原因可能是类风湿关节炎患者存在免疫炎症性损伤情况，IL-35 具有调节免疫系统的作用，直接影响T 淋巴细胞，降低免疫细胞的增殖及分化，致体内免疫系统异常，免疫耐受性丧失，并会促进炎症因子的释放，导致机体免疫功能过度活化；同时MMP-3、TIMP-1 可充分反映机体炎症状态，并起到调节免疫、促进免疫抗体凋亡的作用，当两者之间的平衡被打破，表达异常升高，会抑制机体免疫反应，从而参与到疾病发生、进展。

综上所述，类风湿关节炎患者血清IL-35、MMP-3、TIMP-1 水平呈升高情况，与机体免疫功能密切相关，可能通过影响患者机体免疫功能而促进疾病发生、进展，可作为类风湿关节炎的有效治疗靶点，但其具体机制还需要进一步明确。