河南省第七轮结核病分子诊断技术能力验证结果分析

苏茹月，常文静，王少华，朱岩昆，郑丹薇，孙国清

（河南省疾病预防控制中心,河南 郑州 450016）

《2020 年世界卫生组织结核病报告》[1]显示2019年新发结核病患者996 万，140 万人死于结核病，结核病依然是严危害人民群众健康的全球头号传染病杀手之一。为进一步提高肺结核病原学阳性率，发现更多的结核病患者，除了提升传统的实验室结核病检测技术，还需要不断研发新的肺结核诊断技术和检测方法。近年来我省及省外专家评估和应用了多种结核病和耐药结核病的分子检测方法[2-7]，为规范各种新型结核病检测技术，国家结核病参比实验室组织开展第七轮全国分子诊断技术能力验证，河南省疾控中心结核病参比实验室根据要求组织省内各级结核病实验室开展分子诊断技术能力验证。现将全省第七轮结核病分子诊断技术能力验证进行分析，有助了解河南省结核病分子诊断能力情况。

1 材料和方法

1.1 受试实验室范围 河南省各级疾控机构、结核病专科医院、定点医疗机构和其他开展分子检测机构共130 家单位参与本次能力验证测试工作。

1.2 测试项目 主要包括基因芯片、熔解曲线技术、半巢式实时荧光定量核酸扩增（GeneXpert）和实时荧光核酸恒温扩增、交叉引物法、实时荧光定量PCR 等方法。

1.3 测试样品 每套测试样品含10 份人工痰样本（经过灭活处理），每个实验室根据实际情况使用一套或多套测试样品。测试样品由国家结核病参比实验室下发到河南省疾控中心结核病参比实验室，再由河南省结核病参比实验室下发到各市县开展分子生物学检测技术的实验室。

1.4 统计分析 各测试单位将测试结果录入EXCLE 数据库，并将录入数据和原始记录报送到河南省结核病参比实验室，省参比实验室将数据汇总，核对后进行分析。

2 结果

2.1 参加单位级别和类型 根据参加单位级别分为省级单位4 家，市级单位21 家，县级结核病实验室105 家；根据参加单位类型分为疾控中心98家，独立结防所13 家，专科医院7 家，定点医院11 家，综合医院1 家。

2.2 技术使用情况 共使用GeneXpert、熔解曲线、实时恒温荧光扩增、交叉引物法、实时荧光定量PCR、基因芯片6 种方法。开展1 种检测技术的为125 家单位，其中105 家为县级单位；二种检测技术的为4 家市级单位；三种检测技术的为1 家省级单位。

2.3 河南省第七轮分子能力验证整体合格率情况全省共130 家单位参加第七轮分子检测能力验证，完成1 360 份质控品测试，并上报测试结果，能力验证合格率为92%（119/130），见表1。

表1 河南省第七轮分子诊断统计分析

2.4 省级和市级检测情况 4 家省级单位，共检测60 份样品；21 家市级单位共检测230 份样品。所有检测项目均通过测试，样品检测错误率为0，见表2。

表2 河南省第七轮分子诊断市级检测情况分析

2.5 县级检测情况 县级105 家实验室进行了能力验证工作，见表3。

表3 河南省第七轮分子诊断县级检测情况分析

2.6 失控原因分析 11 个未通过测试的全为县级单位实验室，失控项目主要集中在恒温荧光扩增方法，见表4。

表4 河南省第七轮分子诊断失控分析

3 讨论

结核病分子诊断技术检测在提高病原学阳性率，发现更多的结核病患者上具有很明显的优势。河南省第七轮分子诊断能力验证市级单位实验室全部通过测试，其中市级使用GeneXpert 和熔解曲线方法最多。GeneXpert 是集核酸提取、扩增、检测一体化的同时并能检测MTB 基因及利福平常见耐药决定区域，检测过程生物安全性较高，不易污染、操作简单、检测时长只需2 h，可用于除血液以外的各种临床标本的检测[8-9]。熔解曲线法可以对利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和氟喹诺酮常见耐药决定区域的检测，并辅助诊断MDR-TB 和XDR-TB[10-11]。交叉引物法和实时荧光定量PCR 法仅能用于诊断结核病，不能用于耐药结核病的诊断。通过本轮数据分析对我省结核病分子诊断技术质量控制工作具有重要指导和改进意义，有效促进我省结核病防治工作开展[13]。

本次能力验证县级使用恒温荧光扩增和GeneXpert 最多，其次是交叉引物法，实时恒温荧光扩增错误率较GeneXpert 高。虽然WHO 推荐使用GeneXpert，但由于GeneXpert 仪器昂贵、试剂成本和维护费用较高在基层的使用受限，而恒温荧光扩增也是一种结核分枝杆菌快速分子诊断技术方法，并且有研究表明恒温荧光法的检测敏感度显著高于痰涂片和罗氏培养法[12]，检测结果与罗氏培养法具有中等程度的一致性，因此恒温荧光扩增法阳性率高、操作简单、耗时短、准确性好，适用于在基层实验室推广使用，对早期结核病的发现具有诊断价值，但是此方法不能用于耐药结核病的诊断。

截止2020 年底，据河南省结核病参比实验室数据统计核查，全省具备分子检测诊断能力的地市级达到100%，县级达到88%。但从本次分子诊断技术能力验证来看，仍有一些问题亟须解决，如对于县级仪器设备相对单一，分子检测项目开展相对较少，对非结核分枝杆菌以及耐药结核病的诊断比较困难以及县级单位实验室分子质控存在不合格现象，因此县级单位实验室需进一步加强自身能力和硬件建设，同时市级也要加大对县级技术指导频次，全省加强对各级结核病实验室分子诊断能力的培训和质量控制，以提高结核病病原学诊断的阳性率和正确诊断率。2021 年是“十四五”开局之年，为终结结核病的流行，分子检测需要不断的更新观念和方法[14]，采取更加符合各地实际情况，更加适宜的技术进行实验室诊断。