围绝经期高脂血症患者ABCB1基因多态性与阿托伐他汀调脂疗效的关系*

刘慧,常宇峰,李静,王颖

(北京市海淀医院1.药剂科;2.心血管内科,北京 100080)

近年来,大量研究提示女性在围绝经期时雌激素水平降低,引发的脂质及脂蛋白代谢改变被认为是导致心血管疾病发病率升高的主要诱因[1-2]。研究表明,绝经后女性血脂异常的发生率显著升高,尤其围绝经期女性的三酰甘油(triacylglycerol,TG)和低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterin,LDL-C)水平显著升高,故冠心病发生率也会相应增加[3]。合理使用降脂药物可有效降低血脂水平,其中动脉粥样硬化心血管疾病一级预防和二级预防的核心策略就提及应用他汀类药物降低血脂并达到目标值。

他汀类药物的作用机制为选择性竞争抑制羟甲戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶,临床上常使用他汀类药物包括阿托伐他汀、瑞舒伐他汀、匹伐他汀、辛伐他汀等[4]。SLCO1B1、ABCB1、CYP3A4、CYP3A5等基因可编码他汀类药物转运、代谢通路上的主要蛋白,因此上述基因的多态性可影响其编码蛋白质的功能,从而产生药物疗效的改变[5]。本研究拟在分析围绝经期高脂血症患者ABCB1基因多态性情况,探讨基因多态性对阿托伐他汀降脂效果的影响。

1 材料与方法

1.1研究对象 选取2019年1—7月就诊于北京市海淀医院心血管内科门诊或住院期间血脂异常的围绝经期患者,年龄46～55岁。血脂异常标准参考2007年《中国成人血脂异常防治指南》,总胆固醇(TC)≥5.18 mmol·L-1或TG≥1.7 mmol·L-1或LDL-C≥3.37 mmol·L-1或高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterin,HDL-C)<1.04 mmol·L-1。排除标准:用药前1个月服用可影响血脂水平的他汀类药物及其他药物(如糖皮质激素、环孢素、利福平、甲氨蝶呤、CYP强效诱导剂或抑制剂、雌激素、孕激素等)患者,以及肝肾功能异常患者。入选患者共80例,并接受阿托伐他汀(每天20 mg)连续治疗8周。本次研究经北京市海淀医院医学伦理委员会审核批准,伦理批件号:2019017。

1.2仪器 荧光检测仪(分子诊断仪)(型号:TL998M,西安天降科技有限公司)。运行软件系统:个体化药学服务支持系统 Microseq,版本号20190312;高速冷冻离心机R18型(北京白洋)。

1.3试药 阿托伐他汀钙片(辉瑞制药有限公司,批号:FF7060,规格:每片20 mg);NH4Cl预处理液(北京华夏时代基因有限公司,批号:20190106);耀金保(核酸纯化试剂):用于在进行SNP分析前对血液、组织标本的保存,北京华夏时代基因有限公司,批号:20190106。耀金分(DNA测序反应通用试剂盒):用于荧光染色原位杂交及染色体核型分析、化学药物用药指导时的样本分析,北京华夏时代基因有限公司,批号:1320190106、6220190106。

1.4血脂的测定 分别在患者服药前以及服药8周后,空腹采集全血标本,测定TC、TG、HDL-C、LDL-C水平,评价调脂疗效。

1.5基因检测 抽取静脉全血(无需空腹)2～3 mL,采集于一次性真空抽血管(DTA抗凝紫帽管)中,并于4 ℃低温保存,保存时间≤2 h。将真空采血管逐一编号并标注患者姓名,依次加入预处理液100 μL、 灭菌注射用水900 μL、血样200 μL,摇匀,静置至澄清。将澄清后样本以3 000 r·min-1离心5 min(r=13.5 cm)。取出离心后样本,吸弃上清液,并用灭菌注射用水洗净沉淀的白细胞。在提取好的白细胞中加入纯化试剂60 μL,振匀,使白细胞全部溶解。取白细胞样本1.5 μL,加至相应测序反应试剂中,放入荧光检测仪中,用等位基因特异性-聚合酶链式反应 (AS-PCR) 检测ABCB1(2677T>G),ABCB1(3435C>T)基因位点,分析基因多态性与ATV降脂疗效的相关性。

1.6统计学方法 采用SPSS 19.0版统计软件进行统计学分析。通过χ2检验分析ABCB1(2677T>G)和ABCB1(3435C>T)各基因型的分布是否符合Hardy-Weinberg平衡,P>0.05表明具有群体代表性。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1患者基本情况 纳入研究的患者平均年龄为(50.62±2.05)岁 。其中合并高血压15例(18.8%),合并糖尿病12例(15.0%),合并冠心病8例(10.0%),TC≥5.18 mmol·L-1者36例(45.0%),TG≥1.7 mmol·L-1者38例(47.5%),LDL-C≥3.37 mmol·L-1者32例(40.0%),HDL-C<1.04 mmol·L-1者44例(55.0%)。

2.2用药前后4项血脂指标的比较 对服用阿托伐他汀前后4项的血脂水平的差值进行正态性检验,结果见表1。用药前后血浆 TC、TG、HDL-C、LDL-C 水平的差值服从正态分布。与用药前比较,用药后血浆 TC、TG 、LDL-C 水平降低,HDL-C 水平升高,与用药前比较均差异有统计学意义 (均P<0.01)。

表1 服用阿托伐他汀前后血脂指标比较

2.3ABCB1基因型分布频率及阿托伐他汀治疗前后ABCB1携带者组间血脂变化比较 入组患者均进行ABCB1(2677T>G,ABCB1(3435C>T)基因检测,基因分布频率见表2。结果显示ABCB1(2677T>G),ABCB1(3435C>T)基因突变频率分别为60%和62%,各基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05),表明本研究人群各基因型已达到遗传平衡,具有群体代表性。

表2 ABCB1基因型分布频率及不同ABCB1携带者治疗前后血脂变化比较

入组患者治疗前后各脂质变化率结果见表2。结果表明,不同基因型患者血清TG、TC和HDL-C血脂的变化率差异无统计学意义;本研究结果显示ABCB1(2677GG)基因型的携带者相比ABCB1(2677TT)基因型患者对血脂LDL-C呈现显著降低,提示ABCB1(2677GG)基因型可能提高对阿托伐他汀的转运能力,服用常规剂量阿托伐他汀时,在作用位点能够达到有效浓度,有效降低血脂。

3 讨论

1994年世界卫生组织提出:妇女绝经前后包括约从 45 岁开始直至停经后1年内时期,常见于45～55 岁。女性在绝经前雌激素可提高血管弹性和降低血压,并有效调节血脂,使血管不容易发生硬化和阻塞,但步入围绝经期,其卵巢的功能会出现衰退而导致体内雌激素水平下降,导致体内脂质及脂蛋白的代谢紊乱处于加速期,常易引起高脂血症的发生[3]。雌激素可以使LDL-C、TG保持低水平,使 HDL-C 保持高水平。研究表明,雌二醇与肝细胞受体结合能够激活影响脂质代谢的酶,通过上调 LDL-C 受体促进残余 LDL-C 的吸收,加速肝脏胆固醇向胆汁酸的转化,从而使LDL水平下降[6];但是雌二醇减少会导致HDL-C水平下降,从而增加冠心病的发病风险[7]。且血脂异常管理的指南建议考虑将他汀类药物用于冠心病风险升高的妇女的一级预防[8],阿托伐他汀作为临床常用的降脂药物之一,在不同人群中应用阿托伐他汀降脂效果存在显著差异,尤其是影响其转运和代谢的编码基因SLCO1B1、ABCB1等,可导致其降脂效果的出现个体化差异[5]。

ABCB1基因又称多耐药基因(multidrug resistance,MDR1),其编码产物为肠道外排转运体P-糖蛋白(P-gp)[9]。该转运体可主动降低药物的吸收,故是影响药物在体内生物利用度的重要原因之一。ABCB1基因发生突变,可造成P-gp功能缺陷或表达异常,从而干扰药物在体内的代谢,导致他汀类药物降脂疗效的差异;同时其也与使用后的不良反应发生相关[10]。ABCB1基因在不同种族人群中至少超过50个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)[11]。有研究表明在不同的种族人群中有3种SNPs被认为能够影响ABCB1基因功能,其编码区域包括:C1236T、G2677T/A和 C3435T[12]。

目前ABCB1(G2677T/A)基因多态性与他汀类药物降脂疗效是否相关存在分歧。部分研究提示ABCB1(G2677A/T)多态性与他汀类药物降脂作用无明显相关[13-14],同时一项荟萃分析的结果提示不能认为ABCB1(G2677T/A)的多态性与血脂水平及他汀类药物降脂效应有关[15]。而一些研究则发现ABCB1(G2677A/T)多态性与他汀类药物降脂作用有关。THOMPSON等[16]研究表明在使用阿托伐他汀治疗患者中,检测到ABCB1(2677G>T/A)位点GG型患者其体内LDL-C水平的下降程度较TT型患者高3%,而TC水平的下降程度比TT型患者高2%。一项针对中国人群的研究发现携带ABCB1(2677GG)型患者口服阿托伐他汀后,其体内LDL-C的调节作用明显高于同一位点的其他基因型患者[17]。本次研究的结果与上述报道一致,表现为ABCB1(2677GG)基因型的携带者相比ABCB1(2677TT)基因型患者对血脂LDL-C呈现显著降低。这也提示在围绝经期高脂血症患者中ABCB1(2677GG)基因型提高对阿托伐他汀的转运能力,故在正常口服剂量时,该作用位点就可达到有效的血药浓度,发挥降脂功能。

有研究发现ABCB1(3435 C>T)基因型对阿托伐他汀药效的作用研究结果不尽相同。ALZOUBI等[18]研究表明在ABCB1(2677 G>T/A)和(3435 C>T)多态性中,携带TT基因型患者在经阿托伐他汀治疗后,其体内LDL-C水平相较于其他基因型患者更低。SHABANA等[19]研究显示携带ABCB1(3435TT)纯合子的患者,其体内HDL-C的基线水平和接受治疗后水平显著高于野生型CC的患者。上述结论均提示ABCB1(3435 C>T)突变可增强阿托伐他汀的降脂作用。同时有研究表明,在女性高脂血症患者中,ABCB1(3435 C>T)与阿托伐他汀的调脂疗效相关。在服用阿托伐他汀后,携带CC基因型患者的LDL-C下降幅度最小,而各基因型HDL-C升高的幅度依次为CC>CT>TT[13]。我国也有研究发现,ABCB1(3435 C>T)基因多态性与阿托伐他汀血药浓度及其疗效无关[20]。在本研究中发现,服用阿托伐他汀的围绝经期高脂血症患者中,其ABCB1(3435 C>T)位点的基因多态性与阿托伐他汀降脂疗效无关。

阿托伐他汀对在围绝经期高脂血症患者降脂作用已得到肯定,但由于基因多态性等多种因素的影响,从而造成个体化差异。本研究由于研究样本量偏少,且为单中心研究,故不能代表全部围绝经期高脂血症人群,后期还需更多的样本量结合近一步的临床研究进行验证。