自制异常值血脂复合质控品

吴薇,刘波,王慧娟(.中国人民解放军联勤保障部队第904医院检验科,江苏无锡4000;.连云港市第一人民医院检验科,江苏连云港00;.江苏阔乐生物科技有限公司研发部,南京000)

血脂检测在高脂血症诊断、疗效判断以及心脑血管病危险因素预测等方面发挥重要作用。开展室内质控,质控品的选择尤其重要。目前,商业化的血脂质控品已经有多个品牌,但多数在脂蛋白(a)[lipoprotein(a),Lp(a)]数值上达不到异常值要求,国内关于自制血脂质控品的报道较少。本研究用体检健康者混合血清通过聚乙二醇(PEG)沉淀脂蛋白方法[1]制备异常值质控品,取得较为满意结果,报道如下。

1 材料和方法

1.1主要仪器和试剂 迈瑞BS450全自动生化分析仪及配套高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、载脂蛋白A1(apoA1)、载脂蛋白B(apoB)、Lp(a)试剂盒购自深圳迈瑞公司。聚乙二醇6000(PEG6000)、海藻糖(罗恩试剂公司),0.2 mol/L pH 7.38磷酸盐缓冲液,牛血清清蛋白(新西兰Prollat公司),葡萄糖(成都科隆化学品公司),Proclin 300防腐剂(美国Sigma公司)。

1.2材料来源 收集中国人民解放军联勤保障部队第904医院医院健康体检中心体检健康者血清标本,混匀,人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体、丙型肝炎病毒(HCV)抗体、乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)均阴性。

1.3制备方法 (1)混合血清400 mL中加PEG6000 32 g,充分溶解混匀后4 ℃放置24 h,800×g离心30 min,弃上清液,向沉淀中加入生理盐水40 mL,震荡混匀使沉淀溶解,即成浓缩质控液。(2)依据浓缩质控液中浓度与健康人血清混合而成水平2作为异常值质控品,水平1质控为健康人混合血清。向配制好的质控液中加入5%～10%海藻糖、质控液体积1/10的0.2 mol/L pH 7.38磷酸盐缓冲液、0.01% Proclin 300,分装后于-20 ℃低温保存。

1.4评价方法 参考文献[2]评价瓶间均匀性、复融开瓶稳定性、长期保存稳定性等质控品性能指标。

2 实验与结果

2.1混合血清经PEG沉淀前、后血脂检测结果 PEG处理前的原混合血清可以用于水平1质控,浓缩血清与原混合血清1∶1混合,加入适量甘油得到异常值质控(水平2),结果见表1。

表1 混合血清经PEG沉淀处理前后结果

表2 复融开瓶稳定性

2.4长期保存稳定性 分别于第2、4、6、8、10、11、12个月随机抽取1瓶放置-20 ℃保存的质控品,复融后分别测定各项目3次,经F检验,F值均<1.0,P值均大于0.05,长期保存的质控品变化趋势差异无统计学意义,稳定性满足要求。

3 讨论

目前国内实验室开展血脂质控大多使用商品化质控品,但在众多商品化质控品中,多个品牌异常水平值达不到要求,尤其Lp(a),大多<300 mg/L,达不到异常值要求。国内关于自制血脂质控品的报道较少,唐立萍等[3]报道了自制血脂复合质控品的方法,其制备的过程是向健康人血清中加入apoA1、apoB、HDL-C、LDL-C、TC、TG,此法虽然简单,但加入的成分价格昂贵,且此质控品中不含Lp(a)。制作异常血脂质控品最好的方法是通过超速离心分离脂蛋白,然后再将其加入健康人血清中,但该法需要昂贵的超速离心机设备,在大多数医院很难完成。本研究依据PEG分离沉淀脂蛋白的原理[1],利用实验室体检健康者混合血清制备异常值血脂复合质控品,不需要特殊仪器设备即可以获得各项血脂指标异常值,但由于是利用PEG沉淀脂蛋白,由此得到的TG结果通常在2.0～3.0 mmol/L之间,为了得到较高的TG结果,本研究在异常值质控中加入适量甘油,测定TG的试剂盒通常分为去甘油和不去甘油法,但目前国内使用试剂盒大多为不去甘油法,需要注意的是对于去甘油检测试剂盒,测定结果通常会在异常值的临界点,也是可以满足质控品要求的。

质控品的质量性能评价指标主要有瓶间均匀性、开瓶稳定性和长期储存稳定性,应用《生化分析仪用质控物》国家行业标准[2]对自制血脂复合质控品相关性能指标进行评价,结果表明,瓶间均匀性完全满足技术指标要求,开瓶复融后放置4～8 ℃保存,各成分至少稳定14 d,长期稳定性验证结果表明,自制质控品放置-20 ℃冰冻保存可以稳定12个月。

利用临床血清标本制备血脂复合质控品,标本易得、方法简单、成本低廉,各项性能指标完全满足要求,不仅为临床自制血脂质控品提供一个新的方法,同时也为质控品研发、生产提供一个新的思路。

本研究的主要目的是制备可以满足自身实验室开展室内质控的质控品,存在的不足之处是未进行不同检测系统的结果进行比较,通过此法制备的异常值质控品是否存在基质效应问题有待今后做进一步研究评价。