三种类型血液样本维生素AE检测结果一致性评价

贾永娟,刘杏立,刘春冉,倪君君(北京和合医学诊断技术股份有限公司研究院,北京 100011)

维生素AE是人体必需的微量营养元素,在机体生长发育过程中发挥着重要作用[1]。研究表明,维生素AE水平与机体免疫状态密切相关,维生素AE缺乏会导致儿童免疫功能下降,增加疾病发生的风险[2-4]。因此,进行维生素AE水平测定,对于指导儿童合理补充维生素具有现实意义。目前临床实验室常使用液相色谱、质谱检测外周血中维生素AE水平,主要基质类型为血清或血浆,然而关于创伤性更小的指尖血的研究较少[5-6]。本研究探讨静脉血清、静脉血浆与指尖血3种不同类型基质维生素AE测定结果的一致性,旨在为临床取样提供参考。

1 材料与方法

1.1研究对象 征集43名健康志愿者,男性20例,女性23例,年龄在24～56周岁之间,隔夜禁食至少8 h后,分别采集指尖血,EDTA-K2抗凝,离心获取血浆50 μL;采集时静脉血,分别用EDTA-K2抗凝和不抗凝,离心分别获得血浆和血清各1 mL,室温避光放置,2 h内完成样本处理。全部志愿者均对本次研究内容知情同意。所有样本由北京和合医学诊断技术公司中心实验室统一检测。

1.2仪器与试剂 岛津LC-20A高效液相色谱,RF-20A荧光检测器(日本岛津公司);多管涡旋混合器(北京踏锦公司);离心机(德国Sigma公司);氮气吹扫仪(杭州奥盛公司)。维生素A标准品(100 mg/L)、维生素E标准品(1 000 mg/L)购自美国Sigma公司,蒸馏水,无水乙醇(色谱纯,天津光复公司),正己烷(色谱纯,法国Cleman公司),甲醇(色谱纯,德国默克公司)。

2 结果

2.1不同基质维生素AE水平 三种基质中维生素AE的检测结果见表1。单因素方差分析结果显示,三种基质中维生素AE检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 三种基质中维生素AE的检测结果

三种基质中维生素AE检测结果的偏差见表2。各组偏差均值、中位数及第25百分位数与第75百分位数均在15%允许误差内,表明三种基质中维生素AE检测结果具有一致性。

表2 三种基质检测维生素AE结果的偏差(%)

3 讨论

维生素是机体维持生命活动所必需的微量营养元素。维生素A在维持视觉系统正常功能、保持上皮细胞及黏膜结构的完整性、参与铁代谢、促进生长发育和增强免疫功能中都占据重要地位[2,8]。维生素E能消除体内自由基,具有抗氧化、维持生育和调节免疫系统等诸多生物学功能[9]。维生素AE不能在体内合成,需经膳食摄取,儿童如存在偏食、挑食等饮食结构问题,易出现维生素AE缺乏[10]。研究表明,全球约有1.9亿学龄前儿童存在维生素A缺乏[11]。维生素AE水平与机体的免疫状态有密切关系,其缺乏可导致儿童的免疫力下降,引发贫血、反复呼吸道感染等疾病[12-13]。因此,进行人体维生素AE检测,能够对其维生素营养状况进行准确评估,指导儿童合理膳食、优化营养摄入,对于预防儿童营养缺乏及相关疾病的发生具有重要作用。

研究显示,不同基质类型与采血条件会对检测结果产生一定的影响[14]。为确保检验质量,选择合适的采血方式非常关键。目前,临床检测多采用肘部静脉采血,使用真空密封采血管,可避免发生污染,但其采血量相对较大,对采血技术要求较高,婴幼儿及儿童在采血过程中配合度较差,且婴幼儿及儿童静脉血管较细,易发生穿刺失败[15]。指尖血的采集方便快捷,对某些特殊人群,如婴幼儿等,是更为适宜的采血方式[16]。但末梢采血易受到外界环境、挤压等因素影响,临床对于末梢采血的检测结果的准确度仍存在一定争议。

Colak等[17]与van der Vorm等[18]对血清与血浆中25羟基维生素D水平进行了比较,结果均表明两者之间没有差异。此外,Nishiumi等[19]使用非靶向蛋白质组学和代谢组学方法比较静脉和指尖血浆中的蛋白质和代谢物发现,可以使用指尖血浆来测量血浆蛋白和代谢物水平。Iwasawa等[20]研发了新型微量血液采集设备,并对指尖和静脉血中的14项生化参数进行了比较,在14个生化参数中普遍观察到指尖血与常规静脉血间良好的相关性。本研究采用高效液相色谱方法对静脉血清、静脉血浆、指尖血中的维生素AE水平进行分析,结果显示,3种类型基质中维生素AE测定结果差异无统计学意义(P>0.05),与之前的研究结果一致[17-20]。医学实验室检测维生素AE时,样本类型可以选择静脉血清、静脉血浆和指尖血中的任一样本类型,均能获得准确可靠的检测结果。临床上可根据患者需求以及实际情况选择合适的血液样本采集方式。

维生素AE的参考区间分别为0.3～0.7 mg/L与5～20 mg/L,低于参考区间标准判断为维生素AE缺乏,高于参考区间标准判断为维生素AE过量[21]。结果显示不同水平维生素AE在不同基质中的偏差均<15%,表明三种基质中维生素AE检测结果具有一致性。此外,结果显示血浆和末梢血中维生素E结果平均偏差较小(1.3%),而血清结果高于血浆和末梢血,较血浆中高3.0%,较末梢血高4.2%,但结合临床允许误差与该检测方法的正确度及精密度,认为三种基质中维生素E水平无明显偏差。分析原因发现,血清与血浆中维生素E检测结果偏差为1.4%(0.6%,4.3%),血清与指尖血维生素E检测结果偏差为0.3%(-0.4%,7.1%),偏差较小,但平均偏差稍高,可能原因是随机误差导致个别样本间偏差较大,从而导致平均偏差增大。查看数据发现,43组血清与血浆样品检测结果中,有2组样本偏差较大,在12.7%～13.6%之间,其余样品的平均偏差为2.5%;而43组血清与末梢血样品检测结果中,有5组样本偏差较大,在16.2%～23.6%之间,其余样品的平均偏差为2.1%,表明平均偏差较大为个别样本偏差较大导致。

本研究存在一定的局限性,研究采用的样本为来自24～56岁健康人群,数量较少,结论可能会存在偏差,因此本研究的结论还需要更多样本量,在不同人群中进一步验证。此外,血液标本采集影响因素较多,餐前餐后、采集后样本的保存条件等,均可能会对检测结果产生影响,在此方面仍需进行深入研究,以确保检测结果的准确性。