长春地区7716例女性患者HPV基因型分布特征分析

陈媛媛,李 铤,田春迎,张晓伟,孙洪帅,朱 华

(吉林省肿瘤医院 检验科,吉林 长春130012)

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一种双链、环状 DNA 病毒[1],人是其唯一宿主。HPV主要通过性传播感染,有性生活的女性在其一生中大约75%～80%概率会感染HPV[2]。虽然大多数HPV感染(70%～90%)无症状,并会在1～2年内自愈,但持续感染(或多次再感染)会导致发病甚至死亡[3]。目前已经发现的HPV基因型大约有200种不同分型,其中20多种是已知或可能会致癌的分型[3],根据其致病性分为高危型HPV(High risk-Human papilloma virus,HR-HPV)和低危型HPV(Low risk-Human papillomavirus,LR-HPV)两大类。有研究[4]显示,低危型(主要是HPV6/11)感染主要导致外生殖器疣;而高危型(主要是HPV 16/18)感染可发生癌前病变甚至癌变,除了宫颈癌外,还可导致口咽癌、阴道癌、外阴癌和肛门癌等[5]。疫苗接种可以有效预防宫颈癌,但全球HPV疫苗接种覆盖率没有达到预期目标,这给宫颈癌预防带来巨大挑战[6]。有报道[7]指出HPV感染相关疾病每年给中国内地造成的经济负担不容忽视。我国目前已有3类疫苗上市:二价疫苗(HPV16、18)、四价疫苗(HPV16、18、6、11)、九价疫苗(HPV16、18、6、11、31、33、45、52、58)[8]。根据本地区HPV感染情况选择合适的疫苗接种尤为重要,本研究回顾性分析了2019年7月至2023年2月于本院就诊女性患者HPV感染情况,以期为长春地区制定相应的区域筛查方案和疫苗接种措施提供依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集2019年7月至2023年2月于吉林省肿瘤医院就诊且行HPV检查女性患者7716例,其中门诊患者4522例,住院患者3194例,年龄18～87岁,中位年龄47岁。纳入标准:(1)3天内未对阴道进行冲洗;(2)24小时内无性行为且处于非月经期;(3)自愿且首次在本院行HPV DNA分型检测的女性。排除标准:(1)检测处于妊娠期内;(2)3天内对阴道使用药物影响检测结果;(3)有宫颈或生殖道畸形者;(4)凝血功能障碍严重,检查不耐受者。

1.2 试剂与仪器

HPV分型检测试剂盒(潮州凯普生物化学有限公司),检测HPV分型为21种,其中15种高危型别:HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68;6种 低危型别:HPV6、11、42、43、 44、81(CP8304)。ABI7500荧光定量PCR仪(美国应用生物系统公司),HybriMax医用核酸分子快速杂交仪(潮州凯普生物化学有限公司)。

1.3 方法

1.3.1标本采集 HPV DNA分型检测的标本为宫颈脱落细胞,由妇科专业医生用宫颈刷于宫颈口取得宫颈脱落细胞,将宫颈刷放入专用细胞保存管,贴好条码送检验科检测。送检标本4℃保存,1周内进行检测。

1.3.2标本检测 宫颈脱落细胞标本HPV DNA提取、扩增和扩增产物导流杂交步骤严格按照凯普试剂盒说明进行操作。提取的DNA如不能及时用于扩增可于-20℃保存。

1.4 统计方法

使用SPSS 26.0软件对数据进行分析;计数资料以频数(百分比)表示,组间比较采用χ2检验分析;以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 7716例患者HPV感染检出情况

7716例女性患者中HPV阳性检出例数为1847例,阳性率为23.94%,其中单一感染1477例,阳性率为19.14%;二重及以上感染例数为370例,阳性率为4.80%。单一感染阳性率明显高于多重感染阳性率,差异有统计学意义(χ2=753.687,P<0.001)。

2.2 不同年龄组HPV感染分布

按年龄分为≤20岁、>20～30岁、>30～40岁、>40～50岁、>50～60岁、>60～70岁、>70～80岁、>80岁八个年龄段。其中>30～40岁、>40～50岁、>50～60岁年龄段人数较多,≤20岁和>80岁年龄段人数较少。HPV感染呈双峰,首峰出现在>20～30岁年龄段,次峰出现在>60～70岁年龄段,其中>60～70岁年龄段HPV感染阳性率最高为32.12%(239/744),>80岁年龄段HPV感染阳性率最低为14.29%(2/14)。不同年龄段的HPV感染阳性率比较,差异有统计学意义(χ2=67.199,P<0.01)。各年龄段主要以单一感染为主,单一感染中>60～70岁年龄段HPV感染阳性率最高为23.25%(173/744),>80岁年龄段HPV感染阳性率最低为14.29%(2/14);多重感染中≤20岁年龄段HPV感染阳性率最高为12.50(2/16),其次为>60～70岁年龄段率阳性率为8.87%(66/744),>80岁年龄段多重感染未检出。

2.3 1847例HPV感染患者各亚型分布情况

HPV阳性患者中,低危型检出率最高的是HPV81(CP8304)型(6.12%),其次为HPV42型(2.11%),检出率最低的是HPV11型(0.76%);高危型检出率最高的是HPV16型(24.04%),检出率最低的是HPV35型(1.62%),检出率前五分型依次为HPV16型(24.04%)、HPV52型(15.38%)、HPV58型(12.83%)、HPV53型(9.75%)和HPV51型(8.93%)。在单一感染和多重感染患者中,低危型检出率最高的均为HPV81(CP8304)型,检出率分别为3.19%、2.92%,高危型检出率最高的均为HPV16型,检出率分别为17.98%、6.06%。见表1。

表1 1847例HPV感染患者各亚型分布情况[n(%)]

2.4 HPV单一感染和多重感染分布情况

1847例HPV阳性患者中,低危型HPV感染患者125例,占比6.77%,高危型HPV感染患者1609例,占比87.11%,高低危混合型HPV感染患者113例,占比6.12%,高危型HPV感染占比明显高于低危型和混合型HPV感染占比,差异均有统计学意义(χ2=2393.644,2434.557,P<0.01)。高危型和低危型HPV感染中,单一型HPV感染占比(73.42%,6.55%)均高于多重HPV感染占比(13.70%,0.22%)。三组HPV感染型别中,多重感染中的二重感染占比均高于二重以上感染占比,低危型HPV感染二重感染以上患者未检出。见表2。

表2 HPV单一感染和多重感染分布情况[n(%)]

3 讨论

HPV感染是导致宫颈癌的主要因素,据统计每年大概有60多万个新增病例和30多万人死于宫颈癌,它是全世界妇女最常见的癌症之一[9]。截至2022年3月,大多数高收入和中高收入国家已将人类乳头瘤病毒疫苗纳入其国家免疫计划,而一些人口较多的国家还没有将HPV疫苗引入其免疫计划,导致全球HPV疫苗的覆盖率仍然很低,女性两剂疫苗的覆盖率为12%[10]。感染皮肤的HPV类型包括皮肤型(1、2、3、4、7、10、27、57、60、63、65等)、疣状表皮增生症型(5、8、20、21、47等)、黏膜高危型(16、18、31、33、35、45、52、56、58等)以及黏膜低危型(6、11等)[11]。有研究表明,不同区域HPV感染类型不同,不同年龄段HPV感染率也存在差异[12-13]。

本研究中7716例女性患者中HPV阳性率为23.94%,以单一感染为主。国内一数据库涵盖29个省2458227例的大数据研究[14]显示:各地域高危型HPV感染率范围为15.3%～24.4%;HPV感染的两个高峰出现在小于30岁和大于等于50岁年龄段;感染率排名前五的高危HPV基因型依次是HPV52、HPV16、HPV53、HPV58和HPV51。本研究HPV感染率处在大数据报道的范围之内;本研究也发现HPV感染在不同年龄段呈现双峰,首峰出现在20～30岁年龄段,次峰出现在>60～70岁年龄段,与大数据报道相符。本研究低危型HPV检出率最高的是HPV81(CP8304)型,其次为HPV42型;检出率排名前五的高危HPV基因型依次是HPV16、HPV52、HPV58、HPV53和HPV51,与大数据报道的基因型一致,排名先后有差异;前四位与长春地区一报道[15]一致。东北地区一项纳入110927例患者的研究[16]显示:HPV感染首峰出现在小于30岁年龄段,次峰出现在50～60岁年龄段;低危型HPV检出率排名为HPV81(CP8304)、HPV11和HPV6;高危型HPV检出率排名为HPV16、HPV58、HPV52、HPV33、HPV53和HPV18。西北地区一项纳入145918例患者的研究[17]显示:HPV感染率为22.97%,HPV感染首峰出现在小于20岁年龄段,次峰出现在61～65岁年龄段;小于20岁和21～25岁年龄段常见低危型HPV为HPV11和HPV6,其他年龄段为HPV61;高危型HPV最常见五个分型为HPV16、HPV58、HPV52、HPV18和HPV56。上海[18]HPV感染首峰出现在15～24岁年龄段,次峰出现在55～64岁年龄段,最常见低危型为HPV61、HPV6和HPV81,最常见高危型为HPV52、HPV16、HPV58、HPV53和HPV39。北京[19]HPV感染首峰出现在≤25岁年龄段,次峰出现在61～65岁年龄段,最常见高危型为HPV52、HPV16、HPV58、HPV51和HPV39。通过本研究数据和以上相关报道数据可以看出:中国根据地域的不同,HPV感染出现峰值的年龄段和常见的高、低危分型存在差异;感染峰值年龄段在20～30岁和50～70岁之间,青年和老年属于高发期。有研究[20-21]显示:初次性生活年龄、性伴侣个数、流产次数及吸烟史是HPV感染的独立危险因素。本研究HPV感染首峰出现在>20～30岁年龄段,可能与此年龄段女性自我保护意识差,性伴侣多和性生活活跃有关,因此年轻女性应在有性生活前尽量接种HPV疫苗,可作为免疫屏障;次峰出现在>60～70岁年龄段,且此年龄段HPV感染阳性率最高为32.12%,此年龄段的女性为60～70年代出生的,教育水平明显低于年轻女性,可能对HPV感染的了解不够,随着年龄的增长,激素水平发生改变和自身免疫力下降,可能与此年龄段HPV感染高发有关[22]。不同年龄段的HPV感染阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.01)。各年龄段主要以单一感染为主,单一感染中>60～70岁年龄段HPV感染阳性率最高;多重感染中≤20岁年龄段HPV感染阳性率最高,纳入研究的此年龄段人数为16人,可能与人数较少有关,还需增加样本量进一步分析。

本研究还发现1847例HPV阳性患者中,高危型占比明显高于低危型和高低危混合型,差异均有统计学意义(P<0.01);多重感染中以二重感染为主。高危HPV感染的持续时间较长,会增强受感染细胞恶性转化的风险;然而,造成感染持续存在的机制尚未被充分了解,可能与细胞外囊泡(EVs)在重塑宫颈癌微环境中的潜在作用和作为细胞间信息传播的媒介有关[23]。女生生殖道菌群失调导致促炎症环境,从而增加恶性细胞的增殖和HPV E6和E7的癌基因表达[24]。阴道微生物群的改变可能在HPV宫颈感染、进展和清除中起着功能性作用,感染和微生物群之间的关系可能会刺激新的益生菌的发展[25]。

综上所述,长春地区女性HPV感染以单一、高危型感染为主,20～30岁和>60～70岁年龄段为HPV感染高发期,应采取有效措施进行干预;高危型检出率最高的前五个型别依次是HPV16型、HPV52型、HPV58型、HPV53型和HPV51型。应加强疫苗早期接种和宫颈癌早筛工作。因本研究是一个单中心研究,样本量较小,可以为国家HPV数据库累积数据,为疫苗研发和接种提供更全面准确的数据。