胎盘冻干粉颗粒毒理学评价

许超，魏伟

（广州瑞铂茵健康科技有限公司，广东广州 510663）

胎盘是哺乳动物妊娠期间与胎儿进行养分交换的重要组织。据《本草纲目》记载，胎盘俗称紫河车，具有“益气养血、补肾益精”之功效，作为一种珍贵的温补中药在我国已有悠久的历史。胎盘中活性成分复杂，研究表明胎盘中富含酶、核酸、维生素、氨基酸、类固醇及脂肪酸等物质[1]。迄今为止，已有多项研究显示，胎盘中提取的活性成分在伤口愈合和缓解炎症方面有着显著的疗效[2-4]。此外，胎盘最重要的作用之一是保护胚胎免受氧化应激的影响，这主要归因于胎盘中的多种抗氧化成分，如尿嘧啶、酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸[5-6]等。随着人们健康意识的提高，市面上出现的抗氧化剂和抗衰老类药物越来越多，但这些药物大多是化学合成药，虽然短期内疗效显著，但长期使用反而会降低体内抗氧化酶的表达，增强脂质过氧化水平，进而造成体内代谢调控紊乱，加快衰老进程[7-8]。胎盘是人类宝贵的生物资源，但其安全性问题却饱受争议。本文按照《保健食品检验与评价技术规范》对胎盘冻干粉颗粒进行毒理学评价，为其食用安全性提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 受试物

胎盘冻干粉颗粒（0.05 g/粒×60 粒/瓶），人体推荐食用方法及食用量：口服，每日1 次，每次1 粒。

1.2 实验动物及菌株

SPF 级KM 小鼠、SD 大鼠均购自广东省医学实验动物中心，许可证号为SCXK（粤）2018—0002；质量合格证号：NO.44007200093777。

动物饲养管理条件：温度20 ～26 ℃，湿度40%～70%，光照12 h 明暗交替。动物饲料由广东省医学实验动物中心提供，实验动物饲料生产许可证号为粤饲证（2019 年）05073。

1.3 仪器与试剂

PRACTUM612-1CN 系列天子天平，德国Sartorius公司；KDC-1044 低速离心机，安徽中科中佳科学仪器有限公司；7020 型全自动生化分析仪，日本日立公司；XT-2000iV 全自动五分类动物血液分析仪，日本Sysmex公司；CA-620凝血分析仪，日本Sysmex公司；H-800 尿液分析仪，迪瑞医疗科技股份有限公司。

多氯联苯诱导的雄性SD 大鼠肝脏微粒体酶（S9）（批号3745），美国MOLTOX 公司；敌克松（Dexon）（批号40709），德国Dr. Ehrenstorfer GmbH 公司；叠氮钠（SA）（批号0639），美国Amresco 公司；2-氨基芴（2-AF）（批号AG310001），美国Sigma 公司；1,8-二羟基蒽醌（1,8-DHQ）（批号A0248756），中国北京伊诺凯科技有限公司；环磷酰胺（CP）（批号WXBC4021V），美国Sigma 公司。

1.4 实验方法

1.4.1 急性毒性实验

本试验采用限量法，只设10 g/（kg bw）1 个剂量。即取检疫合格小鼠20 只，雌雄各半，实验前动物禁食5 h，不限制饮水，空腹灌胃2 次，灌胃容量为每次30.0 mL/（kg bw），给予受试物后小鼠继续禁食l h，观察并记录动物的中毒表现、死亡数和死亡时间，观察期为14 d。参照《食品安全国家标准 急性经口毒性试验》（GB 15193.3—2014）4.3.2 条目和附录G评价规定判断毒性分级。

1.4.2 28 d 经口毒性实验

选用SD 大鼠80 只，体重60 ～80 g，随机分为4组，分别为阴性对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组20 只，雌雄各半；高剂量0.083 g/（kg bw），中剂量0.042 g/（kg bw），低剂量0.021 g/（kg bw），灌胃体积均为10 mL/（kg bw），阴性对照组给予等容量的纯水，连续经口灌胃28 d。连续喂养28 d 后，过夜禁食16 h 后称重、麻醉，腹主动脉采血，进行血常规和血生化测定。

1.4.3 统计学方法

实验数据采用SPSS 软件进行统计分析。各指标均使用单因素方差分析（ANOVA），P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 急性毒性实验

受试物以10 g/（kg bw）的剂量经口灌胃给予雌、雄性KM 小鼠，连续观察14 d，发现动物粪便、体毛、活动正常，动物体重变化未见异常，实验期间未见其他明显的动物中毒症状和死亡。结果表明该受试物对雌、雄性KM 小鼠的急性经口毒性LD50大于10 g/（kg bw）。

2.2 28 d 经口毒性实验

2.2.1 受试物对大鼠血常规的影响

与阴性对照组比较，受试物各剂量组大鼠白细胞（WBC）、红细胞（RBC）数量低于阴性对照组，但差异无统计学意义（P＞0.05）；受试物高剂量组血红蛋白含量（HGB）、红细胞比容（HCT）和血小板数量（PLT）高于阴性对照组，但差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。根据以上结果分析得出，该受试物各剂量组对大鼠血常规指标无显著影响。

表1 胎盘冻干粉对大鼠血常规的影响（±s，n=20）

表1 胎盘冻干粉对大鼠血常规的影响（±s，n=20）

组别 WBC/（×109/L） RBC/（×1012/L） HGB/（g/L） HCT/% PLT/（×109/L）阴性对照组 3.81±1.16 7.09±0.28 140.30±5.58 40.97±1.57 968.2±69.7低剂量组 3.35±1.31 6.79±0.36 133.60±5.87 41.11±1.71 1 007.4±124.9中剂量组 3.38±1.29 6.92±0.19 137.00±3.50 40.39±0.08 966.7±62.8高剂量组 3.74±1.47 6.77±0.63 141.30±6.75 41.90±2.01 1 038.4±129.7

2.2.2 胎盘冻干粉对大鼠生化指标的影响

由表2 可知，受试物灌胃28 d 后，各剂量组大鼠血液生化指标总蛋白含量（TP）、血清白蛋白含量（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（CRE）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）与阴性对照组比较均无显著差异（P＞0.05），表明受试物对大鼠血液生化指标无明显影响。

表2 胎盘冻干粉对大鼠血液生化指标的影响（±s，n=20）

表2 胎盘冻干粉对大鼠血液生化指标的影响（±s，n=20）

剂量 ALT/（U/L） AST/（U/L） BUN/（mmol/L） CRE/（μmol/L） TP/（g/L） ALB/（g/L）阴性对照组 30.90±5.93 85.00±11.73 7.43±1.26 12.60±2.59 52.83±2.17 34.42±2.08低剂量组 32.90±6.17 89.90±8.63 7.49±0.95 14.40±2.84 52.62±2.02 33.77±2.04中剂量组 30.80±6.14 83.20±11.94 7.38±0.81 14.20±2.86 54.17±4.32 35.34±3.20高剂量组 33.00±6.46 84.50±9.58 7.34±0.98 12.40±3.75 53.47±2.93 33.80±2.34

3 结论

本研究对冷冻干燥技术制备的胎盘冻干粉进行毒理学研究，受试物对雌、雄性KM 小鼠急性经口毒性LD50＞10 g/（kg bw），属实际无毒级。将受试样品按0.083 g/（kg bw）、0.042 g/（kg bw）、0.021 g/（kg bw）的剂量对SPF 级雌、雄性SD 大鼠连续给予28 d，受试动物均未见明显的中毒症状；体重、血常规指标、血液生化指标与阴性对照组比较均无差异。此外，动物一般生理体征、行为、大小便、皮毛等均未见异常。本研究结果表明，胎盘冻干粉口服后没有毒性，安全性有保障，为胎盘冻干粉作为保健食品的进一步开发提供了实验依据。