CDKN2A基因突变与肺癌患者预后的关系

杨 杰 郑喜胜 王 伟

肺癌为临床常见恶性肿瘤,其主要起源于气管、支气管黏膜或腺体组织,随着病情进展可引起咳嗽、咯血、胸痛等症状。肺癌早期预后多较好,若肿瘤细胞已发生转移或扩散,则预后欠佳,患者生存率较低[1-2]。手术为肺癌的重要治疗手段,但术后仍存在较高转移及复方风险,部分患者5年生存率低。考虑与临床缺乏精准评估患者预后的特异性标志物关系密切。从分子生物学角度分析,肺癌的发病与癌基因激活、抑癌基因失活等关系密切,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制基因(CDKN2A)则属于肿瘤抑制基因,正常情况下可参与细胞周期调控,阻止细胞增殖[3-4]。相关研究显示[5-6],CDKN2A基因失活与肺癌恶性生物学行为关系密切。但关于CDKN2A基因在肺癌中的具体影响及与患者预后间的关系尚存在较多争议。鉴于此,本研究旨在分析CDKN2A基因突变在肺癌中的影响及与预后的关系,为肺癌的诊治及疗效评估提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年8月至2017年8月我院收治的79例肺癌患者作为研究对象,其中男性42例,女性37例;年龄44～72岁,平均年龄(56.81±5.36)岁;体质量指数19～26 kg/m2,平均体质量指数(22.89±1.46)kg/m2;分化程度:14例低分化,46例中分化,19例高分化;肺癌类型:51例鳞癌,28例腺癌;复发转移情况:50例无复发转移,29例复发转移;肿瘤大小:29例>3 cm,50例≤3 cm。纳入标准:均经手术病理确诊;精神状态正常;患者及家属签署知情同意书。排除标准:预计生存期不足3个月;入组前接受过放化疗;心肝肾严重障碍。

1.2 方法

所有患者均于术前采集癌变组织及癌旁组织样本,其中癌旁组织为距离肿瘤5 cm处组织,且经病理诊断为正常组织。免疫组化检测:先以免疫组化SP法进行染色,切片后脱蜡水处理,抗原修复后,滴入一抗、二抗,标本DAB显色处理后,行染色、脱水、透明处理,最后封片;阳性判定标准:每次取5个镜下高倍视野,取平均值,阳性为呈棕褐色或棕黄色染色颗粒,并计算阳性表达情况,以染色强度及阳性细胞占比为标准,染色强度为0～3分,阳性细胞占比分为0～4分,总分为两者均数乘积,6分及以上为高表达,6分以下为低表达。CDKN2A基因突变检测:提取总RNA,使用RT-PCR试剂盒扩增。总反应体系共25 μL,之后先在95 ℃下进行5 min预处理,再热变性95 ℃下处理30 s,之后延伸72 ℃下处理30 s,后设置60 ℃、61 ℃、59 ℃条件下进行30个循环,待扩增完毕后电泳,检测结果分析参考二代测序原理。所有患者均行3年长期随访,记录其生存情况,第一年3个月随访1次,后两年6个月随访1次。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 CDKN2A基因表达情况

肺癌组织CDKN2A基因高表达率较癌旁组织低,有统计学差异(P<0.05),见表1。

表1 CDKN2A基因表达情况(例,%)

2.2 CDKN2A基因突变情况

肺癌组织CDKN2A基因突变率较癌旁组织高,有统计学差异(P<0.05),见表2。

表2 CDKN2A基因突变情况(例,%)

2.3 CDKN2A基因突变与肺癌临床病理特征的关系

基因突变患者复发转移发生率与基因野生患者相比,有统计学差异(P<0.05),见表3。

表3 CDKN2A基因突变与肺癌临床病理特征的关系(例,%)

2.4 影响肺癌患者术后生存期危险因素单因素及多因素分析

基因突变型患者3年生存率为46.67%(14/30),低于基因野生型患者的77.55%(38/49),差异有统计学意义(χ2=7.890,P=0.005);基因突变型患者中位生存时间为(22.72±3.13)个月,短于基因野生型患者的(34.25±4.11)个月,差异有统计学意义(t=13.189,P=0.000),见表4。

表4 影响肺癌患者术后生存期的独立危险因素COX回归分析

3 讨论

肺癌发病机制复杂,临床认为是多因素综合作用促使正常细胞内基因发生突变或失活所致[7-8]。临床对于肺癌多以早诊断、早治疗为原则,通过早期手术切除病灶能改善患者预后生存质量,提高整体生存率。但长期随访发现,仍有较多肺癌患者术后出现复发转移情况,导致中位生存时间降低。若能寻找到一种能够精准评估疗效及预测预后的标志物对改善患者预后尤为重要。相应研究显示[9-10],抑癌基因与肺癌发生关系密切,能抑制细胞生长,具有抑癌功能,能参与细胞周期调控,加快细胞凋亡。因此,通过监测抑癌基因的状态对评估肺癌患者预后至关重要。

CDKN2A基因则属于抑癌基因,当其处于高水平状态下可对肿瘤细胞增殖起到抑制作用,一旦CDKN2A基因发生突变或失活后则可降低对肿瘤细胞的抑制能力,使得肿瘤细胞快速增殖分化[11-12]。本研究结果显示,肺癌组织CDKN2A基因高表达率为13.92%(12/79),低于癌旁组织的84.81%(68/79),基因突变率为37.97%(30/79),较癌旁组织的7.59%(6/79)高;基因突变患者复发转移与基因野生患者相比具有差异性,基因突变患者3年生存率为46.67%(14/30),较基因野生患者的77.55%(38/49)低,中位生存时间短于CDKN2A基因野生型患者;COX回归分析显示,肿瘤大小、CDKN2A基因突变、复发转移为影响肺癌患者术后生存期的独立危险因素;提示CDKN2A基因突变为影响肺癌患者术后生存期的独立危险因素,通过监测其状态能预测患者预后,且基因突变患者整体预后较差。贺小威等[13]研究也指出,CDKN2A基因一旦缺失则丧失会抑癌作用,使得肿瘤细胞快速增殖、分化,预后存活率低。分析原因为,正常细胞分裂周期主要依靠G1期-S期顺利转化,CDKN2A基因则能经磷酸化作用调节细胞周期,并对Cdk4活性进行抑制,阻断细胞进入S期;若此过程中基因发生突变、缺失,则会丧失有源抑癌作用,还可促使细胞过度增殖,最终加速恶性肿瘤发生,故CDKN2A基因突变患者肿瘤体积更大,易发生复发转移,导致患者预后欠佳[14-15]。但本研究受样本量小等因素影响,所得研究结果方面仍可能存在一定偏倚,相信随着未来对CDKN2A基因的不断深入研究,能够更为明确其在肺癌中的影响。

综上所述,CDKN2A基因与肺癌关系密切,可作为预后术后生存率的重要指标,一旦CDKN2A基因发生突变,则提示患者整体预后欠佳。