非小细胞肺癌患者PBMC中SITR1、Nrf2表达的临床意义及与预后的相关性

何震宇 宋星仪 师泽元 安小康

非小细胞肺癌(non-small-cell carcinoma,NSCLC)是肺癌最常见的一类分型,也是全球癌症相关死亡的主要原因,约75%的患者发现时已处于中晚期,5年生存率很低[1-2]。目前关于NSCLC患者的治疗方法主要为手术、化疗、放疗等,治疗介入越早,患者预后越好[3]。有研究报道核转录因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)是一种重要的转录因子,可通过抑制机体氧化应激和促肿瘤炎症来降低患者癌症的风险,但许多癌症表现出Nrf2活性升高[4];沉默信息调节因子1(Silent information regulator 1,SITR1)是肿瘤的启动子,激活机体内癌基因、创建了有利于肿瘤生存和发展的微环境[5]。本研究探讨Nrf2、SITR1在NSCLC患者PBMC中的表达及其临床意义,并采用Kaplan-Meier法分析SITR1、Nrf2表达与预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月至2018年12月在我院接受治疗的NSCLC患者84例为研究对象。纳入标准:①经病理组织学确诊为NSCLC;②相关病历资料完整。排除标准:①术前接受其它治疗者;②合并其他肿瘤患者;③临床病理资料缺乏者;④合并其他自身免疫性疾病;⑤合并原发性器官功能障碍;⑥患者无法进行正常沟通交流。本研究纳入患者年龄范围53～71岁,平均(61.58±8.87)岁;其中男性59例,女性25例;中高分化44例,低分化40例;肿瘤直径≤5 cm有48例,>5 cm有36例;有淋巴结转移37例;TNM分期[6]:Ⅰ+Ⅱ期33例,Ⅲ+Ⅳ期51例。另取84例同期健康体检人员外周血作为对照,其中男性49例,女性35例;年龄51～76岁,平均年龄(62.39±8.14)岁。

1.2 方法

在NSCLC患者治疗前,采集84例NSCLC患者和84例健康体检者的外周静脉血5 mL,去血浆后,以磷酸盐缓冲液补充至原体积,应用PBMC提取试剂盒(来源:北京汇智和源生物技术有限公司;货号:082A01.11)对外周血中的PBMC进行提取。-80 ℃速冻箱中处理后的PBMC置于液氮罐,储存备用。使用流式细胞仪检测PBMC中SITR1、Nrf2蛋白表达,于PBMC中加入1%多聚甲醛1 ml,室温固定,加入SITR1、Nrf2抗体20 μL,室温避光反应30 min,加IgC-F1TC 20 μL,室温避光反应30 min,洗涤后上机,选用兔抗人igCl-FITC作为同型对照,记录SITR1、Nrf2阳性表达量。严格按照试剂盒的说明书进行实验操作。2个指标为同一批样本分批检测,高于中位阳性蛋白表达为高表达组、低于中位值为低表达组。

1.3 治疗与随访方法

NSCLC患者均接受肺癌根治手术治疗,包括肿瘤组织切除术。术后根据患者自身情况予以放疗、化疗等治疗。治疗后1年内每3个月来我院门诊复查1次,之后每半年(6个月)至少复查一次,随访时间为3年(36个月),截止至2021年12月。记录患者随访状态(死亡、存活或其他)。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 2组受试者SITR1、Nrf2阳性表达量比较

NSCLC患者PBMC中SITR1、Nrf2蛋白阳性表达量均高于健康体检组(P<0.05)。见表1。

表1 2组受试者PBMC中SITR1、Nrf2阳性表达量比较

2.2 不同临床特征NSCLC患者PBMC中各指标阳性表达情况

NSCLC患者PBMC中各指标阳性表达量与其年龄、性别、分化程度、吸烟史无关(P>0.05),NSCLC患者PBMC中各指标阳性表达量与淋巴结转移、肿瘤直径、TNM分期有关(P<0.05)。见表2。

表2 不同临床特征NSCLC患者PBMC中各指标阳性表达情况

2.3 NSCLC患者PBMC中SITR1表达水平与3年生存率的关系

随访至截止至2021年12月,总生存率为39.29%(33/84)。SITR1蛋白阳性表达量中位值为0.87,以中位表达水平为界将NSCLC患者分为SITR1高表达组和低表达组。SITR1高表达组3年累计生存率为16.67%(7/42),显著低于SITR1低表达组61.90%(26/42)(χ2=18.018,P<0.001)。见图1。

图1 SITR1高表达和低表达患者生存曲线比较

2.4 NSCLC患者PBMC中Nrf2表达水平与3年生存率的关系分析

Nrf2蛋白阳性表达量中位值为1.41,以中位表达水平为界将NSCLC患者分为Nrf2高表达组和低表达组。截止值2021年12月,Nrf2高表达组3年累计生存率为23.81%(10/42),显著低于Nrf2低表达组的54.76%(23/42)(χ2=8.435,P=0.004)。见图2。

图2 Nrf2高表达和低表达患者生存率比较

3 讨论

NSCLC约占所有肺癌的85%,在人体内的发生与发展是复杂的病理变化,由于大部分肺癌患者确诊时已处于肿瘤晚期,相关治疗手段有限,复发和耐药性导致其临床治愈率不高[7]。目前临床中尚缺乏有效、特异度高的指标对患者的预后和病理特征进行分析,因此对于NSCLC的病理机制仍有待进一步研究[8]。有研究[9-10]报道SIRT1是一种依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)的酶,属于人的第3类去乙酰化酶,通过催化NAD+依赖的目标蛋白的去乙酰化来参与机体细胞生长、代谢等生理过程;其基因表达与肿瘤免疫细胞浸润水平之间存在相关性,进而调控其生物学功能,在肺癌的免疫逃逸机制中起着重要作用。Nrf2是氧化应激反应和药物解毒的基因,受到异常刺激下,大量的Nrf2进入细胞核,磷酸化后进而诱导下游基因表达异常,从而激活NSCLC患者体内抗氧化反应,调节细胞对毒性和氧化损伤的防御[11-12]。基于此,可通过检测PBMC来反映NSCLC患者免疫水平。故而本研究旨在探讨Nrf2、SITR1在NSCLC患者PBMC中的表达及与预后的相关性。

本研究结果显示,在NSCLC患者SITR1、Nrf2蛋白阳性表达量均高于健康体检组,SITR1、Nrf2可为NSCLC患者外周血鉴别差异的蛋白。本研究进一步结果显示,NSCLC患者PBMC中各指标阳性表达与淋巴结转移、肿瘤直径、TNM分期情况比较有统计学上的差异;提示随着SITR1、Nrf2阳性蛋白表达升高,NSCIC患者病理特征可能出现趋向于恶化,表明二者可视为潜在的评估患者预后的重要指标;结果同马永峰、朱学应等研究类似[13-14]。本研究还对NSCLC患者患者进行为期3年随访发现,SITR1、Nrf2高表达组生存率显著低于其低表达组;表明SITR1、Nrf2高表达组患者生存时间更短,对应患者极易复发或恶性肿瘤转移,预后较差。这可能是由于SIRT1通过代谢依赖性和非代谢依赖性方式调节先天性和适应性免疫反应;Nrf2会引起NSCLC患者表皮生长因子受体基因突变,导致恶性肿瘤进展事件发生,激活相关耐药基因而引起NSCLC患者对于相关治疗的药物产生耐药性,从而降低术后治疗的效果,进一步影响患者术后转归[15-16]。因此可通过抽取NSCLC患者外周血来检测SIRT1、Nrf2表达作为判断其预后的指标。

综上所述,NSCLC患者外周血PBMC中SITR1、Nrf2阳性表达率与肿瘤TNM、淋巴结有无出现转移、肿瘤最大径有关;且SITR1、Nrf2高表达水平患者3年生存率显著降低。NSCIC患者术后易发生复发和转移事件,需积极监测患者外周血PBMC中SITR1、Nrf2表达,及时进行干预。但本研究临床样本量较少,且所有患者均来自同一地区,后续研究仍需进一步追踪加以分析。