AGAP2-AS1在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

李景峰 吴淑君 李继德

肺癌主要包括非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌,其中NSCLC患者约占80%[1]。早期NSCLC患者采用手术治疗术后5年生存率可达86%,但NSCLC早期确诊难度大,多数患者确诊时已处于晚期,发生肿瘤转移,5年生存率较低,预后较差[2]。临床应探索新的NSCLC标志物,以便早期发现NSCLC,并对患者预后进行判断。长链非编码RNA(lncRNA)属于一类长度超过200个核苷酸的转录本,lncRNA在肿瘤组织中差异表达,在肿瘤发生、发展中起到了重要作用[3]。AGAP2-AS1为一种反义lncRNA,有研究证实,AGAP2-AS1可促进乳腺癌生长,并可激活NF-κB、上调MyD88,诱发曲妥珠单抗耐药,且AGAP2-AS1为评估胶质母细胞瘤患者预后的重要指标[4-5]。但目前关于AGAP2-AS1在NSCLC组织中的表达及与预后间的关系的研究报道较少,鉴于此,本研究将探讨AGAP2-AS1在NSCLC组织中的表达及临床意义。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2018年1月至2019年12月于我院治疗的95例NSCLC患者临床资料,收集患者NSCLC组织及癌旁正常组织。本研究获医学伦理委员会批准。患者中男性56例,女性39例;年龄35～78岁,平均年龄(59.86±4.79)岁;肿瘤直径1.5～4.3 cm,平均肿瘤直径(2.98±0.35)cm;TNM分期:Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期各有19例、33例、25例、18例。

1.2 入选标准

纳入标准:①患者临床资料较为完善;②NSCLC均经病理检查确诊;③患者均未接受相关抗肿瘤治疗;④年龄≥18岁。排除标准:①精神行为异常,依从性较低;②合并其他恶性肿瘤;③合并严重感染。

1.3 方法

1.3.1 仪器及试剂 实时荧光定量PCR仪(7500 Real-Time PCR型,美国应用生物系统公司提供),上海生工生物工程有限公司提供AGAP2-AS1和内参GAPDH引物,美国Invitrogen公司提供TRIzol,大连宝生物有限公司提供实时定量PCR(qPCR)试剂盒SYBR Premix Ex Taq、逆转录试剂盒PrimeScriptTM1st Strand cDNA Synthesis Kit。

1.3.2 总RNA提取和qPCR 将1 ml TRIzol加入100 mg组织中,离心后,提取RNA,并采用DEPC水重悬后萃取、纯化,取1 μg总RNA,采用PrimeScriptTM1st Strand cDNA Synthesis Kit合成cDNA,混匀扩增产物与SYBR Premix Ex Taq试剂盒内试剂,采用实时荧光定量PCR仪进行qPCR,反应条件:95 ℃ 30 s,40个循环95 ℃ 5 s、60 ℃ 10 s。内参选取GAPDH,采用2-ΔΔCt法对AGAP2-AS1相对表达量进行计算。GAPDH上游引物:5'-TGTAG-GCTCATTTGCAGGGG-3',下游引物:5'-ATGGCAT-GGACTGTGGTCTG-3';AGAP2-AS1上游引物:5'-CACTACACTC-CCTAGCCCCT-3',下游引物:5'-GAGGACGGTCTT-GGGAAAGG-3'。

1.4 评价指标

(1)NSCLC组织及癌旁正常组织中的AGAP2-AS1表达水平。(2)AGAP2-AS1与NSCLC患者临床病理特征的关系。(3)AGAP2-AS1表达水平与NSCLC患者预后的关系。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 NSCLC组织及癌旁正常组织中的AGAP2-AS1表达水平比较

NSCLC组织中AGAP2-AS1表达水平为(3.21±1.18),高于癌旁正常组织的(1.67±0.64),差异有统计学意义(t=11.182,P=0.000)。

2.2 AGAP2-AS1与NSCLC患者临床病理特征的关系

肿瘤直径≥3 cm、TNM分期Ⅲ期+Ⅳ期、 分化程度低分化、淋巴结转移患者的AGAP2-AS1表达水平高于肿瘤直径<3 cm、Ⅰ期+Ⅱ期、中分化+高分化、无淋巴结转移患者,差异有统计学意义(P<0.05);不同年龄及性别患者的AGAP2-AS1表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 AGAP2-AS1与NSCLC临床病理特征关系分析

2.3 AGAP2-AS1表达水平与NSCLC患者预后的关系

随访2年,95例患者死亡40例,生存55例。死亡组患者的AGAP2-AS1表达水平为(4.22±1.64),高于生存组的(2.37±0.75),差异有统计学意义(t=7.382,P=0.000)。

3 讨论

lncRNAs表达改变为肿瘤发生的驱动因素,lncRNA可作为引导员,指引蛋白靶向运动至相应启动子位点,同时可作为信号分子,结合蛋白质形成复合物,结合启动子对下游基因转录过程进行调节,并可作为诱饵对调控蛋白与启动子位点结合进行抑制[6-7]。Jia等[8]研究指出,肿瘤在发生、发展过程中,会引起lncRNA异常表达,LncRNA MAFG-AS1过表达参与NSCLC细胞侵袭及迁移的过程,王凯等[9]指出,LncRNA AGAP2-AS1可促进肾细胞癌的侵袭与转移。

本次研究分析AGAP2-AS1在NSCLC组织中的表达及临床意义,研究结果显示,NSCLC组织中AGAP2-AS1表达水平高于癌旁正常组织,肿瘤直径≥3 cm、TNM分期Ⅲ期+Ⅳ期、 分化程度低分化、淋巴结转移患者的AGAP2-AS1表达水平高于肿瘤直径<3 cm、Ⅰ期+Ⅱ期、中分化+高分化、无淋巴结转移患者。提示出在NSCLC组织中AGAP2-AS1表达水平上调,且与临床病理参数间关系密切,AGAP2-AS1在肿瘤体积较大、TNM分期较晚、分化程度较低与淋巴结转移患者中表达水平较高,AGAP2-AS1可起到促癌作用,参与NSCLC的发生、发展。同时研究结果显示,死亡组患者的AGAP2-AS1表达水平高于生存组,表明AGAP2-AS1表达量与患者预后有关,AGAP2-AS1表达水平越高患者预后越差。马星等[10]在研究中指出,NSCLC组织AGAP2-AS1表达水平高于癌旁正常组织,TNM分期Ⅱ期、低分化的NSCLC患者AGAP2-AS1低表达人数占比低于TNM分期Ⅰ期、中高分化的NSCLC患者,且AGAP2-AS1高表达为影响患者预后的危险因素,与本次研究结果较为相似。AGAP2-AS1属于lncRNA家族成员,转录位点12q14.1,1567个核苷酸长度,可通过影响miRNAs调节肿瘤细胞生物学行为,在肿瘤生长、繁殖及侵袭中发挥重要的调控作用[11-12]。但本次研究中仅纳入95例NSCLC患者,且为回顾性分析研究,还有待临床开展前瞻性、大样本量研究,以进一步证实AGAP2-AS1在NSCLC患者中的表达及临床意义,旨在为NSCLC患者的早期诊断、治疗及预后评估提供参考。

综上所述,AGAP2-AS1在NSCLC组织中表达水平较高,且AGAP2-AS1表达水平与患者临床病理特征及预后密切相关,可用于NSCLC患者的诊治及预后评估。