TRAIP在原发性肝细胞癌中表达及其在病理诊断和预后中的意义*

蔡小艳 马登云 逯金海 马颖才

1.青海红十字医院病理科 (青海 西宁, 810001) 2.青海省人民医院消化内科

原发性肝细胞癌(HCC)是全球最常见恶性肿瘤之一,也是全球癌症相关死亡第3大原因[1]。由于早期无特异性症状、缺乏早期诊断标志物、根治性可切除HCC的比例较低,大多数HCC患者往往被诊断为晚期,且其预后较差,5年生存率仅为17%～53%[2]。目前,根治手术为HCC最有效治疗方法,但仅在疾病早期阶段有效,而大多数患者确诊时已处于晚期,丧失了手术机会。有研究发现,肿瘤复发及肿瘤转移是HCC患者预后不良主要因素[3]。因此,迫切需要对HCC机制的新见解,以确定新的预后分子标志物和潜在有效治疗靶点,从而提高患者存活率。泛素化是肿瘤重要相关生物学过程,近年来已有大量研究表明泛素化过程是介导肿瘤侵袭迁移的重要因素[4]。泛素化家族已被证实在乳腺癌、结直肠癌等多种恶性肿瘤中具有一定诊断、治疗及预后价值,但在HCC中的价值有待进一步探索[5]。肿瘤坏死因子受体相关因子相互作用蛋白(TRAIP)是一种E3泛素蛋白连接酶,由N端环指基序和推定卷曲螺旋和亮氨酸拉链样结构域组成。据报道[6],TRAIP对DNA修复及纺锤体装配检查点控制至关重要,当细胞退出细胞周期或经历分化时,TRAIP表达下调,且TRAIP与多种癌症类型病程发展有关。然而,关于TRAIP在HCC中的作用知之甚少[7]。基于此,本研究旨在通过探讨TRAIP在HCC中的表达情况,分析其在病理诊断和预后中的意义,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年2月至2019年2月医院收治行手术切除并经病理学确诊的60例HCC患者为研究组,其中男37例,女23例,年龄31～75岁,平均(46.32±5.63)岁。另选取同期本院体检健康者60例为对照组,其中男34例,女26例,年龄30～75岁,平均(45.85±5.82)岁。两组研究对象一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 纳入及排除标准 HCC患者纳入标准：①符合HCC诊断标准[8]：乙型肝炎病毒(HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)感染(HBV或HCV抗原阳性);影像学特征：多期CT或增强磁共振成像(MRI)检查显示肝脏占位在动脉期快速不均质血管强化,而静脉期或延迟期快速洗脱,结节≥1 cm;血清甲胎蛋白(AFP)≥400 μg/L持续1个月或≥200 μg/L持续2个月。②病理活检初次确诊为HCC者;③无治疗禁忌证;④检测前未使用化疗药物、靶向药物;⑤临床资料完整。健康者纳入标准：①无其他系统癌症病史;②无甲、乙、丙、丁、戊型肝炎。排除标准：①合并严重心、肺、肾功能障碍者;②伴有严重精神类疾病者;③活动性肝炎患者;④药物或酒精肝损伤者。

1.3 观察指标与方法 ①比较两组研究对象血清TRAIP水平,取研究组患者化疗后清晨空腹静脉血4 ml,对照组患者取体检外周静脉血4 ml,离心后取上清液,得血清,放置冷冻箱保存待检。采用酶联免疫吸附实验检测血清中TRAIP水平,试剂盒由上海择业生物科技有限公司提供,操作步骤按照说明书进行。②HCC患者血清TRAIP表达与病理参数间的关系,病理参数包括性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤包膜、微血管侵犯、肿瘤淋巴结转移(TNM)分期、分化程度等。③HCC患者TRAIP表达与其生存预后的关系。预后判定：60例HCC患者均按照常规流程治疗,出院后随访3年统计患者预后情况,以患者疾病进展及死亡为预后不良。④HCC患者预后的单因素Cox比例回归模型分析。⑤HCC患者预后的多因素Cox比例回归模型分析。

2 结果

2.1 两组研究对象TRAIP表达水平比较 见表1和图1。

图1 研究组和对照组血清TRAIP表达水平散点图

表1 两组研究对象TRAIP表达水平比较

2.2 HCC患者TRAIP表达水平与病理参数间的关系 TRAIP表达水平与HCC患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤包膜无明显相关性(P>0.05),但与微血管侵犯、TNM分期和分化程度相关(P<0.05)。见表2。

表2 HCC患者TRAIP表达与HCC患者病理参数间的关系 [n(%)]

2.3 HCC患者TRAIP不同表达水平与其生存预后的关系 根据随访3年结果及TRAIP在血清的表达进行Kaplan-Meier单因素生存分析显示,TRAIP高表达组预后生存时间低于TRAIP低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3和图2。

图2 TRAIP表达与HCC患者生存时间的生存曲线

表3 HCC患者TRAIP不同表达水平生存时间比较月)

2.4 HCC患者预后的单因素Cox比例回归模型分析 HCC患者性别、年龄、肿瘤包膜与患者预后不相关(P>0.05),肿瘤大小、微血管侵犯、TNM分期、分化程度及TRAIP表达与患者预后相关(P<0.05)。见表4。

表4 HCC患者预后的单因素Cox比例回归模型分析

2.5 HCC患者预后的多因素Cox比例回归模型分析 以HCC患者预后情况为因变量,肿瘤大小、微血管侵犯、TNM分期、分化程度及TRAIP表达为自变量,根据表5进行赋值,将上述赋值纳入Cox比例回归模型中,发现肿瘤大小>4 cm、微血管有侵犯、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度高、TRAIP呈高表达是HCC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。见表5、6。

表5 赋值

3 讨论

HCC是原发性肝癌最常见疾病类型之一,据报道,我国肝癌发病率占恶性肿瘤第2位,死亡数居第2位[9]。病毒感染(包括HBV和HCV)、肥胖、炎症、纤维化和肝硬化是HCC的主要危险因素[10]。由于HCC具有高度异质性、进展迅速、侵袭度高、易转移等恶性生物学行为及早期症状隐匿、现有筛查诊断方法敏感性与特异性不足,多数患者失去早期手术根治良机,手术切除率不足20%,术后5年内有近70%患者复发,且缺乏系统有效治疗药物,5年生存率仅为40%～50%,甚至更低[11]。术后高复发转移率严重影响患者长期生存率,是导致HCC预后不良重要原因[12]。因此,深入研究HCC复发转移机制及生物学特性,对于寻找更有效诊断和预后标志物、有效防治HCC复发转移具有重要意义。

泛素化是一种调节蛋白质细胞命运保守翻译后蛋白质修饰,涉及增殖、分化、凋亡及炎症等多种生物学功能,TRAIP异位表达可抑制TNF介导的NF-κB活化[13]。已有研究表明,泛素化过程是介导肿瘤侵袭迁移的重要因素[14]。泛素化修饰动态不可逆,E3泛素连接酶及去泛素化酶对维持泛素化平衡起关键作用。TRAIP是一种环状E3泛素连接酶,又称TRAF相互作用蛋白,是肿瘤坏死因子(TNF)诱导核因子(NF)-κB活化的负调节因子,其抑制功能主要通过TRNF2和TRAF1直接相互作用介导[15]。除此之外,TRAIP还参与DNA损伤反应、细胞分裂和致癌作用等许多细胞功能[16]。DNA损伤若不能得到及时修复可能会诱发免疫缺陷、癌症等重大疾病。最初,TRAIP被认为是基底细胞癌和乳腺癌的肿瘤抑制因子。有报道称,TRAIP在肝癌中表现为致癌基因,可通过驱动肝癌上皮-间质转化促进肿瘤发生[17]。本研究结果显示,研究组TRAIP水平显著高于对照组,提示TRAIP可能与HCC发生有关。分析可能是癌基因所诱导的肿瘤细胞转化的主要防御屏障,凋亡异常与肿瘤发生密切相关,而TRAIP介导的泛素化推定底物可通过参与细胞周期进程和细胞周期分化的控制,调节细胞增殖和凋亡。研究表明,TRAIP在肝癌患者中上调并在肝癌的发生发展中可促进肝癌的恶性行为[18]。本研究显示,TRAIP表达水平与HCC患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤包膜和AFP无明显相关性,但与微血管侵犯、TNM分期和分化程度密切相关,表明TRAIP表达可能是促进HCC恶性发生发展的有利因素,其中TNM分期Ⅲ～Ⅳ期HCC患者TRAIP高表达量显著高于Ⅰ～Ⅱ期,分化程度高HCC患者TRAIP高表达量显著高于分化程度中、低患者,表明TRAIP促进HCC侵袭。TRAIP高表达能激活NF-κB,而NF-κB激活诱导各种基因表达,并且还抑制细胞死亡,促进细胞凋亡,从而增加HCC恶性程度。

国外有研究表明,TRAIP缺乏能诱导小鼠胚胎发育中增殖缺陷及细胞凋亡[19]。此外,有研究表明,TRAIP高表达与肝癌患者预后呈负相关[20]。本研究中采用Kaplan-Meier法分析TRAIP表达水平与HCC患者生存预后关系发现,TRAIP水平高表达组生存率显著低于TRAIP水平低表达组,结果表明TRAIP呈高表达HCC患者预后生存时间较短。癌细胞能够加速细胞进程,减少细胞凋亡。泛素化是肿瘤重要相关生物学过程,E3泛素连接酶呈高表达水平时,对细胞凋亡起抑制作用,进而促进肿瘤发生发展,降低HCC患者生存率。也有研究指出,TRAIP能通过肿瘤抑制因子调节肿瘤发生及发展,其高水平可能会促进肿瘤发展进程[21]。本研究经Cox比例回归模型单因素分析发现,肿瘤大小、微血管侵犯、TNM分期、分化程度及TRAIP表达与HCC患者预后相关,提示上述因素可能影响患者预后。本研究分析发现,肿瘤大小>4 cm、微血管有侵犯、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度高、TRAIP呈高表达是HCC患者预后的独立危险因素,表明上述HCC患者更易预后不良。故在治疗过程中,应对上述特征HCC患者加强监测,及时采取相应治疗措施,以提高患者预后生存率。

综上所述,TRAIP在HCC中表达显著上调,其表达水平与患者临床TNM分期、生存情况密切相关,能促进HCC迁移及侵袭,TRAIP高表达是HCC患者预后不良的危险因素,是预测HCC患者预后新靶点,同时也是HCC发生发展的影响因素,有望成为HCC潜在治疗新靶点。但本研究纳入HCC样本量较少,未来应扩大样本量进一步验证TRAIP表达对HCC病理诊断及预后的影响。