外周血淋巴细胞亚群计数对晚期不可手术非小细胞肺癌患者预后的影响

许伦 李英 尤玮

【摘要】  目的  探討治疗前外周淋巴细胞亚群计数对晚期不可手术非小细胞肺癌（NSCLC）患者预后的预测价值。方法  收集2018年1月- 2020年1月医院确诊的98例Ⅲ～Ⅳ期不可手术的NSCLC患者，并收集同期50名健康体检者作为对照组。检验患者淋巴细胞亚群计数。病例组采用Kaplan-Meier 法计算患者总生存期，并用Log-rank检验进行比较。多因素分析采用Cox回归模型，评估治疗前外周血中T淋巴细胞亚群（CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+T细胞）影响晚期不可手术NSCLC患者进展的因素。结果  与健康体检者相比，NSCLC患者的CD3+及CD8+明显低于健康对照组，CD4+/CD8+比值、NK细胞明显高于健康对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。多因素Cox回归分析结果表明，患者外周血的CD3+、CD8+、CD4+/CD8+水平对疾病进展有影响（P<0.05）。结论  治疗前患者外周血的CD3+、CD8+水平升高，CD4+/CD8+升高是影响患者进展的独立危险因素。

【关键词】  晚期非小细胞肺癌；淋巴细胞亚群；免疫；预后

中图分类号  R734.2    文献标识码  A    文章编号  1671-0223（2023）15--04

Influence of peripheral blood lymphocyte subsets on prognosis of patients with advanced non-small cell lung cancer  Xu lun， Li Ying， You Wei. Zigong Fourth People's Hospital， Zigong 643000， China

【Abstract】  Objective  To investigate the prognostic value of peripheral lymphocyte subsets before treatment in patients with advanced inoperable non-small cell lung cancer（NSCLC）. Methods  The clinical characteristics of 98 NSCLC patients diagnosed with stage Ⅲ-Ⅳ non-surgical NSCLC in the hospital from January 2018 to January 2020 were collected， and 50 healthy individuals in the same period as the control group. Test the patient's lymphocyte subpopulation count. The case group used the Kaplan-Meier method to calculate the total survival time of patients， and compared it with the Log-rank test. Multivariate analysis used Cox regression model to evaluate the factors that affect the progression of advanced non-surgical NSCLC patients with peripheral blood T lymphocyte subsets （CD3+T cells， CD4+T cells， CD8+T cells， CD4+/CD8+T cells） before treatment. Results  Compared with healthy individuals undergoing physical examination， the CD3+and CD8+levels in NSCLC patients were significantly lower than those in the healthy control group， while the CD4+/CD8+ratio and NK cells were significantly higher than those in the healthy control group， with statistical significance （P<0.05）. The results of multivariate Cox regression analysis showed that the levels of CD3+， CD8+， CD4+/CD8+in patients' peripheral blood had an impact on disease progression （P<0.05）. Conclusion  Before treatment， the levels of CD3+ and CD8+ in the patient's peripheral blood increased， and CD4+/CD8+ elevation is an independent risk factor affecting patient progression.

【Key words】   Advanced non-small cell lung cancer; Lymphocyte subsets; Immunity; Prognosis

肺癌是最常见的癌症，也是癌症相关死亡的主要原因[1]。非小细胞肺癌（NSCLC）占肺癌的75%，大多数诊断为晚期，其5年生存率仅为15%。据估计，2015年中国新增肺癌病例总数为733300例，肺癌死亡人数为610200例[2]。随着Burnet提出的肿瘤免疫监测理论的发展，对肿瘤免疫的研究不断深入，越来越多的研究者认识到肿瘤的发生发展与机体的免疫功能密切相关[3]。众所周知，癌症发展的每个阶段都极易受免疫细胞的调节。尽管针对肿瘤的适应性免疫细胞的充分激活可能导致恶性细胞的根除，但实际上，抗肿瘤细胞毒性T细胞活性和细胞因子介导的肿瘤细胞溶解抑制了肿瘤生长[4]。患者免疫系统对临床结果的潜在影响不仅具有学术意义，而且对于确定预测化疗和放疗反应的预后标志物也具有重要意义。因此，准确评估癌症患者外周血淋巴细胞亚群的百分比和绝对计数至关重要。外周血中淋巴细胞亚群（AL）的绝对数量已通过双平台技术检测，传统方法是将流式细胞仪测定的阳性细胞亚群百分比与自动血液分析仪获得的淋巴细胞绝对计数进行耦合[5]。一些研究已经证明，淋巴细胞计数可以影响NSCLC、直肠癌、卵巢癌、自然杀伤细胞/T细胞淋巴瘤等的无病生存率[6]。所有这些只表明淋巴细胞数量是影响因素，本研究通过流式细胞术检测NSCLC患者外周血中CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK细胞的百分比和绝对数，分析淋巴细胞亚群与NSCLC患者免疫功能的关系。

1  对象与方法

1.1  调查对象

将2018年1月- 2020年1月医院确诊的98例Ⅲ～Ⅳ期不可手术的NSCLC患者作为调查对象。入组标准：据WHO分类，通过病理学和免疫组化确定不可手术的Ⅲ～Ⅳ期NSCLC的诊断；患者均未出现感染征象或者患有感染性疾病，或患有影响炎性指标的疾病，如白血病等；有完整的病历和随访资料。 排除标准：确诊后未经过系统性全身抗癌治疗；急性炎性反应或感染性疾病及相关并发症；其他恶性肿瘤、血液系统及自身免疫疾病史；半个月内使用激素治疗；临床资料缺失者。所有患者均经过MDT讨论不可行手术治疗，且治疗是以铂类为基础的化疗。98例患者中，男63例，女35例；年龄33～86岁，平均年龄63.15±10.19岁；低分化52例，中高分化46例；腺癌60例，鳞癌38例；中位随访时间为16.6个月（1～64个月），随访结束时，进展48例。根据组间性别、年龄等基本资料均衡可比的原则选择医院同期50名健康体检者作为对照，男32例，女18例；年龄31～84岁，平均年龄61.43±11.98岁。

1.2  资料收集

收集调查对象的一般资料（性别、年龄、吸烟史、身高及体重），临床资料（分化程度、病理类型、病理分期、淋巴细胞亚群计数和患者治疗以及随访资料。收集资料的时间节点为患者确诊后，进行抗肿瘤治疗前。

1.3  随访

评估的主要研究终点为无进展生存期（PFS），即疾病患者从接受治疗开始，到观察到疾病进展或者发生因为任何原因的死亡的时间。采用电话与门诊相结合的方式进行随访，确诊2年内对患者每3个月随访1次，2年后每6个月随访1次。复查内容包括血常规、肝功能、肿瘤标志物、淋巴细胞亚群计数、胸片、胸部CT，每年至少复查1次胸部CT。随访截止时间为2021年12月。

1.4  统计学处理

采用 SPSS 24.0统计学软件处理数据，计量资料以“均数±标准差”表示，组间均数比较采用t检验；计数资料采用χ2检验。以患者疾病进展为终点，采用Kaplan-Meier法计算累积生存率，组间比较采用Log-rank检验；采用Cox回归模型行多因素分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  NSCLC患者与健康体检者的淋巴细胞亚群的对比

通过对比，NSCLC患者的CD3+及CD8+明显低于健康对照组，CD4+/CD8+比值、NK细胞明显高于健康对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2  T淋巴细胞亚群与NSCLC患者进展的单因素分析

Kaplan-Meier生存分析表明， CD3+水平降低（χ2=14.620， P=0.003）、CD4+水平降低（χ2=4.450， P=0.036）、CD8+水平降低（χ2=11.400， P=0.012）、CD4+/CD8+水平降低（χ2=5.026， P=0.025）、NK细胞水平升高（χ2=8.977， P=0.030）的晚期NSCLC患者的无进展生存期显著延长。见图1～5。

圖1  CD3+与患者无进展生存的关系

图2  CD4+与患者无进展生存的关系

图3  CD8+与患者无进展生存的关系

图4  CD4+/CD8+与患者无进展生存的关系

图5  NK细胞与患者无进展生存的关系

2.3  T淋巴细胞亚群与NSCLC患者预后关系的多因素分析

以疾病有无进展为因变量（进展=1，无进展= 0），以性别、年龄、肿瘤分期、病例类型、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK细胞为自变量，进行多因素Cox回归分析，结果显示，患者的CD3+、CD8+水平及CD4+/CD8+升高是造成患者进展的独立危险因素（P<0.05）。见表3。

3  讨论

肺癌是全世界癌症相关死亡的主要原因。大多数肺癌患者通常死于复发和远端转移[7]。目前，对肺癌的预后的预测仍然是一个挑战。淋巴细胞亚群是一种异质性的恶性细胞群，它们扩散到血液循环中，在存在各种细胞因子的情况下逃避免疫监视。在一定条件下，这些细胞可以进入靶器官并促进癌细胞的转移。在此基础上，外周血淋巴细胞亚群被认为是原发性和转移性癌症的预后因素[8-9]。在实体瘤患者的外周血中检测到癌细胞，外周血淋巴细胞亚群也被认为是转移和复发的来源。在过去几十年中，据报道免疫系统可以抑制癌细胞的进展。在健康人外周血中检测到大量免疫细胞，包括T淋巴细胞、NK细胞和B淋巴细胞，它们在免疫监视、免疫抑制和杀伤作用中起着至关重要的作用。NSCLC患者与外周血淋巴细胞亚群变化相关，提示外周免疫监测的下降与肺癌进展密切相关。这一过程是基于NK细胞升高、CD3+、CT4+和CD8+T细胞的降低，造成免疫紊乱导致癌细胞扩散到循环中，逃避免疫细胞的杀伤作用，并在迁移到靶器官后形成转移，最终导致疾病进展和低生存期。越来越多的证据表明，免疫状态与宿主癌症的发病机制和发展密切相关[10-11]。在正常情况下，T细胞亚群之间的相互作用对个体的免疫功能至关重要。然而，在T细胞亚群数量和功能异常改变的情况下，癌细胞可能在存在免疫功能障碍和病理变化的情况下逃避免疫攻击。据悉，T细胞亚群由具有不同功能的各种亚群组成，其中CD3+细胞被定义为代表整个免疫状态的总T淋巴细胞，包括CD4+和CD8+细胞。NK细胞在抗肿瘤免疫和抑制恶性肿瘤细胞扩散中起着重要作用。这些细胞可以在没有致敏的情况下通过分泌细胞毒性细胞因子杀死癌细胞，这有助于预防肿瘤的侵袭和转移，最终阻止了癌细胞的早期扩散。

众所周知，癌症患者外周血中的T淋巴细胞亚群可能出现异常变化，这与恶性病变发病时CD3+、CD4+和CD8+细胞失衡引起的免疫反应失衡有关，尤其是CD4+/CD8+平衡失调[12-13]。本研究采用流式细胞术分析晚期NSCLC患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞，结果表明，与健康对照组相比，晚期NSCLC患者外周血中总T淋巴细胞中CD3+和CD8+、细胞的数量显著减少。此外，与健康对照组相比，患者的CD4+/CD8+、NK细胞数值明显升高。可见，晚期NSCLC患者可能存在免疫功能紊乱。同时，经过生存分析表明，患者治疗前外周血淋巴细胞亚群异常表明患者预后较差，同时，多因素分析表明CD3+、CD8+、CD4+/CD8+计数可以作为预测晚期NSCLC患者预后较好的独立指标。这些结果表明NSCLC患者存在免疫抑制，同时免疫系统对癌细胞的识别和杀伤效率降低，从而导致癌细胞的生长和转移。在此基础上，晚期NSCLC患者的免疫功能受到严重损害，这阻碍了宿主对癌细胞的识别和杀伤，并引发癌细胞的广泛传播。随着疾病的进展，T淋巴细胞亚群的平衡被破坏，同时免疫功能受到抑制，导致扩散在外周血中的癌细胞逃避免疫监视。因此，本研究结果证实，晚期NSCLC患者外周血T淋巴细胞亚群的异常分布与患者预后密切相关[14-15]。

综上，晚期NSCLC患者的淋巴细胞亚群绝对计数较低，表明患者的免疫功能受损。患者受损的免疫系统确实无法阻止肿瘤进展[16]。在临床治疗过程中，应注意患者的免疫状态，提高免疫功能可增强自身抗肿瘤能力。

4  参考文献

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[2021-12-21收稿]