鱼腥草酚类物质的比较分析

扶 蝶，杨 刚，党 娟

（六盘水市水城区农业农村局，贵州 六盘水 553699）

0 引言

鱼腥草（Houttuynia cordata Thumb），又名侧耳根、猪鼻孔、折耳根，是三白草科蕺菜属草本植物[1]，因其气味类似鱼腥味，故而得名鱼腥草[2]，因其独特的鱼腥味味道，也使得鱼腥草成为人们餐桌上的一道野菜佳肴，也是贵州的一种特色菜品[3-4]。鱼腥草富含丰富的蛋白质、维C、可溶性糖等营养成分[5-6]。此外，鱼腥草还具有增强机体免疫力、抗菌、抗病毒、利尿、防辐射、降血糖、消肿排脓、清热解寒、利尿同淋等功效[7-8]。同时，鱼腥草也具有很高的食用价值，是卫生部确定的药食两用的重要植物资源之一[9]。

酚类化合物是植物生长自然选择过程中产生的次级代谢产物，并且广泛存在于植物中[10-11]。天然来源的酚类化合物分子量小，具有抗氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器、扩张毛细血管、防动脉硬化、保护心血管及疏通微循环的功能[7，12-13]。鱼腥草中次生代谢产物主要有酚类化合物、挥发油、生物碱、木质素和有机酸等物质[14]，其中，酚类类化合物含量较高，主要包括绿原酸[15-16]、阿福豆苷、芦丁[17]、槲皮苷[18]、槲皮素[19-20]、异槲皮苷等六类化合物。鱼腥草中酚类物质的提取方法有水提法、有机溶剂提取法、水与有机溶剂混合提取法、超声波辅助提取法[21]等；鱼腥草中酚类物质的测定方法主要有分光光度法、高效液相色谱法（HPLC）、色谱-质谱联用法及毛细管电泳-电化学检测（CE-ED）[22]等方法。主要阐述以超声提取法从鱼腥草中提取酚类物质，再以高效液相色谱法测定其中此6 种主要酚类化合物含量的方法，其优点在于精密度高、重现性好等。

1 试验材料与方法

1.1 仪器与试剂

1.1.1 试验仪器

LC-20AT 型高效液相色谱仪及LC Solution2.50工作站，25 μL 手动进样器；AL104 型电子分析天平，Mettler 仪器公司产品；KQ-500DE 型医用超声波清洗机（功率360 W，频率35 kHz），北京医疗设备二厂产品；M305880 型全玻璃微孔滤膜过滤器，恒温干燥烘箱，天津市斯特仪器有限公司产品；80-2 型离心机，江苏金达产品；1.5 mL 玻璃样品瓶，安捷伦科技有限公司产品。

1.1.2 试验药品与试剂

甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），甲酸（分析纯），购自当地化学试剂销售公司；绿原酸、芦丁、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素标准品，北京百灵威科技有限公司提供；纯净水，娃哈哈集团有限公司提供。

1.1.3 分析材料

试验采集的鱼腥草样品来源于贵阳市花溪区、云岩区、观山湖区、南明区和乌当区。

鱼腥草样品的来源信息见表1。

表1 鱼腥草样品的来源信息

1.2 分析方法

测定鱼腥草中绿原酸、芦丁、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮苷和槲皮素含量的分析方法主要参照已报道的文献[3]进行分析。

1.2.1 对照品溶液的配制

分别称量绿原酸、芦丁、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素对照品用甲醇配置成1 mmol/L 标准储备溶液，根据试验需要配置成各组分浓度分别为24.93，25.16，24.80，25.24，24.89，24.68 μmol/L，保存于冰箱中，待用。

1.2.2 HPLC 条件

高效液相色谱仪HPLC20-AT，配有二极管阵列检测器DAD 及Lc-solution 2.50 色谱工作站，色谱柱：Him-packCLC-ODS（150 mm×6.0 mm，5 μm，SN：61526630）。柱温：35 ℃，流动相：A 相（有机相）：甲醇∶乙腈= 5∶11（V/V），B 相（水相）：甲酸水溶液（0.1%，V/V），梯度洗脱程序为表2 所示，检测波长为345 nm。

表2 梯度洗脱程序

梯度洗脱程序见表2。

1.2.3 鱼腥草样品处理

将采集的鱼腥草叶片，洗净表面泥垢，选取长势相当的鱼腥草叶子，放在通风处自然阴干，将鱼腥草叶子用剪刀剪碎，先在电子分析天平上称取空瓶子质量，去皮，再精确称取剪碎后的鱼腥草颗粒0.300 0 g，每一份贴上标签，之后加入3.0 mL 甲醇，密封、静置浸泡15 min，将鱼腥草甲醇混合液容器放在KQ-500DE 型医用超声波清洗机上，超声提取30 min，提取结束后取出，静置冷却5 min，采用0.45 μm 有机滤膜对提取液进行过滤，滤液保存于4 ℃冰箱中，等待下一步用于高效液相色谱分析。

1.2.4 鱼腥草叶片6 种酚类物质含量的测定

将绿原酸、芦丁、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素混合标样溶液与鱼腥草叶片待测样品溶液分别进样，进行HPLC 分析，依据外标法，根据峰面积及浓度关系计算出样品中各物质含量。

对照品（a） 和典型鱼腥草样品（b，c） 的高效液相色谱图见图1，鱼腥草样品中6 种酚类物质的含量见表3。

图1 对照品（a） 和典型鱼腥草样品（b，c） 的高效液相色谱图

表3 鱼腥草样品中6 种酚类物质的含量

2 结果与分析

鱼腥草样品中绿原酸、芦丁、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素的含量图见图2。

图2 鱼腥草样品中绿原酸、芦丁、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素的含量图

表3 和图2 显示了来源贵阳市花溪区、云岩区、观山湖区、南明区和乌当区29 个鱼腥草样品中绿原酸、芦丁、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素含量的分析结果。结果显示在不同地点，鱼腥草绿原酸、芦丁、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素含量差异存在差异，有些差异显著。

由图2 可知，在南明区鱼腥草绿原酸含量最高，而其他含量较低；芦丁含量在花溪区和南明区的样品中均较高，但南明区也出现了含量最低的样品；阿福豆苷含量的最高值出现在观山湖区，最低值出现在花溪区的样品中；异槲皮苷含量以花溪区的样品为最高，乌当区的含量较低；槲皮苷的含量在观山湖区的样品中有最大值，在几个区中的含量分布显著差异，槲皮素含量在花溪区有2 个样点比较高，乌当区也存在槲皮素含量较高的样品，其他的含量都较低。

由表3 及图2 可知，绿原酸、芦丁、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素含量在贵阳各个区的含量差异显著。总体上看来，贵阳各个区芦丁、槲皮素含量总体较高，如在花溪区，编号HX-5，含量为1 179.63 mg/kg 和1 301.1 mg/kg，含量区间在未检出至1 357.04 mg/kg，但各个地方的含量差异很大。除此之外，总体含量较高的是异槲皮苷，各个地区的异槲皮苷含量为26.45~554.97 mg/kg，各个地区的含量差异显著。在有些样品中，绿原酸与槲皮苷的总体含量相当，但各个地方含量也存在差异，绿原酸含量最高为南明区（编号：NM-4），含量为637.54 mg/kg，槲皮苷含量总体看来差异不显著，含量区间为6.68~356.52 mg/kg，槲皮苷的含量在此次的5 个区29 个样品中出于较低的含量水平。整体含量最低的为阿福豆苷，含量最高仅为160.98 mg/kg，最低达到了5.80 mg/kg。

由以上试验中所测的贵阳市花溪区、云岩区、观山湖区、南明区、乌当区等5 个区29 个样品中绿原酸、芦丁、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素的含量分布来看，虽然所选样品都同属贵州省贵阳市，但是贵阳市各个具体地方不同环境下生长的鱼腥草，其酚类物质的含量存在较长差异。试验所选取的鱼腥草叶子均为长势相当的叶子，因此，试验所得的数据具有一定的可信度，根据结果可知，即使是在贵阳市的同一个区内，鱼腥草叶子中绿原酸、芦丁、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素的含量也存在差异显著，而且，试验所用的样品并非是在同一时间采集的，由此也可以猜测，不同时间采集的鱼腥草，其酚类物质的含量也会存在差异。

鱼腥草样品绿原酸、芦丁、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素的含量不仅存在着地区上的差异，在同株植物中，芦丁，绿原酸、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮素、槲皮苷的含量也存在着差异，这可能与鱼腥草的生长阶段、生长环境、采集时间与采集方式有关，在采集与清洗的过程中，鱼腥草中酚类物质的含量可能会受到不同程度的影响，因而对鱼腥草进行前期处理时要尽量保持一致，才能不至于使得结果出现比较大的偏差。根据所查阅的文献，鱼腥草植株在不同生长时期，不同生长环境下的各类物质含量是不一样的，而且还存在着较大的差异，但是每种物质含量的变化之间所呈现的规律与联系还需进一步研究。

3 结论

通过对贵阳市不同来源的29 个鱼腥草叶片样品中芦丁、绿原酸、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素含量测定，初步明确了不同来源鱼腥草芦丁、绿原酸、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素含量存在差异，有些差异显著；并且来源鱼腥草样品芦丁、绿原酸、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素含量未表现出规律性变化。这可能暗示了鱼腥草叶片中的芦丁、绿原酸、阿福豆苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素受多种因素（如气候、生境、土壤等） 影响，为鱼腥草的栽培技术以及提高其鱼腥草的质量提供技术支持。