某品牌抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒的性能评价

尚晓楠（通信作者），尤瑞国，李忠信，谢茜

郑州安图生物工程股份有限公司 （河南郑州 450016）

原发性胆汁性胆管炎（primary biliary cholangitis，PBC）是一种慢性自身免疫性肝内胆汁淤积性疾病。患者临床症状主要为乏力和皮肤瘙痒，随着病程的发展会出现消化道出血、肝性脑病、胆汁淤积及肝硬化。PBC 的诊断需要综合影像学、组织学、生物化学及免疫学检查结果。中华医学会肝病学分会发布的《原发性胆汁性胆管炎的诊断和治疗指南（2021）》中明确了PBC 的诊断标准：（1）存在胆汁淤积的生物化学证据[主要为碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）和γ-谷氨酰转移酶（gamma-glutamyltranspeptidase，GGT）升高]，且影像学检查排除肝外或肝内大胆管梗阻；（2）抗线粒体抗体/抗线粒体抗体-M2（抗线粒体抗体-M2 是诊断PBC 特异性最高的抗线粒体抗体亚型）阳性，或抗gp210 抗体、抗sp100 抗体阳性；（3）存在非化脓性破环性胆管炎和小胆管破坏的组织学证据；（4）满足以上3 条标准中的2 条即可诊断为PBC[1]。以上诊断指标中，抗sp100 抗体的特异性较高[2]，已被列入《2017 年欧洲肝病学会临床实践指南》[3]，尤其适用于抗线粒体抗体阴性的PBC患者[4-6]。

目前，市场上检测抗sp100 抗体的方法主要包括间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence，IIF）（以HEp-2 细胞为基质，荧光模型为典型的“核点型”[7]）、酶联免疫法、免疫印迹法和化学发光法。IIF 是进行自身抗体初筛的重要手段，但目前我国的IIF 检测仍以手工操作为主，结果判断需人工阅片，这会对检测结果产生较大的主观影响。酶联免疫法具有较高的灵敏度和特异性，但自动化程度低、通量小。免疫印迹法同样具有较高的灵敏度和特异性，但尚无法实现自动化，且其检测通量、检测效率均无法满足当前临床需求，尤其是条带判断中还可能引入主观偏倚，影响检测结果的准确性。郑州安图生物工程股份有限公司研发生产的抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒采用化学发光法进行检测，可配合全自动磁微粒化学发光免疫分析仪使用，不仅具有较高的灵敏度和特异性，且具有检测方法稳定快速、检测范围宽、操作简单且自动化程度高等优点。本研究参照美国临床和实验室标准协会（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）的EP 文件，对该试剂盒进行性能评价，以期为PBC 的辅助诊断提供可靠指标。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 血清标本

收集2022 年1—6 月某医院收治的132 例PBC患者的血清标本，以及同期的185 名健康体检者的血清标本。以上标本均采用郑州安图生物工程股份有限公司的抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒检测抗sp100 抗体IgG 浓度，重复检测3 次，计算平均值作为标定浓度。其中32 份PBC 患者的血清标本和35 份健康体检者的血清标本用于性能评价，100 份PBC 患者的血清标本和150 份健康体检者的血清标本用于临床比对。

1.1.2 仪器和试剂

郑州安图生物工程股份有限公司的抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒（检测方法为化学发光法）。参比试剂盒包括依诺瓦诊断公司的抗sp100 抗体检测试剂盒（检测方法为酶联免疫法，可体外定性检测人血清抗sp100 抗体IgG，阳性判断值为25 单位）和江苏浩欧博生物医药股份有限公司生产的自身抗体谱5 项检测试剂盒（检测方法为化学发光法，型号为6：sp100，可体外定性检测人血清或血浆抗sp100 抗体IgG，参考区间为0～20 RU/ml）及配套校准品和质控品。检测所用仪器包括郑州安图生物工程股份有限公司的AutoLumo A2000 Plus 全自动化学发光测定仪、AutoPhomo 酶标仪，重庆科斯迈生物科技有限公司的SMART 6500 型全自动化学发光测定仪。

所用试剂包括血红蛋白（Lee Biosolutions.Inc，产品编号338-10）、三酰甘油（东京化成工业株式会社，产品编号G0087）、胆红素（Sigma-Aldrich，产品编号B4126-1G）、生 物 素（Thermo Fisher Scientific，货号A39257）、氯仿（Sigma-Aldrich，产品编号C2432）、二甲基亚砜（Sigma-Aldrich，产品编号D8418）。

1.2 方法

1.2.1 灵敏度

参考EP17-A 文件[8]进行灵敏度检测。取5 份标定浓度接近0 AU/ml 的血清标本，每份标本每日重复检测3 次，共检测4 d，建立空白限（limit of blank，LoB）。取5 份标定浓度为1～4 倍LoB 的血清标本，每份标本每日重复检测3 次，共检测4 d，建立检出限（limit of detection，LoD）和定量限（limit of quantitation，LoQ）。

(1) 松散岩孔隙水：分布于东、西山沟中，主要由第四系冲洪积层组成，厚度1～8 m。普遍具二元结构，上部为粉质粘土，下部为含砂卵砾石层。渗透性良好，富水性弱-中等，与下伏碳酸盐裂隙溶洞含水层水力联系密切。主要由大气降水补给，动态变化大。

1.2.2 精密度

参考EP5-A2 文件[9]进行精密度检测。取标定浓度分别为11.20、22.17、81.82 AU/ml（低、中、高水平）的血清标本各1 份，进行重复性和中间精密度检测。重复性检测：每份标本重复检测10 次。中间精密度检测：每份标本每日检测2 次，每次检测间隔2 h，且每次均进行复孔检测，共检测20 d，共检测80 次。计算重复性和中间精密度检测结果的标准差和变异系数（coefficient of variation，CV）。

1.2.3 线性区间

参考EP6-A 文件[10]进行线性区间检测。取1 份标定浓度为2.21 AU/ml 的低水平血清标本和10 份标定浓度为200.00～260.00 AU/ml 的高水平血清标本，按10.0 ∶0.0、9.8 ∶0.2、9.7 ∶0.3、9.15 ∶0.85、9.0 ∶1.0、7.0 ∶3.0、5.0 ∶5.0、3.5 ∶6.5、2.0 ∶8.0、1.5 ∶8.5、0.0 ∶10.0 的比例配制成10 组具有梯度水平的线性标本（每组11 份）。每份标本重复检测3 次，比较标定浓度与理论浓度（根据高、低水平血清标本的标定浓度和稀释比例推算），以相对偏差＜±10%作为标准得出线性区间。

1.2.4 准确度

参考EP9-A2 文件[11]进行准确度检测。取5 份标定浓度分别为0.39、0.32、1.85、0.36、15.58 AU/ml的低水平血清标本和8份标定浓度为120.00～200.00 AU/ml的高水平血清标本，以9 ∶1 的比例混合得到8 份回收标本。每份标本重复检测3 次后求均值，并计算回收率。回收率R=［C×（VS+V0）－C0×V0］/（CS×VS）×100% ，式中C为回收标本的浓度，VS为高水平标本的体积，V0为低水平标本的体积，CS为高水平标本的浓度，C0为低水平标本的浓度。回收率R在90%～110% 范围内说明准确度符合要求。

1.2.5 抗干扰实验

1.2.6 临床比对

用抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒（参考区间为0～20 AU/ml）和两个参比试剂盒分别检测100 例PBC 患者的血清标本、150 例健康体检者的血清标本。采用交叉四格表的方法计算待抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒与两个参比试剂盒的阳性符合率、阴性符合率和总符合率及95%CI，同时对检测结果进行一致性分析。

1.3 统计学处理

采用SPSS 25.0 统计软件进行数据统计。采用Kappa检验分析检测结果的一致性，Kappa≥0.75 说明一致性较好，0.4 ≤Kappa＜0.75 说明一致性一般，Kappa＜0.4 说明一致性较差。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 灵敏度

抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒的LoB、LoD、LoQ 分别为1.0、2.0、3.0 AU/ml。

2.2 精密度

抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒重复性的CV＜4.00%，中间精密度的CV＜6.00%，见表1。

表1 抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒精密度检测结果

2.3 线性区间

10 组线性标本的标定浓度与理论浓度的相对偏差均＜10%，可确定抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒的线性区间为10～200 AU/ml。其中1 组标本的检测结果见表2。

表2 抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒线性区间检测结果

2.4 准确度

抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒的回收率R在90%～110%之间，准确度符合要求，见表3。

表3 抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒回收率检测结果

2.5 抗干扰实验

血红蛋白、三酰甘油、胆红素、生物素浓度分别为3 000 mg /dl、6 000 mg /dl、50 mg /dl、250 ng/ml时，抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒的干扰率在±10%范围内，见表4。

表4 抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒抗干扰实验检测结果

2.6 临床比对

抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒与两个参比试剂盒的临床比对结果见表5 和表6。抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒与依诺瓦诊断公司参比试剂盒的阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为96.00%（95%CI：86.54%～98.90%）、99.00%（95%CI：96.43%～99.73%）和98.40%（95%CI：95.96%～99.38%），Kappa值为0.950（P＜0.001），表明两者检测结果的一致性较好；与江苏浩欧博公司试剂盒的阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为96.15%（95%CI：87.02%～98.94%）、100.00%（95%CI：98.10%～100.00%）和99.20%（95%CI：97.13%～99.78%），Kappa值为0.975（P＜0.001），表明两者检测结果的一致性较好。

表5 抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒与抗sp100 抗体检测试剂盒的检测结果比较（份）

表6 抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒与自身抗体谱5 项检测试剂盒的检测结果比较（份）

3 讨论

血清抗sp100 抗体水平对PBC 患者的病情监测和治疗方案的制定具有一定的价值，但目前临床上可用于检测抗sp100 抗体水平的试剂盒（如市场占有率较高的依诺瓦诊断公司的抗sp100 抗体检测试剂盒和江苏浩欧博生物医药股份有限公司生产的自身抗体谱5 项检测试剂盒）均采用定性检测，无法动态监测抗体水平的变化[13]。因此，急需能够定量检测抗sp100 抗体水平的试剂盒。

郑州安图生物工程股份有限公司的抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒是基于定量需求进行开发的，建立了相关的定量检测指标。但由于缺乏参考物质和标准品，目前该试剂盒的量值仅可实现企业内部溯源。本研究对该试剂盒的性能评价结果显示，其精密度和准确度均可满足临床需求，这将保证检测结果的可靠性。相比定性检测试剂盒，该试剂盒具有明确的分析灵敏度指标、线性区间，这将有助于指导临床医师准确判断检测结果。同时，该试剂盒的抗干扰能力较强（血红蛋白、三酰甘油、胆红素、生物素浓度分别为 3000 mg /dl、6000 mg /dl、50 mg /dl、250ng/ml 时，干扰率在±10%范围内）。

综上所述，该品牌抗sp100 抗体IgG 检测试剂盒性能良好，可满足临床检测需要。