血管内皮细胞生长因子表达变化对肝癌合并冠心病患者预后的评估价值研究

滕立勤 王思寅 董 颖

肝癌是发生于肝脏的恶性肿瘤,早期常无症状,病情不断进展可逐渐诱发乏力、肝区疼痛、腹胀等症状,若不及时治疗,癌细胞可经血液循环等多种途径发生转移,增加患者死亡风险[1-2]。冠心病则为常见心血管疾病,多由冠脉供血不足所致,可引起心肌缺血缺氧性损伤,影响心功能[3]。两种疾病合并后可使得病情更为复杂,肝癌治疗过程中需做好冠心病基础治疗,以避免急性心血管事件的发生,改善患者预后。肝癌治疗多以早确诊、早治疗为原则,早期患者预后尚可,中晚期则生存率较低,且肝癌恶性程度高,即使经手术为主的综合方案治疗后,仍存在较高的复发转移风险,尤其在合并冠心病的前提下,其预后更差,故临床需深入研究肝癌相关分子机制,为抗肿瘤治疗寻找新的靶点,以便于提高整体生存率[4]。血管内皮细胞生长因子(VEGF)是1种促进血管内皮细胞生长的特异性因子,其在多种恶性肿瘤中存在异常表达,与肿瘤血管生成关系密切[5-6]。同时,VEGF在冠心病中也存在明显表达,与冠心病患者动脉狭窄程度存在一定相关性。但VEGF表达在肝癌合并冠心病患者中相关研究较少,且具体表达及与预后的关系值得进一步研究。鉴于此,本研究分析VEGF表达与肝癌合并冠心病患者预后的相关性。

1 材料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2017年5月至2019年5月我院收治的90例肝癌合并冠心病患者临床资料。其中男性49例,女性41例;年龄51～76岁,平均年龄(62.52±5.32)岁;体质量指数18.6～28.3 kg/m2,平均体质量指数(23.63±2.19)kg/m2;冠心病病程1～8年,平均病程(3.86±0.42)年;Child-Pugh分级:50例A级,40例B级;文化程度:35例高中及以上,55例初中及以下。纳入标准:经手术病理证实为肝癌;经冠脉造影确诊为冠心病;精神状态正常;临床资料完整。排除标准:存有肝肾功能衰竭;存有凝血功能障碍;合并急慢性感染;伴有其他恶性肿瘤;术前行放化疗。

1.2 方法

所有患者均行手术治疗,术中切除癌组织,并切除癌旁正常组织,术后及时送检,采用免疫组织化学法检测癌组织及癌旁组织内VEGF表达。免疫组化染色:组织标本先用10%甲醛溶液固定24 h后,之后常规脱水,以石蜡包埋,连续切片,保持厚度4 μm;采用柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复,待自然冷却后,以PSB冲洗,之后3%过氧化氢封闭;滴加一抗后在4摄氏度环境下孵育过夜,再以PBS液冲洗,加入二抗后孵育30 min,再次PBS液冲洗;滴入DAB显色液进行显色处理,返蓝10 min,以蒸馏水冲洗,苏木精复染,再以清水冲洗后,酒精分化,返蓝,梯度酒精脱水,二甲苯透明,最后以中性树胶封片,镜下观察染色情况。结果判断:VEGF阳性表达可在细胞膜或细胞质内出现棕褐色颗粒,并每张切片选取5个高倍镜视野观察,计算阳性细胞比;着色强度:0分为无色,1分为黄色,2分为棕黄色,3分为棕黄色;阳性细胞比:0分为<5%,1分为6%～25%,2分为26%～50%,3分为51%～75%,4分为>75%;两者乘积>3分为阳性,反之为阴性。所有患者开展长达3年随访,随访内容为存活情况,随访方式为电话或门诊复查。

1.3 观察指标

(1)VEGF表达情况:两组均采集癌组织及癌旁组织行免疫组织化学法检测,比较癌组织与癌旁组织内VEGF表达差异。(2)VEGF表达与其临床病理特征的关系:比较不同VEGF表达患者年龄、性别、体质量指数、肿瘤直径、分化程度、肿瘤分期、肝功能分级、淋巴结转移、冠脉狭窄程度等的差异,其中冠脉狭窄程度通过冠脉造影进行明确。(3)VEGF表达与预后间相关性:随访3年,统计90例患者存活情况,比较不同VEGF表达患者存活率。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 VEGF表达情况

癌组织VEGF阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 两组VEGF表达情况比较(例,%)

2.2 VEGF表达与患者临床病理特征的关系

肿瘤直径≥5 cm、分化程度低分化、肿瘤分期Ⅲ期、有淋巴结转移、冠脉狭窄程度重度狭窄患者VEGF阳性表达率,高于肿瘤直径<5 cm、分化程度中高分化、肿瘤分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移、冠脉狭窄程度轻中度狭窄患者,差异有统计学意义(P<0.05),见表2。

表2 VEGF表达与患者临床病理特征的关系(例,%)

2.3 VEGF表达与患者预后的相关性

随访3年,90例患者存活55例,存活率为61.11%(55/90);VEGF阳性表达组存活率低于VEGF阴性表达组,差异有统计学意义(P<0.05),见表3。

表3 不同VEGF表达与患者预后的相关性(例,%)

3 讨论

肝癌病因复杂,临床认为在病毒感染、肝硬化、不良饮食等多种因素长期影响下,可影响肝细胞的DNA系统,使得肝细胞生长出现增殖失控现象,最终发生癌性变化,形成恶性肿瘤[7-8]。而肝脏为人体代谢重要器官,且存在丰富血供,一旦发生恶性变化则对机体代谢损伤较大,且肿瘤在获得充足营养后能迅速增长,并持续侵袭周围组织,患者死亡风险较高。冠心病也是危害人类健康的重要疾病,肝癌与冠心病并发后会加重患者病情进展,使得整体预后欠佳[9]。因此,临床需寻找一种能够对肝癌合并冠心病患者预后进行良好预测的分子标志物,为临床治疗提供指导,以提高患者生存率。

肿瘤血管生成一直以来都是恶性肿瘤研究热点,肿瘤的生长离不开血管生成,当血供丰富,则可为肿瘤生长、转移提供提供充足的营养物质[10-11]。而VEGF则是一种高度特异性促血管内皮细胞生长因子,能够选择性作用于血管内皮细胞膜络氨酸激酶受体,使得内皮细胞有丝分裂加速,从而促进内皮细胞增殖,加快内皮细胞迁移速度,促使微血管形成[12-13]。正常情况下VEGF在机体内处于低表达状态,当恶性肿瘤发生后可见VEGF表达水平升高,且在大肠癌、乳腺癌、胃癌、肺癌等多种恶性肿瘤内均可见VEGF高表达,故VEGF表达水平在肿瘤发生及发展中具有重要作用。本研究结果显示,癌组织VEGF阳性表达率高于癌旁组织,肿瘤直径≥5 cm、分化程度低分化、肿瘤分期Ⅲ期、有淋巴结转移、冠脉狭窄程度重度狭窄患者VEGF阳性表达率高于肿瘤直径<5 cm、分化程度中高分化、肿瘤分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移、冠脉狭窄程度轻中度狭窄患者;90例患者中存活55例,存活率为61.11%(55/90),VEGF阳性表达组存活率低于VEGF阴性表达组。提示VEGF在肝癌合并冠心病患者中呈高表达,肿瘤直径长、分化程度低、肿瘤分期高、有淋巴结转移患者表达水平更高,且阳性表达高患者存活率低,能够较好的预测患者预后。其原因为当VEGF处于高表达状态时,可加速肿瘤新生血管生成,从而为肿瘤生长提供充足营养,增强肿瘤增殖、侵袭能力,故肿瘤体积大,临床分期高,也更易发生转移[14-15]。而临床分期高、淋巴结转移等均为影响肝癌合并冠心病患者预后的高危因素,故VEGF阳性表达患者整体预后较差。本研究结果显示,冠脉重度狭窄患者VEGF阳性表达更高。其原因为心肌处于缺血缺氧状态时,可促使VEGF表达增加,以加速内皮细胞增殖、迁移,诱导血管生成,尽早建立侧支循环,在缺血心肌组织中起到重要代偿作用。而冠心病狭窄程度越高则心肌缺氧越严重,也会进一步诱发VEGF表达,当合并肝癌时则会加速肿瘤血管形成,故预后较差。但本研究纳入样本量较少,所得研究结果仍可能存在一定偏倚,后续还需扩大样本量,开展大样本研究,以进一步剖析VEGF在肝癌合并冠心病患者中的表达。

综上所述,VEGF表达与肝癌合并冠心病患者预后关系密切,当VEGF高表达时,则肿瘤分期高、分化程度低,且易经淋巴结转移,故患者存活率较低。