膀胱癌组织中脂肪酸结合蛋白6、核苷酸还原酶M1亚基的表达及与临床病理特征的相关性

王莉莉

【摘要】 目的：探究膀胱癌（bladder cancer）组织中脂肪酸结合蛋白6（fatty acid-binding protein6，FABP6）、核苷酸还原酶M1亚基（ribonucleotide reductase regulatory subunit M1，RRM1）的表达水平及其与膀胱癌患者临床病理特征的相关性。方法：回顾性分析2020年2月-2021年12月大冶市人民医院收治的并接受手术切除的40例膀胱癌患者的临床资料。采用免疫组化法检测各组织中的FABP6和RRM1蛋白表达水平，并分析FABP6和RRM1蛋白与各项临床特征的关系。结果：膀胱癌组织中FABP6和RRM1高蛋白表达水平占比均高于癌旁正常组织（P<0.05）。FABP6和RRM1蛋白高表达和低表达膀胱癌患者的性别、年龄、肿瘤类型、肿瘤直径比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。FABP6和RRM1蛋白高表达和低表达膀胱癌患者的分化程度、TNM分期、淋巴结转移比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：FABP6、RRM1在膀胱癌组织中表达水平高于癌旁正常组织，且两者均参与了膀胱癌的发生、发展进程。

【关键词】 膀胱癌 脂肪酸结合蛋白6 核苷酸还原酶M1亚基 临床病理特征

[Abstract] Objective： To investigate the expression levels of fatty acid-binding protein 6 （FABP6） and ribonucleotide reductase regulatory subunit M1 （RRM1） in bladder cancer tissues， correlation of the two indicators with clinicopathological characteristics of bladder cancer patients. Method： The clinical data of 40 patients with bladder cancer who received surgical resection in Daye People's Hospital from February 2020 to December 2021 were retrospectively analyzed. The protein expression levels of FABP6 and RRM1 in each tissue were detected by immunohistochemical method， and the relationship between FABP6 and RRM1 and various clinical features were analyzed. Result： FABP6 and RRM1 high protein expression levels in bladder cancer tissues were higher than those in adjacent normal tissues （P<0.05）. There were no significant differences in gender， age， tumor type or tumor diameter in bladder cancer patients with high and low FABP6 and RRM1 expression （P>0.05）. There were significant differences in the degree of differentiation， TNM stage and lymph node metastasis in bladder cancer patients with high and low expression of FABP6 and RRM1 protein （P<0.05）. Conclusion： The expression levels of FABP6 and RRM1 in bladder cancer tissues are higher than those in adjacent normal tissues， and both of them were involved in the occurrence and development of bladder cancer.

[Key words] Bladder cancer Fatty acid binding protein 6 Ribonucleotide reductase regulatory subunit M1 Clinicopathological features

First-author's address： Daye People's Hospital， Hubei Province， Daye 435100， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2023.13.037

近年来，随着我国居民生活水平和生活方式的改变，膀胱癌（bladder cancer）发病群体不断扩大，深入探究膀胱癌的发生机制，及早筛查、诊断并治疗膀胱癌，对提高患者生存质量具有重大意义[1-2]。脂肪酸结合蛋白6（fatty acid-binding protein 6，FABP6）是一种脂肪酸载体蛋白，可参与长链脂肪酸的代谢调节[3]。谈宜傲等[4]在相关研究中发现，FABP6在膀胱癌组织中呈现过表达状态，该指标可能与膀胱癌预后质量有关。李海斌等[5]在研究中發现，核苷酸还原酶M1亚基（ribonucleotide reductase regulatory subunit M1，RRM1）可通过靶向通路影响癌细胞增殖过程。但目前关于FABP6与RRM1表达水平与膀胱癌的病理和作用机制相关研究较少，且多数未曾分析其与患者病理特征的关系。结合以往研究，本研究纳入膀胱癌组织及癌旁正常组织，分析各组FABP6与RRM1蛋白表达水平差异，为探究膀胱癌发生机制提供一定研究依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2020年2月-2021年12月大冶市人民医院收治的并接受手术切除的40例膀胱癌患者的临床资料。纳入标准：（1）均接受本院影像学及病理检查确诊；（2）患者的各项临床资料完整无误；（3）在本次手术前均未接受任何靶向治疗或放化疗。排除标准：（1）合并其他恶性肿瘤；（2）有较严重心、肝、肾等脏器功能障碍；（3）血液性疾病、感染性疾病；（4）合并血液系统疾病；（5）自身免疫病。本研究已征得醫学伦理会批准，伦理批号（2020年第25号）。

1.2 方法

1.2.1 临床病理资料收集 通过医院院内患者信息登记系统，收集患者的性别、年龄、肿瘤类型、肿瘤直径、分化程度、TNM分期、淋巴结转移情况等资料。

1.2.2 标本来源 选取膀胱癌组织和癌旁正常组织（距肿瘤边缘5 cm）。

1.2.3 免疫组织化学检测 采用免疫组化法检测膀胱癌组织及癌旁组织中FABP6、RRM1蛋白表达水平。步骤如下：取组织石蜡包块，常规切片（4 μm），进行脱蜡处理→高压修复抗原→阻断灭活内源性过氧化物酶→滴加10%羊血清封闭液（北京中杉金桥生物技术有限公司）封闭→滴加磷酸缓冲盐溶液（PBS，北京中杉金桥生物技术有限公司）稀释兔抗人FABP6一抗（上海易汇生物科技有限公司）/兔抗人RRM1一抗（广州万孚生物技术股份有限公司），PBS冲洗→滴加经辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗→滴加链霉素抗生素蛋白-过氧化物酶（SP，北京中杉金桥生物技术有限公司）→二氨基联苯胺（DAB，北京中杉金桥生物技术有限公司）显色→苏木素复染→脱水、透明、封片、镜检。设置PBS代替一抗为阴性对照。

1.2.4 结果判定 由同一位资深病理医师阅片，在×400倍光学显微镜下抽组织内的5个视野，每个视野选择100个细胞，根据阳性细胞占比和染色强度的乘积（IS值）判定FABP6和RRM1蛋白在组织中表达水平。阳性细胞占比：<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。染色强度：视野内未见染色情况为0分，出现淡黄色为1分，出现棕黄色为2分，出现棕褐色为3分。IS值≤3分为低表达，>3分为高表达。

1.3 统计学处理 数据采用SPSS 22.0软件处理，计数资料采用率（%）表示，组间比较采用字2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 FABP6和RRM1在膀胱癌组织及癌旁正常组织中表达水平比较 膀胱癌组织中FABP6和RRM1高蛋白表达水平占比均高于癌旁正常组织（P<0.05），见表1。

2.2 FABP6和RRM1表达水平与膀胱癌患者临床病理特征的相关性 FABP6和RRM1蛋白高表达和低表达膀胱癌患者的性别、年龄、肿瘤类型、肿瘤直径比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。FABP6和RRM1蛋白高表达和低表达膀胱癌患者的分化程度、TNM分期、淋巴结转移比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表2、3。

3 讨论

膀胱癌占我国泌尿生殖系统肿瘤发病率的第一位，男性发病率为女性的3～4倍，且近些年的发病率随年龄增长呈增长趋势。从癌组织发生来源角度分析，膀胱癌有尿路上皮癌、鳞癌、腺癌等，其中尿路上皮癌占90%以上，并且在靶向治疗、放疗、化疗等干预后，仍有较高复发率，5年生存率仅为50%～60%。因此，有必要寻找生物标志物用于膀胱癌的早期筛查诊断[6-7]。

脂肪酸结合蛋白（FABP）是一种分布于多种组织细胞内的脂肪酸载体蛋白，主要参与调节机体脂肪酸水平，已有研究证实，FABP系列蛋白因子（FABPs）可通过多种复杂机制参与多种疾病发生、发展进程[8]。FABP6又名回肠型脂肪酸结合蛋白，研究表明其与肥胖及糖尿病密切相关，而肥胖及糖尿病又是多种癌症发生的独立危险因素。多项研究表明，FABP在结肠癌[9]、前列腺癌[10]、子宫颈癌[11]等组织中呈高表达状态，因此推测FABP6可能和膀胱癌发生相关。本研究采用免疫组化法检测FABP6在膀胱癌组织及癌旁正常组织中表达，FABP6在膀胱癌组织中高表达水平占比高于癌旁正常组织，与既往研究结果一致，提示FABP6参与了膀胱癌发生过程[12]。为进一步研究FABP6表达与膀胱癌临床病理特征的相关性，本研究比较不同FABP6表达水平膀胱癌患者临床病理特征差异，结果表明，FABP6高表达和低表达膀胱癌患者的性别、年龄、肿瘤类型、肿瘤直径比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。FABP6高表达和低表达膀胱癌患者的分化程度、TNM分期、淋巴结转移比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。该结果提示FABP6促进了膀胱癌侵袭、转移过程。分析可能机制为FABP6参与脂肪细胞转运及调控某些靶基因表达，为肿瘤细胞提供能量，并可通过丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信号通路促进肿瘤细胞侵袭转移，具体机制有待进一步研究予以证实[13]。

研究表明，核苷酸修复途径为DNA损伤修复中的重要一环，修复路径出错可能导致恶性肿瘤发生[14]。RRM1是一种DNA损伤修复限速酶，位于染色体11P15.5上，在DNA编码及细胞增殖过程中扮演重要角色[15-16]。若RRM1基因表达异常将影响核苷酸修复途径，从而促进肿瘤细胞增殖[17]。研究表明，RRM1蛋白参与了乳腺癌发生、发展进程，且降低RRM1蛋白表达能有效抑制肿瘤细胞增殖，因此推测RRM1也可能和膀胱癌发生相关[18-19]。本研究采用免疫组化法检测RRM1在膀胱癌组织及癌旁正常组织中表达差异发现，RRM1在膀胱癌组织中高表达水平占比高于癌旁正常组织，与朱研峰等[20]研究结果一致，提示RRM1参与了膀胱癌发生过程。为进一步研究RRM1表达与膀胱癌临床病理特征的相关性，本研究比较不同RRM1表达水平膀胱癌患者临床病理特征差异，结果表明，RRM1高表达和低表达膀胱癌患者的性别、年龄、肿瘤类型、肿瘤直径比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。RRM1高表达和低表达膀胱癌患者的分化程度、TNM分期、淋巴结转移比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。该结果表明RRM1促进了膀胱癌侵袭、转移过程，但具体机制尚不清楚。

综上所述，FABP6、RRM1在膀胱癌组织中高表达水平占比均高于癌旁正常组织，且两者均参与了膀胱癌的发生、发展进程。此外，因FABP6、RRM1均可采用免疫组化法检测，且分子量较小，亦可从血液中检出，提示FABP6、RRM1可能作为膀胱癌潜在生物标志物。本研究局限在于纳入样本量较少，且为回顾性研究，可能会对研究结果产生偏倚；此外，本研究仅从蛋白质层面分析了FABP6、RRM1与膀胱癌临床病理特征相关性，且尚未就FABP6、RRM1对膀胱癌具体作用机制进行探究。以上局限均有待进一步多中心、大样本、前瞻性随机对照实验予以证实。

参考文献

[1]李辉章，郑荣寿，杜灵彬，等.中国膀胱癌流行现状与趋势分析[J].中华肿瘤杂志，2021，43（3）：293-298.

[2]陈莉，汪涌，祝广峰，等.2020年欧洲泌尿协会肌层浸润性膀胱癌诊断和治疗指南概要[J].现代泌尿外科杂志，2020，25（11）：1025-1029.

[3] LUIS G，GODFROID A，NISHIUMI S，et al.Tumor resistance to ferroptosis driven by stearoyl-CoA desaturase-1 （SCD1） in cancer cells and fatty acid biding protein-4 （FABP4） in tumor microenvironment promote tumor recurrence[J].Redox Biol，2021，43：102006.

[4]谈宜傲，刘树瀚，杨磊.脂肪酸结合蛋白6在膀胱癌组织中的表达及其临床意义[J].国际泌尿系统杂志，2021，41（2）：253-258.

[5]李海斌，高森.核糖核苷酸还原酶调节亚基M2对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响[J].第三军医大学学报，2021，43（18）：1762-1768.

[6]陈晓榕，左毅刚.40岁以下青年人膀胱癌的临床特征及预后[J].临床泌尿外科杂志，2019，34（12）：999-1002.

[7]应文伟，何宇辉，刘海龙，等.非肌层浸润性膀胱癌预后免疫组化分子标志物研究进展[J].中日友好医院学报，2019，33（5）：309-311.

[8]林叶昕，陈科，安方梅，等.肝细胞癌患者脂代谢异常分析及脂肪酸结合蛋白的表达意义研究[J].中华肝脏病杂志，2021，29（10）：1006-1013.

[9]汉利，徐贵星，王新伟.结肠癌组织中Ⅱ型人回肠脂肪酸结合蛋白mRNA表达及其与癌细胞增殖、迁移的相关性[J].中国医师杂志，2019，21（3）：438-440.

[10] FAYI M S A，GOU X J，FOROOTAN S S，et al.The increased expression of fatty acid-binding protein 9 in prostate cancer and its prognostic significance[J].Oncotarget，2016，7（50）：82783-82797.

[11]詹银珠，刘峰，张燕，等.脂肪酸结合蛋白5促进宫颈癌细胞增殖侵袭和转移[J].中华肿瘤杂志，2019，41（3）：200-207.

[12]王强，罗涵云，徐述雄，等.A-FABP、NMP22联合Pyk2检测对肌层浸润性膀胱癌的诊断价值分析[J].解放军医药杂志，2022，34（7）：35-38.

[13]候明敏，刘红.CSTB、A-FABP在膀胱癌诊断与预后的价值[J].国际泌尿系统杂志，2019，39（6）：978-981.

[14]杨跃，张安柳，唐顺芳，等.H3K9me2调控核苷酸切除修复相关基因轉录在亚砷酸钠致L-02细胞DNA损伤中的作用[J].中华地方病学杂志，2021，40（1）：12-17.

[15]贾钦尧，宋珊，王涛，等.RRM1及SOD2基因多态性与晚期NSCLC铂类化疗的相关性研究[J].西南国防医药，2021，31（4）：277-281.

[16]梁俊国，靳智勇，黄少君，等.ERCC1、RRM1和BRCA1的表达与晚期肺鳞癌病人GP方案治疗临床意义研究[J].内蒙古医学院学报，2020，42（4）：412-415.

[17]李军成.ERCC1、RRM1、TUBB3、TYMS和TOP2A基因与乳腺癌化疗及预后的研究进展[J].西南国防医药，2020，30（9）：864-866.

[18]曲更宝，朱强，王峰，等.ERCC1、TUBB3和RRM1在三阴性乳腺癌组织中的表达及其意义[J].新疆医科大学学报，2021，44（9）：994-998，1005.

[19]田楠楠，周磊，杨丹妮，等.沉默RRM1可逆转乳腺癌细胞MCF-7/R对紫杉醇的耐药性[J].南方医科大学学报，2019，39（3）：304-312.

[20]朱研峰，刘志飞，邢力永，等.膀胱癌组织中TopoⅡα和RRM1蛋白表达水平及其临床意义[J].东南大学学报（医学版），2019，38（2）：296-302.

（收稿日期：2022-11-09） （本文编辑：张明澜）