39%噻嗪酮·螺虫乙酯悬浮剂分析方法研究

2023-07-05侯影吴迪梁观凤林培旺谌伟

世界农药 2023年6期

侯影，吴迪，梁观凤，林培旺，谌伟

(1.上海悦联生物科技有限公司，上海 201215；2.北京市植物保护站，北京 100120；3.上海悦联化工有限公司，上海 201416)

噻嗪酮(buprofezin)属杂环类昆虫几丁质合成抑制剂，对鞘翅目、部分同翅目以及蜱螨目具有持效性杀幼虫活性，目前主要登记用于水稻、果树、茶树、蔬菜等作物害虫的防治，可有效防治大叶蝉科、飞虱科、粉虱科、蚧科、盾蚧科和粉蚧科等害虫[1]。螺虫乙酯(spirotetramat)是具有双向内吸传导性能的季酮酸类杀虫剂，与拜耳公司的杀虫杀螨剂螺螨酯(spirodiclofen)和螺甲螨酯(spiromesifen)属同类化合物，可以在整个植物体内上下移动，抵达叶面和树皮，从而防治如生菜和白菜内叶上及果树皮上的害虫，抑制害虫的卵和幼虫生长，保护新生茎、叶和根部，且持效期长，可提供长达8 周的有效防治[1]。螺虫乙酯与噻嗪酮复配具有延缓抗药性、杀虫杀卵效果好、持效期长、低毒、使用剂量小、不污染环境、低残留等优点，可达到延缓害虫产生抗药性和防治已产生抗药性的害虫及杀灭害虫卵的目的。

目前，有关螺虫乙酯的分析方法[2-5]和噻嗪酮的分析方法[6-8]已有相关报道，但2 者混配悬浮剂的分析方法还未见报道。基于此，本文研究开发反相高效液相色谱法对39%噻嗪酮·螺虫乙酯悬浮剂(26%+13%)中有效成分噻嗪酮和螺虫乙酯进行同柱分析和定量，操作快速、简便，精密度和准确度均能满足定量分析要求，能为该产品质量控制提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 供试药剂和试剂

螺虫乙酯标样(质量分数99.0%)、噻嗪酮标样(质量分数99.1%)，沈阳化工研究院有限公司；甲醇(色谱纯)，默克化学；水，二次重蒸蒸馏水。流动相：甲醇∶水=75∶25(体积比)，经0.45 μm 孔径的滤膜，并在超声波浴槽中脱气10 min。

1.2 主要仪器

LC-20A 高效液相色谱仪配二极管阵列检测器(日本岛津公司)；色谱柱：Φ4.6 mm×150 mm 不锈钢柱，内装5 μm Kromasil C18为填充料的不锈钢柱(诺力昂公司)。ML204T 电子天平(梅特勒-托利多公司)；SK3200H 超声振荡器(上海科导超声仪器有限公司)。

1.3 色谱操作条件

检测器为二极管阵列检测器；流动相为甲醇∶水=75∶25(体积比)；流量为1.0 mL/min，柱温为室温(温差变化不大于2 ℃)，检测波长为245 nm，进样体积为20 μL。在此色谱条件下，螺虫乙酯和噻嗪酮的保留时间分别为约2.7、5.5 min。典型的噻嗪酮(螺虫乙酯)高效液相色谱图见图1。

图1 39%噻嗪酮·螺虫乙酯悬浮剂高效液相色谱图

1.4 测定步骤

1.4.1 标准溶液配制

分别称取螺虫乙酯标样0.05 g(精确到0.000 1 g)和噻嗪酮标样0.10 g(精确到0.000 1 g)于50 mL 容量瓶中，加入适量甲醇超声振荡5 min 使样品溶解，恢复至室温后用甲醇定容，摇匀；再用移液管准确吸取5 mL 至50 mL 容量瓶中，用甲醇稀释定容，摇匀，备用。

1.4.2 试样溶液配制

称取0.38 g(精确到0.000 1 g)样品，置于50 mL容量瓶中，加入适量甲醇超声振荡5 min 使样品溶解，恢复至室温后用甲醇定容，摇匀；再用移液管准确吸取5 mL 至50 mL 容量瓶中，用甲醇稀释定容，摇匀，用0.45 μm 滤膜过滤，滤液备用。

1.4.3 试样的测定

在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针相对响应值的重复性，待相邻2 针的响应值变化小于1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.5 试样中有效含量的计算

将测得的2 针试样溶液以及试样前后2 针标样溶液中的峰面积分别进行平均，试样中噻嗪酮(螺虫乙酯)的质量分数X(%)分别按式(1)计算：

式中：A1为标样溶液中噻嗪酮(螺虫乙酯)峰面积的平均值；A2为试样溶液中噻嗪酮(螺虫乙酯)峰面积的平均值；m1为噻嗪酮(螺虫乙酯)标样的质量，g；m2为试样的质量，g；P为标样中噻嗪酮(螺虫乙酯)的质量分数，%。

2 结果与讨论

2.1 检测波长和流动相选择

通过二极管阵列检测器对螺虫乙酯标样和噻嗪酮标样在200～400 nm 范围内的吸收光谱进行扫描，结果见图2，确定检测波长为245 nm。调整甲醇、水的比例，将噻嗪酮和螺虫乙酯进行有效分离，同时有效避免助剂和杂质干扰，最后确定为甲醇∶水=75:25(体积比)作为流动相。在此分析条件下对39%噻嗪酮·螺虫乙酯悬浮剂试样中螺虫乙酯、噻嗪酮峰纯度扫描，螺虫乙酯、噻嗪酮的峰纯度均＞99%，由峰纯度扫描结果显示39%噻嗪酮·螺虫乙酯悬浮剂中螺虫乙酯、噻嗪酮有效成分出峰位置无明显物质干扰，符合定量分析要求。

图2 39%噻嗪酮·螺虫乙酯悬浮剂中螺虫乙酯和噻嗪酮HPLC-DAD 特异性扫描图

2.2 分析方法的线性相关性

准确配制一系列不同质量浓度的螺虫乙酯和噻嗪酮标样溶液，然后分别按1.4 节测定步骤进行分析检测，分别以螺虫乙酯和噻嗪酮的质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标进行做图和线性拟合，结果见图3、4。螺虫乙酯线性回归方程为y=50.333 9x+0.083 4，相关系数R²=0.999 0；噻嗪酮线性回归方程y=11.931 7x-0.008 6，相关系数R²=0.999 6。

图3 螺虫乙酯质量浓度与响应值之间的线性曲线

图4 噻嗪酮质量浓度与响应值之间的线性曲线

2.3 分析方法的精密度试验

任取一批39%噻嗪酮·螺虫乙酯悬浮剂，按本方法中1.4 节测定步骤连续测定螺虫乙酯、噻嗪酮质量分数6 次，分别计算其平均值、标准偏差、变异系数(表1)。螺虫乙酯的标准偏差为0.06、变异系数为0.46%；噻嗪酮的相对标准偏差为0.10、变异系数为0.38%，标准偏差均小于Horwitz 公式修正值。

表1 分析方法的精密度测定

2.4 分析方法的准确度试验

制备39%噻嗪酮·螺虫乙酯悬浮剂空白制剂样品，准确称取5 份，并分别加入定量的螺虫乙酯、噻嗪酮标样，按1.4 节测定步骤测定螺虫乙酯、噻嗪酮标样的加入量，同加入的理论值进行比较，计算回收率(表2)。螺虫乙酯回收率为98.48%～101.22%，平均回收率为99.91%；噻嗪酮回收率为99.36%～101.35%，平均回收率为100.34%。