吡噻菌胺原药高效液相色谱分析方法研究

2023-07-05王坤吴晗唐慧敏

世界农药 2023年6期

王坤，吴晗，唐慧敏

(江苏省农产品质量检验测试中心，南京 210000)

吡噻菌胺(penthiopyrad)是一种作用于病菌体内琥珀酸脱氢酶的杀菌剂，由日本三井化学株式会社与美国杜邦公司共同研发，2008 年于日本获得首次登记[1-2]。其主要靶向病原物的线粒体，通过抑制呼吸链电子传递，破坏病原物的三羧酸循环，降低其能量代谢，达到杀灭病原物目的[3-4]。吡噻菌胺化学结构创新、杀菌谱广，对引起菌核病、叶斑病、白粉病、果树黑星病等病害的多种病原菌均表现出显著的抑制效果[5]。

目前有关吡噻菌胺原药的分析方法研究报道较少，本文采用高效液相色谱法(HPLC)对吡噻菌胺原药中有效成分进行分析研究，该方法快速、简易、准确度高，分离效果好，准确度和精密度均能满足农药质量科研和抽检分析检测需求。

1 材料与方法

1.1 试剂和溶液

乙腈，色谱纯(美国默克公司)；水，超纯水；吡噻菌胺标准品(已知质量分数为99.0%)、99.0%吡噻菌胺原药(意大利世科姆公司)。

1.2 仪器设备

Agilent 1100 高效液相色谱仪，具有自动进样器、紫外检测器和Agilent Chemstation 色谱工作站(美国安捷伦公司)；Millipore 超纯水机(美国密理博公司)；梅特勒XP205 分析天平(梅特勒-托利多仪器公司)。

1.3 液相色谱条件

ZORBAX SB-C18不锈钢色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈∶水=70∶30(体积比)；流速：1.0 mL/min；柱温：室温(温度变化应不大于2 ℃)；检测波长：230 nm；进样体积：5 μL；保留时间：4.2 min。吡噻菌胺标样和原药试样的典型高效液相色谱图见图1、2。

图1 吡噻菌胺标准品高效液相色谱图

图2 吡噻菌胺原药高效液相色谱图

1.4 测定步骤

1.4.1 标准溶液配制

称取吡噻菌胺标准品0.01 g(精确至0.000 2 g)，置于50 mL 容量瓶中，用乙腈溶解，超声波振荡5 min，冷却至室温，稀释至刻度，摇匀备用。

1.4.2 试样溶液配制

称取含吡噻菌胺0.01 g(精确至0.000 2 g)的试样，置于50 mL 容量瓶中，用乙腈溶解，超声波振荡5 min，冷却至室温，稀释至刻度，摇匀备用。

1.4.3 仪器测定

按上述操作条件下，保持仪器稳定后，使用自动进样器连续注入数针标准溶液，直至前后2 针吡噻菌胺标准溶液的峰面积相对变化小于1.5%，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行分析测定。

1.4.4 计算

将测得的2 针试样溶液和试样前后2 针标样溶液中吡噻菌胺峰面积进行平均。试样中吡噻菌胺的质量分数按下式计算：

式中：w1为试样中吡噻菌胺质量分数，%；A2为试样溶液中吡噻菌胺峰面积平均值；m1为吡噻菌胺标样的质量，g；w为吡噻菌胺标样的质量分数，%；A1为标样溶液中吡噻菌胺峰面积平均值；m2为试样的质量，g。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的优化

吡噻菌胺紫外光谱图如图3 所示，吡噻菌胺最大吸收波长在230 nm 处，该处基本无干扰、灵敏度较高，故将检测波长选择为230 nm。

色谱柱选择常用的ZORBAX SB-C18反相不锈钢色谱柱。依据吡噻菌胺的物化性质，避免溶剂对目标化合物干扰，选择乙腈作为溶剂溶解样品，并以乙腈和水作为流动相，为达到更好分离效果，流动相按照不同体积比例在上述色谱柱上进行试验，当乙腈与水体积比为70∶30，流速为1.0 mL/min 时，有效成分与杂质能很好的分离，峰形对称，分离效果好，最终确定流动相为乙腈∶水=70∶30(体积比)，流速1.0 mL/min。

图3 吡噻菌胺紫外吸收光谱图

2.2 方法线性相关性

配制质量浓度为0.1、0.2、0.4、0.8、1.2、2 mg/mL的吡噻菌胺系列标准溶液，在上述色谱条件下进行分析测定，以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合得到线性方程y=4 630.6x+175.65，线性相关系数R2=0.999 8(图4)。结果表明，吡噻菌胺质量浓度在0.1～2 mg/mL 范围内线性关系良好。

图4 吡噻菌胺质量浓度与峰面积线性关系图

2.3 方法精密度测定

从同一样品中准确称取5 个平行样品，按照1.4.2 节方法制备，在上述色谱操作条件下进行分析，测得吡噻菌胺原药的标准偏差(SD)和相对标准偏差(RSD)分别为0.11 和0.11%(表1)。结果表明，RSD值小于修改的Horwitz 公式2(1-0.5logC)×0.67，该方法精密度符合质量检测的相关要求，能够满足日常检测需要。