等吸收双波长紫外分光光度法测定糖降肾康颗粒中总木脂素苷含量

蒋蒨 谭茂兰 郑磊 陈雨婷 张熙

【摘 要】 目的：建立测定糖降肾康颗粒中总木脂素苷含量的方法。方法：采用双波长紫外分光光度法，在200～400 nm范围内对牛蒡苷对照品溶液、绿原酸对照品溶液以及糖降肾康颗粒供试品溶液进行扫描，在牛蒡苷对照品溶液紫外扫描图中确定最大吸收波长280 nm为测定波长λ1；在绿原酸对照品溶液紫外扫描图中，确定检测波长（λ1=280 nm）的等吸收点波长350 nm为参比波长λ2；以牛蒡苷为对照品，测定糖降肾康颗粒中总木脂素苷的含量。结果：该方法的精密度、重现性、稳定性良好，在0.00795～0.07155 mg·mL-1浓度范围内，牛蒡苷的浓度与吸光度差值呈线性相关，r=0.9999，平均回收率为100.8%，RSD为1.04%（n=6）；三批糖降肾康颗粒中含总木脂素苷以牛蒡苷计，均不少于20%。 结论：采用等吸收双波长紫外分光光度法测定总木脂素含量方法操作简便，准确度、精密度、稳定性良好，可作为糖降肾康颗粒中总木脂素苷的含量测定和质量控制方法。

【关键词】 糖降肾康颗粒；牛蒡子；总木脂素苷；等吸收双波长紫外分光光度法

【中图分类号】R284.1   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2023）03-0032-04

Determination of Total Lignosides in Tangjiangshenkang Granules

by Two-wavelength Ultraviolet Spectrophotometry

JIANG Qian TAN Maolan ZHENG Lei CHEN Yuting ZHANG Xi

Chongqing Kerui Pharmaceutical（Group） Co.，LTD.，Chongqing 400060，China

Abstract：Objective To establish a determination method for the content of total lignosides in Tangjiangshenkang granules.Method By two-wavelength ultraviolet spectrophotometry （TWUS）， scan arctiin control solution， chlorogenic acid control solution and tangjiangshenkang granule test solution in the range of 200-400nm. In the ultraviolet scanning diagram of arctiin reference solution， the maximum absorption wavelength of 280nm was determined as the determination wavelength λ1. Determine the detection wavelength in the ultraviolet scanning diagram of chlorogenic acid reference solution（λ1= 280nm）， and 350nm is the reference wavelengthλ2；The content of total lignosides in tangjiangshenkang granules was determined with arctiin as the reference substance.Result The precision， accuracy， and durability of this method were fine. The concentration of arctiin was linearly correlated with the absorbance difference in the range of 0.00795-0.07155 mg·mL-1 （r=0.9999）. The average recovery of arctiin was 100.8%， and the RSD value was 1.04% （n=6）. Calculated as arctiin， three batches of tangjiangshenkang granules contain no less than 20% of total lignosides.Conclusion The method has the advantages of simple operation， good accuracy， precision and reliable stability. It can be used as the content determination and quality control method of total lignosides in Tangjiangshenkang granules.

Keywords：Tangjiangshenkang Granules; Fructus Arctii;Total Lignanoids; Two-wavelength Ultraviolet Spectrophotometry

糖降腎康颗粒是由单味药材牛蒡子，经现代工艺提取加工制成的中药制剂，目前为临床上唯一的一个作用机理明确、作用成分清楚的，用于治疗糖尿病肾病的药物［1］，其主要活性组分为牛蒡子提取物中的木脂素类化合物 ［2］。因此，糖降肾康颗粒中总木脂素苷的含量是该品种的重要质量指标。

在糖降肾康颗粒标准以及相关文献［3-4］ ，均采用牛蒡苷为对照品的紫外分光光度法测定总木脂素苷的含量。然而，根据牛蒡子的提取工艺，在糖降肾康颗粒中除了含有木脂素类化合物外，还含有少量的包括绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、咖啡酰奎宁酸类等在内的有机酸 ［5-7］，在检测波长280 nm下，有机酸的紫外吸收强度较大，对检测结果影响较大。因此，试验采用等吸收双波长紫外分光光度法对糖降肾康中总木脂素苷的含量进行检测，消除有机酸类化合物在测定波长下的干扰，提高总木脂素苷含量测定的准确性。

1 仪器与材料

UV-2600紫外分光光度仪（日本岛津）；KQ-500DV超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；XS105DU电子天平（十万分之一，Mettler Toledo）；MS204S电子天平（万分之一，Mettler Toledo）。

糖降肾康颗粒（重庆科瑞制药集团有限公司，批号：2004L04979）；牛蒡苷（中国食品药品检定研究院，批号：110819-201611）；绿原酸（中国食品药品检定研究院，110753-201415）；甲醇，分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液配制

2.1.1 对照品溶液 绿原酸对照品溶液制备：精密称取绿原酸对照品适量，加甲醇溶解，制成每1 mL含8 μg的溶液。牛蒡苷对照品溶液的制备：精密称取牛蒡苷对照品适量，加甲醇溶解，制成每1 mL含0.08 mg的溶液。

2.1.2 供试品溶液 取糖降肾康颗粒适量，研细，取研细药粉0.10 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加适量甲醇超声处理30 min，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2 参比波长的确定 在200～400 nm范围内，对牛蒡苷对照品溶液、绿原酸对照品溶液以及糖降肾康颗粒供试品溶液进行扫描，结果显示（如图1所示），牛蒡苷在280 nm左右具有最大吸收；绿原酸在330 nm左右具有最大吸收，且绿原酸在280 nm左右也具有较大的吸收。因此，试验采用等吸收双波长紫外分光光度法，在绿原酸对照品溶液紫外扫描图中，确定检测波长（λ1=280 nm）在350 nm波长附近的等吸收点波长为参比波长λ2；再测定供试品溶液在检测波长λ1（280 nm）和参比波长（λ2）处的吸光度，以吸光度差值计算总木脂素苷的含量，以消除有机酸类化合物对总木脂素苷含量测定的影响。

2.3 标准曲线的绘制 精密量取牛蒡苷对照品溶液1.0 mL、3.0 mL、5.0 mL、7.0 mL、9.0 mL分别置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，在测定波长λ1（280 nm）和参比波长λ2（351.4 nm）处测定吸光度，以吸光度差值ΔA（ΔA＝Aλ1－Aλ2）为纵坐标，浓度C为横坐标，绘制标准曲线并进行回归计算，得到线性回归方程为△A=10.019C+0.0086，牛蒡苷浓度0.00795～0.07155 mg·mL-1范围内与△A呈线性，相关系数r为 0.9999。

2.4 测定法 取供试品溶液适量，照紫外-可见分光光度法，测定在测定波长λ1（280 nm）和参比波长λ2（351.4 nm）处的吸光度，将吸光度差值△A（△A=Aλ1-Aλ2）代入线性回归方程，计算牛蒡苷含量，以牛蒡苷含量计作总木脂素苷含量。

2.5 精密度试验 精密量取牛蒡苷对照品溶液5.0 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，测定在测定波长λ1（280 nm）和参比波长λ2（351.6 nm）的吸光度，连续测定6次，计算吸光度差值ΔA（ΔA＝Aλ1－Aλ2）及ΔA的RSD值。6次吸光度差值ΔA平均值为0.405，RSD（n=6）为0.19%。

2.6 重复性试验 取糖降肾康颗粒（批号2004L04979），照“2.1.2” 项下制备供试品溶液，平行制备6份，按照“2.4测定法”对各供试品溶液进行检测，计算总木脂素苷含量，并计算含量RSD值。糖降肾康颗粒中总木脂素苷平均含量为17.97%，RSD值为0.67%。

2.7 加样回收率试验 取已知总木脂素苷含量的糖降肾康颗粒（批号2004L04979）研细药粉约50 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，精密加入一定量的牛蒡苷对照品（加入量与样品中总木脂素苷含量比例约1∶1），照“2.1.2供试品溶液”中制备方法自“加甲醇适量”起，制备回收率供试品溶液，平行制备6份。按照“2.4测定法”对各供试品溶液进行检测，计算回收率。结果显示糖降肾康颗粒中总木脂素的平均回收率为100.8%，RSD（n=6）为1.04%。结果见表1。

2.8 稳定性試验 取糖降肾康颗粒（批号2004L04979）适量，照“2.1.2” 项下制备供试品溶液，分别于0 h、0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h按照“2.4测定法”项下测定各供试品溶液，计算各测定时间点吸光度差值ΔA及RSD值。结果显示在4 h内，糖降肾康颗粒中总木脂素苷吸光度差值ΔA的平均值为0.320，RSD（n=6）为0.67%，说明供试品溶液在4 h测定时间内稳定。

2.9 样品含量测定 另取糖降肾康颗粒3批，照“2.1.2” 项下制备供试品溶液，并按照“2.4测定法”对各供试品溶液进行测定，将吸光度差值ΔA代入线性回归方程，计算总木脂素苷含量。同时采用单波长法，计算280 nm检测波长下，供试品中总木脂素苷的含量。两种方法对3批样品的检测结果见下表2。

3 讨论

根据相关文献［3-4］，木脂素类化合物结构相似，总木脂素与牛蒡苷在同一波长（280 nm）下均有吸收；同时牛蒡苷为牛蒡子中木脂素类化合物主要成分，在颗粒中与总木脂素苷的基本比例为1∶2［4］，即在总木脂素苷中牛蒡苷的含量在50%。因此，选择牛蒡苷作为对照品，采用紫外分光光度法测定糖降肾康颗粒中总木脂素苷的含量。

对牛蒡子提取物进行了研究，结果显示，在提取物中存在10%左右的有机酸，主要为绿原酸、咖啡酸、3，4-二咖啡酰奎宁酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸和1，5-二咖啡酰奎宁酸等［5］。同时在糖降肾康颗粒供试品溶液紫外扫描图中可见（如图1所示），其紫外光谱图是由木脂素苷类化合物和有机酸类化合物紫外光谱图叠加而成。虽然在牛蒡子提取物中有机酸类化合物含量仅占10%左右［5］，但是在同一浓度下，有机酸的紫外吸收强度大于木脂素苷，从而导致在检测波长280 nm下，有机酸仍然对总木脂素苷的含量测定有较大影响。因此，选择采用等吸收双波长法以消除有机酸对总木脂素苷含量测定的影响。同时，由于上述几种有机酸的紫外吸收光谱较为相似，在330 nm 附近均具有最大吸收［8］，因此，参考山东省中药材标准中“金银花提取物”含量测定方法［9］和相关文献［10］，选择绿原酸作为有机酸测定的对照品。

采用等吸收双波长紫外分光光度法测定糖降肾康颗粒中的总木脂素苷，消除了有机酸的影响，由表2可知，等吸收双波长测得的总木脂素苷含量比单波长法降低了约5%。通过方法学验证，该方法的精密度、稳定性、重现性均良好，简便易行，为糖降肾康颗粒的质量控制增加了新的思路。

参考文献

［1］黄健.牛蒡子提取物总木脂素在糖尿病治疗中的应用研究［J］.内蒙古中医药，2008，27（24）：18-19.

［2］马英华，张晓娟.牛蒡子药物应用的研究进展［J］.中医药信息，2017，34（2）：116-119.

［3］阎婷，王佩琪，郭伟英.紫外分光光度法测定牛蒡子提取物总木脂素含量［J］.辽宁医学院学报，2009，30（1）：63-64.

［4］青光国，汤剑.牛蒡子颗粒中牛蒡子的鉴别与总木脂素苷、牛蒡苷的测定［J］.华西药学杂志，2011，26（3）：286-287.

［5］陈海芹，胥秀英，张心蕊，等.HPLC法测定牛蒡子提取物中咖啡酰奎宁酸类化合物的含量［J］.北方药学，2014，11（8）：12-13.

［6］付林，古锐，泽翁拥忠，等.HPLC法测定牛蒡中牛蒡子苷、牛蒡子苷元、绿原酸的含量［J］.中国民族民间医药，2017，26（11）：39-42.

［7］童黄锦，杨海军，曾庆琪，等.HPLC法同时测定炒牛蒡子饮片中7个活性成分的含量［J］.药物分析杂志，2018，38（5）：771-775.

［8］邢麗红，李文龙，瞿海斌.金银花提取物中5种有机酸含量测定的紫外光谱法［J］.药物分析杂志，2011，31（3）：547-551.

［9］山东省药品监督管理局．山东省中药材标准［M］. 2002年版.济南：山东友谊出版社，2002：291.

［10］张蕊，王腾腾，苏培文，等.金银花总有机酸有效部位的制备及质量标准研究［J］.亚太传统医药，2020，16（6）：76-80.

（收稿日期：2023-06-10 编辑：陶希睿）