QuEChERS 结合GC-MS/MS 快速检测火腿中4 种有机磷类农药残留

◎ 梁 俊，刁玉华，马艳红，万 静

(1.罗平县市场监督管理综合检验检测中心，云南 曲靖 655800;2.昆明市食品药品检验所 食品检验中心，云南 昆明 650032）

火腿是经过腌制或熏制处理过的猪肉，其营养丰富、风味鲜美独特、口感油而不腻[1-2]。但火腿在腌制过程中容易出现蚊虫叮咬和生蛆等现象，影响火腿品质，一些不法商贩为了获取更多利润，不惜使用某些剧毒的有机磷类农药。有机磷类农药是一类高效、广谱的化学杀虫剂，广泛用于农业生产，但如果用于农产品中造成残留会严重危害环境和人类身体健康。因此，监测有机磷杀虫剂残留对于农产品质量安全、食品卫生与安全监督具有重要意义[3]。

目前，测定食品中有机磷类农药残留的方法主要有气相色谱法[4]、气相色谱-质谱联用法[5]、液相色谱-质谱联用法[6]等。气相色谱-质谱联用法能够有效地避免基质干扰带来的假阳性问题，近年来得到广泛应用，但存在前处理步骤较为复杂、需要消耗大量试剂、回收率低、重现性较差等问题[7]。此外，由于火腿样品性质较为复杂，针对农药残留检测干扰较严重，因此提取、净化方式将采用QuEChERS 方法[8]。定量采用基质匹配标准曲线，气相色谱-串联质谱法进行上机检测，旨在建立快速检测火腿中4 种有机磷农药残留的QuEChERS-GC-MS/MS 法，为实现火腿中有机磷农药残留的检测提供实验依据及参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

敌敌畏（100 mg·L-1）、敌百虫（100 mg·L-1）、马拉硫磷（100 mg·L-1）和蝇毒磷（100 mg·L-1）标准品，农业农村部环境保护科研监测所；乙腈、乙酸乙酯（色谱纯），美国默克公司；冰醋酸（色谱纯），北京沃凯生物科技有限公司； Bond Elut QuEChERS 提取包、Bond Elut QuEChERS 净化管，美国Agilent 公司（AOAC 方法）；超纯水机，英国ELGA CHORUS超纯水机制备。

1.2 仪器与设备

气相色谱-三重四极杆串联质谱仪（型号Agilent 7890B-7000D），美国安捷伦公司；电子天平，美国梅特勒托利多公司；数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；旋涡混合器，海门其林贝尔公司；大容量冷冻离心机，美国贝克曼公司；超纯水器，英国ELGA CHORUS 公司。

1.3 实验方法

1.3.1 样品处理

称取已均质好的火腿样品5.00 g，加10 mL 水，涡旋振荡5 min 后静置30 min，再加入15 mL 的酸化乙腈和一颗陶瓷均质子，涡旋振荡5 min，再加入萃取盐包（6 g 无水硫酸镁、1.5 g 醋酸钠），立刻振荡混匀冰水浴10 min，涡旋振荡5 min，5 000 r·min-1离心5 min。吸取9 mL 的上清液加到内含1 200 mg 硫酸镁、400 mg PSA、400 mg C18的15 mL 塑料离心管中，涡旋振荡5 min，5 000 r·min-1离心5 min，-18 ℃冷冻30 min。吸取2 mL 上清液过0.22 μm 有机相滤膜，上机。

1.3.2 仪器条件

（1）色谱参数。色谱柱选择HP-5MS 石英毛细管柱（30 m × 0.25 mm，0.25 μm）；升温程序：初始温度60 ℃保持 1 min，以40 ℃·min-1升至170 ℃，以10 ℃·min-1升至310 ℃保持3 min；进样口温度为280 ℃；载气（He）流速1.0 mL·min-1；不分流进样，进样量1.0 μL。

（2）质谱参数。电子轰击电离（ELectron Impact，EI）70 eV，离子源温度280 ℃，传输线温度280 ℃，四极杆温度150 ℃；溶剂延迟4.5 min，多反应监测模式，其具体参数见表1。

表1 4 种农药质谱参数、线性关系、检出限、定量限表

1.3.3 标准曲线

（1）4 种有机磷农药混合标准储备液。准确吸取各农药标准品0.1 mL 于10 mL 容量瓶中，用丙酮稀释成1.0 mg·L-1的混合标准储备液，于4 ℃避光保存。

（2）4 种有机磷农药标准系列基质溶液配制。吸取浓度为1.0 mg·L-1的混合标准储备液适量，用基质提取液定容，摇匀，配制成5 μg·L-1、10 μg·L-1、50 μg·L-1、100 μg·L-1、200 μg·L-1、300 μg·L-1和500 μg·L-1的标准系列溶液。

2 结果与分析

2.1 样品前处理条件优化

QuEChERS 方法是运用有机溶剂提取、盐析分层、分散固相吸附剂萃取净化的快速前处理方法，其最常用的提取溶剂是乙腈，对提取极性范围较宽的多种农药效果较好。火腿的含水量较低，若直接用乙腈提取，其效率往往不理想，故在提取前通过加水促使细胞溶胀，获得较高的提取效率。QuEChERS 提取包在弱酸性条件下使用最佳，因此在乙腈中加入1%冰醋酸使其酸化。此外，加入提取溶剂极易产热影响提取效率，本文采用提前冷冻提取溶剂的方法进行提取。

2.2 线性关系、检出限与定量限

将配制好的质量浓度为0.005 ～0.500 mg·L-1的基质标准系列溶液上机测定，以定量离子的峰面积为纵坐标，对应的质量浓度为横坐标绘制标准曲线，结果显示在选定的质量浓度范围内线性关系良好，相关系数均不低于0.99，同时采用逐级稀释法，以3 倍信噪比计算得到方法检出限为0.13 ～0.61 μg·kg-1，以10 倍信噪比计算得到方法定量限为0.43 ～2.06 μg·kg-1，其结果见表1。

2.3 回收率及精密度

当向空白基质中加入0.015 mg·kg-1、0.060 mg·kg-1、0.300 mg·kg-1的农药标准物质，每组进行6 次平行测定，其回收率范围为68.7%～96.5%，精密度小于5%，结果见表2。

表2 4 种农药回收率和精密度实验结果表

2.4 样品测定

应用本文方法对10 份市售的样品（1 ～6 火腿、7 ～8 牛干巴、9 ～10 腊肠）进行测定，其中5 份检出有机磷类农药，详见表3。从表3 中可看出部分样品中检出敌敌畏和蝇毒磷，腌腊肉制品使用有机磷农药是比较普遍的情况，为监管部门提供一定的数据参考，以促进其进一步规范和减少安全风险。

表3 样品测定结果表（单位：mg·kg-1）

3 结论

实验结果表明，火腿试样中的有机磷类农药经酸化乙腈提取，分散固相萃取净化后，采用GC-MS/MS进行检测，在质量浓度为0.005 ～0.500 mg·L-1时，相关系数均不低于0.99，检出限为0.13 ～0.61 μg·kg-1，定量限为0.43 ～2.06 μg·kg-1， 平均回收率为68.7%～96.5%，重复性实验的相对标准偏差在5%以下（n=6）。本实验建立的方法简单、快速、安全、便宜且重现性好，适用于火腿类食品中多种有机磷类农药残留检测，值得广泛推广。